细胞感染48h后,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Tum5重组基因体外表达。将RF/6A细胞分为正常对照组、高糖刺激对照组(HG组),空载体对照组(HG+rAd-GFP组),Tum5基因组(HG+rAd-Tum5组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、侵袭小室(Transwell)实验及基质胶(Matrigel)实验分析Tum5重组基因对高糖刺激下RF/6A细胞Selleckchem SU5416增生、迁移及管腔形成的影响。结果流式细胞仪检测结果显示,rAd-GFP、rAd-Tum5感染细胞的效率分别为55.13%、50.31%。Western blot检测结果显示,HG+rAd-Tum5组在相对分子质量14×103左右处可见Tum5蛋白表达条带;正常对照组、HG组、HG+rAd-GFP组均未见Tum5蛋白表达条带。CCK-8、TranswellNSC 23766购买实验及Matrigel实验结果显示,正常组、HG组、HG+rAd-GFP组、HG+rAd-Tum5组4组间细胞增生数量、迁移数量及成形管腔数量比较,差异均有统计学意义(F=44.484、772.666、137.696,P<0.05)。组间细胞增生数量、迁移数量及成形管腔数量两两比较结果显示,HG组较正常对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);HG组更多与HG+rAd-Tum5组之间无明显差异(P>0.05);HG+rAd-Tum5组较HG组、HG+rAd-GFP组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论腺病毒介导Tum5重组基因可抑制高糖刺激下RF/6A细胞的增生、迁移及管腔形成。
<正>创伤愈合是机体发生损伤后的一种防御适应性的组织修复过程,通常分为炎性反应期、增生期和重塑期3个生理功能不同而又重叠的阶段,研究表明整个创伤愈合过程都存在相对缺氧的微环境[1]。