为了快速检测危害无花果的病毒种类,本研究建立了一种同时检测3种危害无花果的病毒的多重RT-PCR检测体系,包括无花果斑点相关病毒(FFkaV)、无花果叶斑相关病毒(FLMaV)和无花果花叶病毒(FMV)。根据三种病毒基因保守区域设计特异性引物,分别对cDNA用量、dNTPs用量、Easy pfu DNA聚合酶用量、MgSO_(4)用量、退火ALK 抑制剂温度和引物组合进行优化,并利用RT-PCR进行验证。结果显示,总体积为25 μL的反应体系中Easy pfu DNA聚合酶(2.5 U/μL)用量0.7 μL、cDNA用量1.0 μL、dNTPs (2.5 mmol/L)用量2.5 μL、MgSO_(4 )(50 mmol/L)用量1.2 μL、引物组合为1.5 μL,1点击此处.0 μL,0.3 μL、ddH_(2)O为14 μL 、退火温度56℃时能够扩增出清晰的目的条带,该检测体系的检测极限为6.8 ng/μL的cDNA。田间样品的检测结果表明,该方法能够快速、准确地检测这3种无花果病毒,可用于田间无花果样品的检测。本研究建立的多重RT-PCR检测体系为无花果病毒的检测与防控提供技术支持。 还有
酵母双杂交和单杂交技术是筛选蛋白质互作或蛋白质与DNA互作的一种高效分子生物学技术,是生物大分子互作和调控的重要的手段。为了获得高容量的蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)基因文库,为后续深入挖掘蒺藜苜蓿相关基因,改善蒺藜苜蓿品质提供基础。本研究选取了不同组织来源的蒺藜苜蓿,并对蒺藜苜蓿进行不同的激素诱导或胁迫处理,利用SMART技术成功构建高容量的蒺藜苜蓿酵母杂交cDNA文库。