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“在从鸭疫里默氏菌(RA)基因组文库筛选毒力基因的过程中,作者获得了编码RA甲羟戊酸激酶的基因(RAMVA),将该基因片段提交GenBank,收录号为GQ398751。测序分析结果显示其开放阅读框长492 bp,共编码163个氨基酸。根据序列信息设计引物,用PCR方法从RA中扩增出RAMVA的编码区并与表达质粒pMAL-C2X连接,构建重组质粒pMAL-RAMVA。经点击此处限制性酶切和序列测序鉴定序列正确无误后将pMAL-RAMVA转化至E.coliBL21(DE3)构建重组表达菌E.coliBL21/pMAL-C2X-RAMVA。用IPTG诱导重组菌成功诱导RAMVA的表达,通过SDS-PAGE分析表达产物,表达量占全菌总蛋白的15.6%,且重组表达的甲羟戊酸激酶在大肠杆菌中表达时以可溶性状态存在。雏鸭免疫试验表明不要,接种重组表达菌E.coliBL21/pMAL-C2X-RAMVA2周后,可产生对RA致死量攻击达42.3%的免疫保护率。”
“目的研究精脒(SPD)及多胺合成抑制剂α-双氟甲基鸟氨酸(DFMO)对PC12细胞生长特性的影响。方法取对数生长期嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞,分为SPD组和DFMO组分别培养4 d,每天观察PC12细胞生长情况。光学显已经微镜下观察细胞形态学变化;台盼蓝染色法绘制细胞生长曲线。用四氮唑盐(MTT)比色试验检测细胞的生长或抑制,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果SPD作用PC12细胞后细胞数较对照组明显增多,胞体更加粗大,细胞突起更加细长,分支相连。DFMO作用PC12细胞后大部分细胞变圆,细胞突起变短。细胞生长曲线显示SPD组活细胞数明显增多,DFMO组细胞数减少。SPD作用4 d对细胞生长有促进作用,DFMO作用4 d对细胞生长有明显抑制作用。