05）；DC组大鼠GSK3α和GSK3β的蛋白表达显著升高（p<0.05）；DCE组GSK3α和GSK3β的蛋白表达与DC组相比显著下降（p<0.05）；P-GSK3α与P-GSK3β显著升高（p<0.05）；DC组大鼠肝脏中AKT2与P-AKT2蛋白表达较CON组均呈下降趋势（p<0.05），而长期耐力运动干预后，DCE组大鼠的AKT2与P-AKT2蛋白表达升高（p
阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)是一种脑部原发性神经退行性病变,主要病理特征包括三方面:老年斑形成、神经元的变性或丢失以及神经纤维缠结。EGCG是茶多酚的主要成分,在机体中有广泛的生物活性,利于预防与氧化应激有关的疾病,比如阿尔茨海默病、帕金森症等。随着全球老龄化的来临及社会竞争压力的增大,AD的发病率日益增加,并已影响到患者及家人的生活质量,因此开发AD的治疗药物迫在眉睫。 [目的]观察EGCG对于SAMP8小鼠的海马神经元在衰老过程中的保护作用。[方法]提取一天新生SAMP8、SAMR1小鼠海马原代神经元。将海马神经元接种于直径为35mm培养皿中,培养液为含20%胎牛血清的DMEM,24h后更换培养液为Neurobasal+2%B27,培养72h后再次换液,细胞培养到第4天时加入不同浓度的EGCG,共培养13天。1.用MTT方法测定适宜的EGCG浓度;2.应用免疫组化的方法观察EGCG对神经元的保护作用;3.用蛋白质杂交的方法检测tau蛋白磷酸化途径中的cdk5、pTauS~(199)、ptauS~(396)、pGsk3βS9的表达。[结果]1.MTT实验表明:用不同浓度的EGCG处理SAMP8小鼠海马神经元后发现:浓度>20μg/mL的EGCG会抑制神经元的生长并导致其死亡,而浓度为
大量研究表明,原癌基因RET和Hedgehog

Decitabine供应商 (Hh)信号通路的异常表达均与发育和肿瘤的发生发展密切相关,但RET是否调控Hh通路却鲜有报道。基于以上疑问,本研究首先借助Hh靶基因Gli-1的双荧光素酶报告基因系统,发现内源表达RET的成神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y经RET蛋白激活物胶质细胞源性神经营养因子(Glial

获悉更多 cell-line derived neurotrophic factor, GDNF)处理,Gli-1报告基因的活性增加。进一步在293T细胞和SH-SY5Y细胞中共转RET过表达质粒和Gli-1报告基因质粒,发现在这两种细胞系中过表达RET均可增加Gli-1报告基因活性,证实RET参与调控Hh通路。过表达RET下游分子Akt的激活形式可增加Gli-1报告基因活性。而使用MK-2206抑制Akt活性或慢病毒敲降Akt后,激活RET并不能上调Gli-1的mRNA水平,证实RET通过Akt调控Hh通路。进一步,为研究Hh通路中的哪个分子是RET调控的靶点,我们利用Cyclopamine特异性抑制该通路的关键分子Smoothened (SMO)的活性,发现激活RET依然能增加Gli-1的mRNA水平,提示RET可能作用于膜受体SMO的下游。通过对SMO下游相关分子PKA、GSK3β、CK1的磷酸化水平检测,发现激活RET或Akt能降低GSK3β的磷酸化。因GSK3β负向调控Hh通路,抑制GSK3β则可激活Hh通路,且该作用不受MK-2206或RET敲降影响,提示RET/Akt可通过抑制GSK3P活性来激活Hh通路。最后,细胞增殖试验表明,RETshRNA.MK-2206以及Cyclopamine处理SH-SY5Y细胞,都能抑制该肿瘤细胞的增殖能力。综上所述,本研究初步证明RET可通过激活Akt,进而抑制GSK3β的磷酸化,最终激活Hh通路来影响肿瘤细胞的增殖水平。
目的:通过研究糖基化终末产物(AGEs)对培养的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的生长状态、β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)的表达及淀粉样前体蛋白(APP)mRNA、糖基化终末产物受体(RAGE)mRNA表达的影响,在细胞水平探讨AGES在阿茨海默病(Alzheimer’s

无 disease,AD)发病中的作用及其可能的机制;并用α硫辛酸(α-lopoic acid,α-LA)对细胞进行干预,在体外观察α-LA对神经细胞是否有保护作用,为其开发利用提供理论基础。 方法:体外人工孵育AGE-BSA,以培养的SH-SY5Y细胞为模型,将细胞随机分成五组,第一组分别加入不同蛋白浓度的BSA(0、20、40、80、160、320ug/ml)处理48小时;第二组分别加入不同蛋白浓度的AGE-BSA(0、20、40、80、160、320ug/ml)处理48小时;第三组不同浓度(0.01、0.1、1g/l)α-LA提前半小时干预细胞,然后加入蛋白浓度为160ug/ml的AGE-BSA处理48小时;第四组0.