在第三部分中,着重于LASS2影响HCCLM3细胞对酸性微环境应答的研究,分三组实验进行。 1、在酸性微环境中,LASS2对HCC

在第三部分中,着重于LASS2影响HCCLM3细胞对酸性微环境应答的研究,分三组实验进行。 1、在酸性微环境中,LASS2对HCCLM3细胞溶酶体影响的研究: 我们使用吖啶橙染料对活细胞的溶酶体进行染色,使用激光共聚焦显微镜对活细胞进行观测。成像结果显示,当培养基由碱性(pH 7.4)变为酸性(pH6.6)时,对照组细胞内的溶酶体由核周向细胞边缘及细胞触角内迁移Bcl-2抑制剂,而LASS2组细胞内溶酶体的位置无改变。 2、在酸性微环境中,LASS2对HCCLM3细胞MMP-2影响的研究: 当LASS2组与对照组细胞分别用不同pH值(pH 7.4、pH 7.0、pH 6.6)的细胞培养基培养后,通过对细胞蛋白及无血清细胞培养上清用MMP-2抗体进行western blot检测,结果显示,LASS2基因对细胞内的MMP-2合成并无影响,但抑制细胞MMP-2的分泌。而以明胶(A型)为底物的进行Zymography分析及细胞原位酶谱实验,结果显示LASS2组细胞MMP-2的激活受到了明显的抑制。当细胞外周微环境向酸性变化时,LASS2依然抑制MMP-2的分泌与激活。 3、在酸性微环境中,LASS2对HCCLM3细胞转移影响的研究: 体外肿瘤细胞侵Selleck Compound C袭实验、迁移实验、黏附实验证实,当细胞外周微环境向酸性变化时,LASS2依然明显抑制HCCLM3细胞的转移。 上述结果进一步证实,LASS2蛋白结合ATP6L亚基后,通过抑制ATP6L在细胞内的移动,不仅导致V-ATPase的失活,还导致了肿瘤细胞内的溶酶体在酸性微环境的下无法从胞核周向细胞触角及细胞膜边缘迁移,从而导致肿瘤细胞MMP-2的分泌与激活受到明显的抑制,并造成肿瘤细胞在酸性微环境下的转移能力无明显改变。

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