结果:成功构建了pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体并在K562细胞内稳定表达的细胞克隆,经G418筛选后,重组载体能有效沉默Apollon的表达,Apollon mRNA及蛋白表达水平明显下降。MTT结果显示,基因干扰组细胞对VCR、VP16的敏感性明显增强,其半数抑制浓度(half-inhibitory,IC50)值分别R428溶解度为(0.144±0.018)mg/L、(17.336±3.571)mg/L,明显低于细胞对照组(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,基因干扰组细胞联合化疗药物后细胞凋亡率显著升高(P0.05)。结论:pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体能显著增强VCR和VP16对白血病K562细胞的诱导凋亡作用所以,提高K562细胞对化疗药物的敏感性,提示RNA干扰Apollon基因表达能一定程度逆转白血病细胞的多药耐药。
目的:探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默凋亡抑制蛋白Apollon基因表达联合中药川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)能否增强人髓系白血病K5哪里62细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的药物敏感性。方法:依据前期实验筛选出的干扰效果最佳的靶向Apollon的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)片段,构建pGPHI-GFP-Neo-Apollon真核表达载体,应用LipofectAMINETM2000转染白血病K562细胞,G418稳定筛选。