方法建立紫薯素干预~(60)Coγ辐射小鼠胸腺细胞的模型。应用MTT,首先检测~(60)Coγ辐射在0~12h范围内对小鼠胸腺细胞

方法建立紫薯素干预~(60)Coγ辐射小鼠胸腺细胞的模型。应用MTT,首先检测~(60)Coγ辐射在0~12h范围内对小鼠胸腺细胞活力的影响,~(60)Co分为0,2,4,6Gy四个不同剂量进行单次辐射。不同剂量的紫薯素预处理细胞,MTT检测紫薯素对辐射细胞活力的影响、抗辐射的有效剂量以及其有无毒性反应。紫薯素对辐射细胞的作用检测可能中,通过DNA ladder检测细胞晚期凋亡;以流式细胞仪Annexin V-FITC/PI染色检测细胞早期凋亡;流式细胞仪PI染色检测细胞周期。 探讨紫薯素辐射防护作用的机制。测定紫薯素对氧化应激的影响:2,7-二氯氢化荧光素二酯(DCFH-DA)为荧光探针,检测紫薯素对~(60)Co照射后细胞内活性氧获悉更多(ROS)的影响;酶生化法测定抗氧化酶过氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧物酶(GSH-px)的活力。研究紫薯素对~(60)Co诱导小鼠胸腺细胞凋亡的线粒体通路的影响:JC-1荧光染色测定线粒体膜电位;western-blot检测细胞色素C、caspase3和PARP的蛋白表达以及Bcl-2和Bax的蛋哪里白表达;对caspase 3和caspase 9进行酶活性检测。研究紫薯素对~(60)Co诱导小鼠胸腺细胞凋亡的死亡受体通路的影响:RT-PCR检测Fas mRNA;western-blot测定FADD的蛋白表达;caspase8酶活性的检测。检测紫薯素对~(60)Co诱导小鼠胸腺细胞的MAPK途径的影响:western-blot测定磷酸化的ERK、JNK、p38MAPK的蛋白表达。

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