实验中组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA处理PCCL3/BRAF和BCPAP细胞作为组蛋白乙酰化水平改变的阳性对照。大鼠钠碘同向转运体

实验中组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA处理PCCL3/BRAF和BCPAP细胞作为组蛋白乙酰化水平改变的阳性对照。大鼠钠碘同向转运体NIS启动子区域划分为7段区域:EXON(-20/104), P1(-297/-107),P2(-477/-277),P3(-678/-452),P4(-1124/-950),P5(-1874/-1713),NUE(-2627/-2342)。人钠碘同向转运体NIS启动子区域划分为5段区域EXON(42/399), P1(-692/-370),P2(-1147/-762),P3(-1511/-1216),NUE (-9525/-9287)。运用染色质蛋白免疫共沉淀CHIP技术检测大鼠钠碘同向转运体NIS启动子区域组蛋白不同乙酰化位点乙酰化水平的改变。 结果显示BRAFV600E突变体在PCCL3/BRAF细胞和PCCL3细胞表达时,大鼠钠碘同向转运体NIS基因mRNA表达水平在48h降低了50%到60%。细胞总体组蛋白乙酰化水平略有增加。染色质蛋白免疫共沉淀CHIP结果显示大鼠钠碘同向转运体NIS启动子区域:PCCL3/BRAF细胞诱导表达BRAFV600E突变时,组蛋白H3更多K9/14乙酰化位点在P1,P2和P3区域乙酰化水平降低,然而PCCL3细胞瞬时转染BRAFV600E突变时外显子EXON和P1区域H3K9/14乙酰化水平降低。在PCCL3/BRAF细胞中SAHA可以提高大鼠NIS启动子P1, P3,P4和NUE区域H3K9/14乙酰化水平。在PCCL3/BRAF和PCCL3细胞中,BRAFV600E突变仅影响H3K18和总H4大鼠NIS启动子P1和P2区域乙酰化水平。

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