使用TET1 sh RNA和TET1过表达质粒在胃癌细胞系中敲低和过表达TET1,后续使用CCK-8,划痕实验和transwell实验来观察TET1对胃癌细胞生物学行为的影响。使用实时定量PCR(q PCR)检测了TET1相关靶基因的表达量,并对这些潜在的靶基因的启动子区域使用亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)来检测甲基化的程度。后续我们使用Glu MS-PCR检测了相关基因启动子区selleck合成域的5-hm C的含量。在本研究中,我们还使用了Western blot检测了TET1敲低和过表达后AKT和FAK通路的活化状态,以明确TET1对胃癌细胞的影响是通过何种途径发挥作用的。在实验的最后,我们使用裸鼠皮下成瘤和腹膜转移模型来说明TET1敲低后在体内实验中增加了胃癌细胞的增殖和转移。结果(1)我们发现相对于癌旁组组织,TET1的表达在胃癌组织中BKM120分子量明显降低(Wilcoxon检验p=0.036),同时基因组的羟甲基化的水平在肿瘤组织中也明显下降;(2)Kaplan-meier分析显示TET1高表达的胃癌患者的生存要优于TET1低表达的患者(p<0.01)。(3)在胃癌细胞系NCI-N87中敲低TET1可以通过CCK-8实验明显地观察到胃癌细胞的增殖(p<0.05),同时迁移和侵袭能力也增强(p<0.PF-02341066价格01)。而在SGC7901中过表达TET1可以明显抑制胃癌细胞增殖(p<0.05)和转移能力(p<0.01);(4)TET1可以引起经典的胃癌相关基因如PTEN启动子区域羟甲基化和甲基化的改变,TET1在NCI-N87中敲低后,PTEN启动子区域甲基化从1.5%升高到12%,而TET1在SGC7901中过表达之后,PTEN启动子区域甲基化从3%下降到0.9%。通过Ch IP我们证明了TET1可以结合至PTEN的启动子区域对其进行调控。