5g/kg·d给治疗组灌胃30天，观察各组大鼠一般情况，称体重；用放射免疫法检测各组大鼠性激素水平；用精子自动检测仪检测精子的密度及活率；用免疫组织化学法检测各组大鼠睾丸中TGF-β1/CYP19的表达。 研究结果：模型组大鼠体重与对照组相比明显减轻（P﹤0.05），与正常对照组相比，模型组T、E2显著降低(P0.05)；精子密度显著降低（P﹤0.05），精子活率显著减弱（P﹤0.05）；免疫组化结果显示，TGF-β1和CYP19均表达于睾丸长形精子细胞，模型组大鼠睾丸TGF-β1的表达显著高于对照组，而金匮肾气丸治疗后，其表达略有降低，但金匮肾气丸治疗组TGF-β1的表达仍高于正常对照组，模型组大鼠CYP19的表达明显低于正常对照组，而金匮肾气丸治疗组的表达略高于模型组而低于正常对照组。
研究结论：金匮肾气丸能够显著增加肾阳虚大鼠的体重、血清性激素水平及精子的密度与活率，降低肾阳虚大鼠睾丸中TGF-β1的表达，同时能增加CYP19基因的表达。 第二部分：阻滞TGFβRⅠ后肾阳虚大鼠精子生成及 TGF-β1/CYP19的表达 研究目的：观察显微注射后大鼠性激素水平、精子密度及活率、TGF-β1/CYP19的表达等。 研究方法：将40只成年雄性SD大鼠随机分为4组：正常组、模型组、正常+阻滞组、模型+阻滞组，每组10只。20只成年雄性SD大鼠进行显微注射TGFβRⅠ阻滞剂，阻滞TGF-β1表达；检测大鼠的性激素水平；用精子自动检测仪检测精子的密度及活率；用免疫组织化学法观察各组大鼠睾丸中TGF-β1/CYP19的表达。研究结果：进行显微注射后，模型组、正常+阻滞组、模型+阻滞组与正常组比较，血清T及E2水平升高，精子密度及活率升高，均具有统计学意义(P0.05)；免疫组织化学染色结果显示，TGF-β1/和CYP19阳性表达位于长形精子细胞，两组大鼠TGF-β1/和CYP19表达均无显著差异，但较正常组大鼠相比，TGF-β1表达仍较高，而CYP19表达仍较低。
Target Selective Inhibitor Library concentration 研究结论：金匮肾气丸能显著改善模型大鼠的肾阳虚症状，增加精子生成，其机制可能是通过抑制了TGFβRⅠ的表达，进而影响了精子生成，为进一步探讨金匮肾气丸治疗雄性生殖障碍的机制提供了可靠的实验依据。
研究目的 骨质疏松症是一种以骨量低下、骨微结构破坏,导致骨脆性增加、易发生骨折为特征的系统性、全身性骨病。在老年人群及绝经后妇女中骨质疏松发病率很高,严重影响了生活质量。据统计,60岁以上老年人中,患此症的比例达60%-80%,骨质疏松症已成为一个全球性的健康问题,该病的预防和治疗已经成为我国公共卫生事业面临的严峻问题。目前,用于治疗骨质疏松的药物可分为1、抗骨吸收的药物,如降钙素、维生素D、雌激素、双膦酸盐等。2、增加骨形成的药物,如氟化物、甲状旁腺激素等。3、具有促进骨形成和抑制骨吸收双重作用的药物,雷奈酸锶(strontium 点击此处 ranelate)。由于雷奈酸锶在抑制骨吸收的同时促进骨的形成,因此,比起传统的治疗骨质疏松症药物,雷奈酸锶在影响骨代谢方面具有双重作用,锶盐代表了在骨质疏松症治疗史上一个新的发展方向。目前对其在抗骨质疏松症方面的研究已成为热点。 骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)是一种多潜能成体干细胞,具有向成骨细胞分化的能力。在BMSCs向成骨细胞分化中,受到多种信号通路调控,其中TGF-p(研究转化生长因子β1、transforming growth factor β1)、 BMPs(骨形态发生蛋白,bone morphogenetic selleck抑制剂 proteins)、Wnt、MAPK(丝裂原活化蛋白激酶,mitogen-activated protein kinase)和Hedgehog(刺猬蛋白信号通路)信号通路发挥了重要作用。TGF-β在骨形成和骨吸收中的平衡方面起重要作用,可促进骨髓间充质干细胞向成骨分化,抑制其向破骨细胞分化,它在骨重建过程中的作用逐渐成为人们研究的热点。Smads蛋白直接参与TGF-β超家族成员的信号转导过程,它作为TGF-β下游的信号蛋白分子,将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内,是TGF-β信号转导通路的始动因子。Runx2又称为核心结合因子al
(Cbfα1),是一种多功能转录因子蛋白,在成骨细胞的分化和骨形成方面起重要的作用,TGF-β、BMP-2等多种因子可作为Runx2的上游调节因子调节Runx2的活性。 我们前期研究已经证实Sr可通过上调TGF-β1和Runx2表达来促进BMSCs向成骨细胞分化。因此,本实验在前期研究基础上进一步阐明Sr是否通过TGF-β1/Smad信号通路诱导BMSCs向成骨分化。 1.材料与研究方法 1.1、BMSCs的获取取四周龄SD大鼠颈推脱臼处死,75%乙醇浸泡5-10min,无菌操作下取双侧股骨和胫骨,剪去干垢端,用无菌注射器吸取含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素G和100mg/ml链霉素的DMEM/F12培养液反复冲洗骨髓腔得到骨髓细胞悬液,并移至15ml离心管；1000r/min,5min离心,制成单细胞悬液,以1-3x105cells/cm2接种于25cm2培养瓶中,置于37℃、5%CO2培养箱内进行培养；24h后半量换液,以后每2-3d换液一次；倒置显微镜下观察细胞,至细胞融合至80%时进行传代,此后每隔3-4d传代一次。 1.2、BMSCs的成骨诱导选取第3-5代BMSCs,将细胞种植于培养皿或培养板中,待细胞贴壁后加入成骨诱导液(含10%胎牛血清、100U/ml青霉素及100μg/ml链霉素、10-8mol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/ml抗坏血酸的DMEM/F12培养基)培养。 1.3、Western blotting法检测p-Smad2、Smad2和Runx2蛋白的表达水平选取第3代细胞,接种于60mm培养皿中,收集细胞时,先用预冷的PBS洗2遍,加入细胞裂解液,4℃裂解20-30min,在冰上用预冷的细胞刮刀将细胞刮下移至1.