需要细胞内信号分子的参与,MAPK级联效应是细胞内重要的信号转导系统。近年来,关于MAPK信号转导通路对慢性疼痛的信号转导通路和细胞内信号分子的研究取得了一定的进展[3,4]。因此,本研究从影响DRG可塑性变化的角度探讨MAPK信号转导通路影响吗啡耐受的原因和机制,以探求解决临床吗啡耐受问题的方法。
第一部分：大鼠“炎性痛-慢性吗啡耐受”模型及给予MAPK通道抑制剂模型的建立 目的：建立关节炎大鼠慢性吗啡耐受模型及复合MAPK通道抑制剂模型,探讨MAPK信号转导通路对关节炎大鼠慢性吗啡耐受形成的影响。 方法：鞘内置管成功的成年雄性大鼠45只,随机分为9组(n=5)：A组：CFA后肢致炎后鞘内给予10μl生理盐水,1日2次,连续7d；B组：鞘内给予吗啡10μg/kg(10μl),1日2次,连续7d；C组：CFA后肢致炎后鞘内单次给予吗啡10μg/kg 这个 (10μl);D组：CFA后肢致炎后鞘内给予吗啡10μg/kg(10μl),1日2次,连续7d；E组：A组方法基础上每日首次给药前30min给予10μ125%DMSO;F组：D组方法基础上每日首次给药前30min给予10μ125%DMSO;G组：D组方法基础上每日首次给药前30min给予10μg ERK1/2抑制剂PD98059；H组：D组方法基础上每日首次给药前30min给予10μg p38 MAPK抑制剂SB203580；I组：D组方法基础上每日首次给药前30min给予50μgJNK抑制剂SP600125。每日检测大鼠机械缩爪阈值及热板缩爪潜伏期。 结果：B、D、F、G、H、I组均出现吗啡耐受现象,G、H、I组痛觉过敏程度小于D组。 结论：通过给关节炎大鼠鞘内反复给予吗啡,能够引起炎性痛大鼠的吗啡镇痛耐受。此三种MAPK抑制剂能够抑制炎性痛大鼠吗啡耐受的形成。 第二部分：炎性痛吗啡耐受大鼠背根神经节辣椒素受体蛋白表达分析及MAPK抑制剂作用 目的：观察炎性痛-吗啡耐受大鼠DRG处TRPV1及p-TRPV1表达变化和MAPK信号转导通路对其表达的影响,探讨吗啡耐受的可能机制及MAPK信号转导通路对吗啡耐受形成的影响。
方法：模型的建立、分组及行为学测试方法同第一部分。给药7d后取L4～L6DRG,利用Werstern blot方法测定大鼠DRG处TRPV1及p-TRPV1蛋白表达。 结果：B、D、F、G、H、I组均出现吗啡耐受现象。与其他7组相比,D组及F组TRPV1及p-TRPV1蛋白表达量最高。 结论：吗啡耐受的形成与TRPV1及p-TRPV1在DRG的蛋白表达有关；此三种MAPK信号传导通路参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成。
血管平滑肌细胞(vascular smoooth BVD-523半抑制浓度 muscle cell, VSMC)位于动脉血管中膜,是血管中层唯一的细胞成分。VSMC的异常增殖,导致其由中膜迁移到内膜下间隙,是冠状动脉硬化、经皮穿刺腔内冠状动脉成形术再狭窄以及高血压血管肥厚等疾病的病理基础。因此找到VSMC异常增殖的机制,抑制VSMC异常增殖是治疗这些血管肥厚性疾病的重要途径。
而且 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)是近年来发现的一种新的抑癌基因,是具有双重磷酸酶活性的肿瘤抑制因子,在中枢神经系统、心脏、肝脏、肾脏、胃肠道、肺脏及皮肤等全身多器官均有表达,且参与多种生理过程,尤其是对肿瘤细胞的生长、增殖、分化、凋亡、粘附和迁移均具有重要影响。近年来,对PTEN的研究逐渐从肿瘤领域延伸到其他领域中,随着研究的深入人们发现PTEN在心肌肥大,高血压,动脉粥样硬化,支气管哮喘哮等疾病中也发挥重要的作用。本课题应用血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移,从细胞和分子水平深入探讨AngⅡ是否影响平滑肌细胞中抑癌基因PTEN的活性和表达以及其下游信号通路,发挥促血管平滑肌细胞异常增生和迁移的作用。并且初步探讨血管平滑肌细胞增殖中PTEN的表达如何被调控。 一、血管紧张素Ⅱ促进平滑肌细胞增殖和迁移,抑制凋亡 应用MTT法,CCK-8法及划痕实验,证实AngⅡ可以促进平滑肌细胞的增殖与迁移,并且确定了AngⅡ的最佳浓度和作用时间。经MTT法检测细胞活力,发现1μmol/L以及10μmol/L两个浓度的AngⅡ作用12小时和24小时后均能显著促进平滑肌细胞增殖,而0.1μmol/L AngⅡ作用不及另两个浓度。1μmol/L AngⅡ增殖促进率为12小时13.6%(p<0.001),24小时13.9(p<0.01)和9.8%(p
背景 抵抗素(Resistin, Re)是一种于2001年新发现的具有对抗胰岛素作用的蛋白质。研究发现抵抗素与代谢综合征(metabolic syndrome, MS)中多种炎症因子的产生分泌、动脉粥样硬化的发生发展及血栓性疾病的发生有着密切的联系。血小板在血栓形成过程中起着不可替代的作用,影响着血栓性疾病的发展进程,如急性心肌梗死、下肢深静脉血栓栓塞及卒中。目前尚无研究报道抵抗素对血小板功能的调节。本实验的目的是探讨抵抗素能否改变血小板功能及其可能涉及的信号传导通路。 方法 随机抽取8名健康志愿者的静脉血3ml,制取富血小板血浆(PRP)。1)血小板活化:富血小板血浆与不同浓度的抵抗素(25, 50, 100, 200ng/ml),单独或联合凝血酶(0.