2.USP39参与卵巢癌细胞的剪接调控免疫共沉淀拉下与USP39相互作用的蛋白质并进行质谱检测,结果发现与USP39结合的蛋白大多是RNA结合蛋白和剪接相关蛋白。免疫荧光检测USP39在细胞中的定位,结果发现USP39与核散斑的标志物SC35存在共定位。核散斑是剪接因子聚集和组装的场所,提示USP39可能参与剪接调控。磷酸化的SF3B1是催化活性剪接体的标志物。Western CopanlisibBlot结果表明,过表达USP39后磷酸化的SF3B1水平升高;相反,敲低USP39后磷酸化的SF3B1水平降低。剪接报告基因的荧光素酶试验结果同样表明,敲低USP39后剪接效率降低。RNA-seq结果表明,USP39调控多个可变剪接事件,其中数量最多的是外显子跳跃。USP39敲低后,内含子含量升高,全基因组5’剪接效率和3’剪接效率均降低。RIP-sSelleck Ulixertinibeq检测与USP39蛋白结合的RNA序列,reads分析和peak分析发现,USP39结合最多的是内含子区域,且主要分布在内含子-外显子及外显子-内含子连接处。RIP-seq识别出分布在161个基因上的368个USP39结合峰,对与USP39结合的161个基因进行GO分析,结果显示转录共激活因子占比最多。综合RNA-seq和RIP-seq结果,将USPselleck Metabolism 抑制剂39敲低后基因表达水平降低、USP39敲低后剪接效率降低和USP39结合的基因这三者取交集,共筛选出11个USP39的候选靶基因,半定量PCR验证USP39对其中4个候选靶基因的调控作用并将HMGA2作为进一步研究的下游基因。3.USP39促进HMGA2的有效剪接并上调其表达RNA-seq结果表明,USP39敲低后,HMGA2的1 1条转录本表达均降低。剪接效率分析发现,USP39敲低后,HMGA2的5’剪接效率和3’剪接效率均下降。