05）。 （4）JAK2阻断下FasL诱导细胞凋亡率变化 对于悬浮培养的结直肠癌细胞CRC29，JAK2特异性抑制AZD1480和CEP33779阻断JAK2活化，2h后在培养体系中加入杀伤剂量（20ng/ml）的FasL，作用2天后检测CRC细胞凋亡。AZD1480和CEP33779两组中CRC29细胞凋亡率分别为33.52%、38.76%，AZD1480预先抑制JAK2活化后FasL诱导CRC29细胞凋亡增至41.20%、45.19%，CEP33779预先抑制JAK2活化后FasL诱导CRC29细胞凋亡增至62.34%、62.65%。 （5）JAK2抑制后与EMT相关的蛋白表达及转录因子水平发生变化 ①CRC29细胞系在悬浮培养条件下，与IL-6刺激的CRC29细胞系相比，受到JAK2抑制的CRC29细胞系Caveolin-1表达减低，E-cadherin表达升高，共聚焦显微镜下可见到实验组细胞－细胞连接处Caveolin-1荧光信号减弱，E-cadherin荧光信号明显增强。②CRC29细胞系在悬浮培养条件下，与IL-6刺激的CRC29细胞系相比，受到JAK2抑制的CRC29细胞系HIF-1、ZEB-1、FABP、Snail-1、等基因mRNA表达降低，其中ZEB-2、Snail-2和HIF-2变化最为明显，vimentin表达增加。
3.特异性阻断JAK2对CRC细胞CD95表型的影响 （1）FasL能够刺激CRC细胞分泌细胞因子变化 FasL作用24h后CRC细胞分泌IL-8、IL-15R alpha水平升高，而预先加入CEP33779抑制JAK2活化的CRC细胞分泌IL-8水平进一步升高。 为什么 （2）转染CD95-YFP细胞株对FasL及JAK2阻断的反应 对成功转染了CD95-YFP质粒并稳定表达CD95-YFP的结直肠癌细胞系CRC29，分别用FasL、CEP33779、CEP33779预处理1h而后FasL（CEP33779→FasL），作用1h后，给予固定，随后通过荧光显微镜观察细胞膜上带有黄色荧光信号的CD95的表型变化，即是否聚集成为活性形式，对照组以等浓度的DMSO作用于培养体系，结果发现在JAK2阻断1h后，细胞膜表面荧光强度明显高于对照组，而CEP33779→FasL处理组CRC细胞表面CD95表达明显耗减。
BLU9931价格 结论 1.对多个结直肠癌数据库的生存曲线荟萃分析得知，结直肠癌组织中CD95和JAK2高表达，患者的生存期较短。 2.结直肠癌数据库中CD95与JAK2在表达、功能相关通路等方面的相关性分析表明，CD95与JAK2在结直肠癌组织中的高度相关性，主要体现在肿瘤的免疫反应、炎症反应、JAK2/STAT3信号通路、上皮-间质转化（EMT）几个方面。 3.体外培养的结直肠癌细胞在增殖过程中，JAK2/STAT3处于较低水平的活化状态，特异性阻断JAK2/STAT3通路能够降低或完全抑制肿瘤细胞的克隆形成能力，提示JAK2在肿瘤细胞增殖方面具有关键作用；特异性阻断JAK2/STAT3通路在一定程度上抑制了肿瘤EMT，从而对肿瘤细胞的迁移可能产生一定的抑制作用；而JAK2/STAT3的过度活化则促进肿瘤细胞增殖。JAK2抑制不能诱导CRC细胞凋亡，而FasL可诱导肿瘤细胞凋亡增多。 4.通过转染CD95-YFP报告基因并使其稳定表达CD95的结直肠癌细胞系CRC29（CRC29CD95-YFP），抑制JAK2/STAT3通路有助于肿瘤细胞表面CD95单体寡聚化形成转变成活性形式，为介导细胞凋亡提供细胞表面结构条件，从而证明JAK2对CRC细胞膜上CD95具有一定的稳定作用。
猪传染性胃肠炎(Transmissible Epigenetics抑制剂 gastroenteritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis
virus,TGEV)感染引起的以仔猪严重腹泻、脱水、呕吐为主要临床特征的高度接触性传染病。该病最早于1946年在美国确认,目前已在多个国家广泛流行,给养猪业造成了严重的经济损失。早期的报道显示,TGEV作为一种肠道冠状病毒,能够诱导高水平的I型干扰素的产生,同时也引起肠道组织的炎性损伤,钠、钾离子严重失衡,进而导致仔猪严重腹泻脱水致死。这提示我们该病毒与宿主天然免疫应答密切相关,炎症反应在其致病性方面扮演着十分重要的角色。然而,目前对该病毒如何介导天然免疫应答引起宿主细胞的信号转导机制知之甚少。因此,本研究利用蛋白质组学技术分析了TGEV与宿主细胞蛋白之间的互作,并且对TGEV感染诱导炎症反应的细胞信号转导机制进行了研究。具体研究内容如下:1.TGEV感染PK-15细胞的蛋白质组学研究为了了解TGEV感染对宿主细胞蛋白表达的影响,利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation,i TRAQ)技术,配合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS),对TGEV感染PK-15细胞的蛋白表达情况进行了检测和分析。共鉴定出162个差异表达的蛋白,包括60个表达上调的蛋白和102个表达下调的蛋白。随后利用生物信息学技术对差异表达蛋白的亚细胞定位、生物学进程聚类进行了分析,并绘制了互作网络图,发现差异表达的蛋白与细胞周期、细胞的生长与分化及天然免疫反应等多种生物进程相关。并且上调倍数位居前列的9个蛋白均与I型干扰素信号通路(interferon signaling pathway),尤其是信号转导子和转录激活子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)以及8种重要的干扰素刺激基因(interferon stimulated genes,ISGs)密切相关。为了验证蛋白质组学结果的可靠性,进一步通过Western blot或Real-time RT-PCR方法对STAT1和8个ISG的表达进行了检测,结果与蛋白质组学结果一致。为了确定TGEV感染是否激活JAK-STAT1信号通路,对TGEV感染后STAT1的磷酸化情况和亚细胞定位进行了检测,结果 TGEV感染PK-15细胞后能够诱导STAT1的磷酸化和转位入核,说明TGEV感染能激活JAK-STAT1信号通路并诱导ISGs的产生。2.