05），术后14天AS-IV组的细胞凋亡程度较UUO组减轻（P<0.05），而黄芪甲苷干预显著改善MAPK信号蛋白的激活（均P<0.05），细胞凋亡增多（P<0.05），减少细胞凋亡的发生（P
目的：胡椒碱(Piperine,Pip)是胡椒(Piper
nigrum Linn)和荜茇(Piper longum Linn)等胡椒属植物果实中提取的一种植物碱,是胡椒中发挥药理作用的主要成分。近年的研究表明胡椒碱具有明确的抗炎效应并且对多种胃肠疾病具有疗效,但关于胡椒碱在肠炎方面的研究很少,其抗肠炎作用的机制也还不够清楚。本课题通过利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或灭活的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus cells,SAC)分别刺激人结肠癌细胞系(SW480、HT-29和Caco-2细胞),体外模拟人肠道感染细菌发生炎症,检测Pip对LPS或SAC作用下这些细胞表达炎症因子、抗菌肽防御素以及对NF-κB信号通路、MAPKs信号通路活化的影响,初步探讨Pip发挥抗肠炎作用的机制。方法:1.采用改进的MTT法(WST-1)检测Pip对SW480、HT-29、Caco-2细胞增殖的作用;利用流式微球捕获蛋白定量技术(Cytometric 点击此处 beads array,CBA)检测Pip对LPS刺激SW480和HT-29细胞分泌炎症因子IL-8和IL-10的蛋白表达水平的影响,并用RT-q PCR(Reverse Transcription-Quantitative BVD 523 PCR)检测炎症因子m RNA表达水平的变化;免疫印迹法(Western blotting)检测Pip对LPS活化的SW480细胞NF-κB信号通路、ERK、p38 MAPK和JNK信号通路的调节作用;利用CBA和RT-q PCR分别在蛋白质水平以及m RNA水平上分析p38MAPK和JNK信号通路阻断情况,即在SB203580(p38
MAPK信号通路抑制剂)和SP600125(JNK信号通路抑制剂)作用下,对LPS刺激SW480和HT-29细胞表达IL-8的影响。2.利用RT-q PCR检测Pip对LPS和SAC抑制HT-29、Caco-2细胞表达抗菌肽人α防御素HD5(human alpha-defensin-5)和HD6(human alpha-defensin-6),人β防御素HBD-1(human beta-defensin-1)以及胰岛再生源蛋白(regenerating islet-derived protein,Reg)RegⅢγm Y-27632 价格 RNA的调节作用。结果:1.Pip处理可剂量依赖性地抑制SW480、HT-29和Caco-2细胞的增殖,半数抑制浓度IC50分别为147.6μM、328.5μM和155.1μM,表明Pip对这些细胞的毒性较小。CBA和RT-q PCR检测结果显示Pip能从蛋白质水平及m RNA水平上抑制由LPS诱导的SW480和HT-29细胞表达IL-8,且蛋白质水平上的抑制作用呈现剂量依赖关系;而免疫印迹分析表明,Pip可抑制LPS诱导的p38 MAPK和JNK信号通路的活化;CBA和RT-q PCR检测结果显示使用SB203580抑制p38 MAPK信号通路后,由LPS诱导的细胞表达IL-8无论在蛋白质水平及m
RNA水平上均有显著下调。2.RT-q PCR检测显示,HT-29和Caco-2细胞HD5、HD6的m RNA表达水平在LPS或SAC的刺激下均有显著下降,而Pip对LPS或SAC下调HT-29和Caco-2细胞表达抗菌肽防御素具有显著的拮抗作用。结论:1.Pip能抑制LPS刺激的SW480和HT-29细胞分泌炎症因子IL-8从而发挥抗炎作用,其机制很可能与抑制p38 MAPK和JNK信号通路活化有关。2.Pip可能通过拮抗病原体诱导肠上皮细胞表达抗菌肽防御素的抑制作用,进而发挥其抗肠炎作用。
在哺乳动物的体内,含硫氨基酸在胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的催化下可以产生内源性硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)。内源性H2S具有广泛的生理调节功能,在炎症性疾病的发生发展过程中同样发挥着重要作用。在内毒素和感染性休克时,血浆H2S含量、体内多个组织内源性H2S的生成以及CSE的表达和活性均显著增加,而CSE表达上调的机制尚不明确,本研究第一部分首先在小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7细胞证实了内毒素脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)能够显著上调CSE mRNA和蛋白表达,继而研究了LPS诱导CSE表达的信号转导机制。结果发现, PKC、PI3K和NF-κB信号通路参与了LPS诱导CSE表达的过程。糖皮质激素(glucocorticoids, GCs)是临床常用的抗炎抗休克药物,已有大量资料表明GCs可以抑制体内另一种在内毒素和感染性休克中发挥重要作用的内源性气体分子一氧化氮生成以及一氧化氮合成酶的表达,然而GCs对内源性H2S的生成有何调节作用目前尚不清楚,因此本研究第二部分探讨了糖皮质激素(地塞米松,DEX)对RAW264.