结果表明 PCR扩增得到1 277 bp的β_2-AR全基因序列,其中包含一个1 257 bp的开放阅读框,编码418个氨基酸残基;蛋白跨膜区段分析显示其第二细胞外环(pβ_2-AR-E_Ⅱ)位于第170～200位氨基酸,由93对碱基编码;设计并合成的DNA序列(D-E_Ⅱ)共201 bp;构建的重组质粒pET-也许32a-D-E_Ⅱ经双酶切后得到两条预期大小的片段,测序显示插入序列与D-E_Ⅱ序列一致。说明猪β_2-AR第二细胞外环基因原核表达载体构建成功。
【目的】观察消癖颗粒单药及联合他莫昔芬对乳腺癌细胞增殖、迁移、克隆、凋亡及细胞内DNA损伤程度的影响,探讨消癖颗粒与他莫昔芬的协同抗或者癌作用。【方法】选取雌激素受体(ER)+、孕激素受体(PR)+人源乳腺癌细胞MCF-7和T47D,将消癖颗粒、他莫昔芬单药或联合用药加入对数生长期的MCF-7和T47D细胞中,以不加药同期培养的细胞作为空白组。分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、乳酸脱氢酶(LDH)实验、酶联免疫吸附测定Oligomycin A法(ELISA)、划痕实验、球囊形成实验、平板克隆实验及原位末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)标记法(TUNEL)和Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染色法检测干预后乳腺癌细胞MCF-7和T47D的生物学表现。【结果】消癖颗粒、他莫昔芬单药或联合用药均有抑制乳腺癌细胞MCF-7和T47D增殖的作用,呈浓度依赖性,且联合用药组抑制率高于单药组(P<0.05)。