32ug/ml。 结结论 1.成功克隆了人源抗c-Met单链抗体基因; 2.正确构建了c-Met/PE38KDEL融合基因并成功表达融合蛋白; 3.重组免疫毒素c-Met/PE38KDEL对人肝癌细胞系SMMC-7721有较好的生长抑制作用。
肝细胞肝癌是发病率位居全球癌症中第6位,死亡率为第3位的恶性肿瘤。2002年全球新发肝细胞肝癌病例估计超过62万,由于预后较差,肝癌死亡病例几乎与新发病例一致,达到59.8万。肝细胞肝癌的发病率具有明显的地区差异,东亚、东南亚国家和热带非洲的肝细胞肝癌发病率最高。中国是肝细胞肝癌的高发地区之一,全球55%的肝细胞肝癌病例发生在中国。宏观流行病学研究发现,肝癌主要的环境危险因素包括慢性肝炎病毒(HBV/HCV)感染、饮食摄入黄曲霉毒素和饮水中的微囊藻毒素等,其中HBV和HCV病毒感染是最常见的肝细胞肝癌致病因素。研究表明,75%-80%的肝细胞肝癌是由持续的HBV (50%–55%)或HCV(25%–30%)感染引起。据报道全球有20亿人曾经感染过HBV,其中有3.0亿慢性HBV感染者,然而,仅有一小部分终身携带HBV者最终发展成肝细胞肝癌。目前认为,肝细胞肝癌的发生、发展是基因与基因,基因与环境共同调控的复杂过程,机体对HBV的清除能力存在个体差异,这可能是导致个体感染HBV后不同结局的重要原因,因此在与HBV清除相关的免疫通路中寻找肝癌易感基因是目前研究的热点。 selleck kinase抑制剂 研究表明,细胞免疫在HBV清除过程中发挥着重要的作用。白细胞介素-12(Interleukin-12,IL12)是一种异源二聚体结构的前炎症因子,分别由35kDa的轻链(也称p35)和一个40kDa(也称p40)的重链通过二硫键连接而成的,亚单位p35和p40分别由白细胞介素12A(Interleukin12A,IL12A)和白细胞介素12B(Interleukin12B,IL12B)基因编码。IL12能诱导Th1细胞分化,促进γ干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)的产生,并在固有免疫和获得免疫之间建立起重要联系,处于Th1免疫过程的中心地位。除了抗病毒活性,

IL12还具有较强的抗肿瘤活性,其抗肿瘤活性在小鼠肿瘤模型中有大量的报道,它通过激活Th1获得性免疫和CTL在抗血管生成和消退肿瘤的过程中发挥作用。基于IL12的相关功能,已有一些有关IL12A和IL12B基因多态性与肿瘤关系的研究报道,其中包括宫颈癌,胃癌,肺癌,非霍奇金淋巴瘤和其他肿瘤。但国内外对于IL12A和IL12B基因多态性与肝细胞肝癌遗传易感性关系研究非常少。本研究旨在通过分子流行病学的手段,采用病例对照研究方法,对基因IL12A、IL12B潜在功能性SNPs(single nucleotide polymorphism,SNP)和肝细胞肝癌遗传易感性的关系进行研究。结果对于进一步阐明肝细胞肝癌的发病机制和发现与我国人群肝细胞肝癌遗传易感性相关的危险基因型,并将其作为分子标志物用于筛选高危人群或易感个体,从而为实施目标明确的个体预防具有重要的理论和实践意义。

本研究采用潜在功能学SNP的选点策略,在IL12A和IL12B基因中共找到3个中国人群最小等位基因频率(MAF,minor allele frequency)大于0.05的潜在功能学SNP位点,分别为IL12A基因的rs2243115(5’UTR T>G),rs568408(3’UTR G>A)和IL12B基因的rs3212227(3’UTR A>C),探讨了它们与肝细胞肝癌发病的关联。采用病例对照研究设计,选择869例江苏地区确诊的肝细胞肝癌患者和经年龄、性别和地区匹配的891例无肿瘤史的健康对照。采用限制性片断长度多态性(Restriction selleck Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)和引物引入限制性分析(Primer Introduced Restriction Analysis,PCR-PIRA)法设计引物和内切酶进行基因分型。基因型检测采用盲法,并随机抽取10%样本重复检测进行实验室质量控制。 结果发现:在调整年龄、性别等因素后,携带IL12A

rs568408 GA/AA突变基因型的个体发生肝细胞肝癌的风险较携带IL12A rs568408 GG野生基因型的个体增加了53%(调整OR=1.53,95% CI=1.17-2.00)。分层分析表明,该位点的作用在HBV阴性患者中更为显著(调整OR=1.71, 95% CI =1.23-2.39)。 本研究结果表明,IL12A rs568408基因多态性位点可能影响江苏人群肝细胞肝癌发病风险,并且与HBV感染有关。
原癌基因MET编码的蛋白产物Met为肝细胞生长因子(HGF/SF)的受体,具有酪氨酸激酶活性,参与细胞信号传导、细胞骨架重排的调控,是参与细胞增殖、分化和运动的重要因素。多项研究已证实在肿瘤组织中Met的过表达与肿瘤的浸润、转移和不良预后密切相关。但在大肠癌组织中Met蛋白的表达水平与大肠癌的临床分期,病理分级,生存期等关系的研究结果尚存争议,可能与目前尚无专门用于检测福尔马林固定标本中Met表达水平的特异性单克隆抗体有关。在我们前期研究中已成功建立了一株鼠源性抗Met单克隆抗体Met4,可以特异性结合福尔马林处理过的Met受体胞外区。在对多种人类肿瘤细胞的免疫组化,免疫荧光染色,Western 所以 blot实验结果的分析均显示,Met4特异性,敏感性以及可重复性优于市场上其他抗Met抗体。 目的 1.观察研究Met在大肠癌组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系,探讨其表达改变与肿瘤发生、侵袭、转移的关系,为大肠癌的预后判断及临床靶向治疗提供依据。 2.比较分析新型特异性抗Met单克隆抗体Met4和国际通用兔抗Met多克隆抗体C28在检测大肠癌蜡块组织中Met表达水平的差别。 方法 采用免疫组织化学染色方法检测78例不同临床分期及病理分级大肠癌组织及6例大肠腺瘤组织中Met表达水平,分析Met的表达与大肠癌临床病理特征的关系。进一步采用荧光免疫组化方法比较分析Met4与C28的检测效能。 结果 1. 78例大肠癌组织中Met细胞浆染色结果:强阳性46例,弱阳性22例,阳性表达率分别为59%,28.2%;阴性10例(12.8%),即肿瘤细胞浆及细胞膜上均未出现棕黄色染色。6例大肠腺瘤组织,强阳性2例,弱阳性2例,阴性2例。切缘正常大肠组织中Met表达阴性或弱阳性。Met细胞浆阳性表达率在不同病理分级,不同临床分期的差异无明显统计学意义。 2.

原代培养PASMCs并鉴定后, RT-PCR检测常氧及低氧条件下PTEN/Akt1/Akt2/Akt3基因mRNA表达变化;免疫细胞化学和Western blot法检测上述基因蛋白定位和表达变化。 2.Ad-PTEN的扩增、鉴定、转染效率、MOI、滴度测定。 3.RT-PCR和Western blot检测Ad-PTEN转染后细胞PTEN基因mRNA表达及其蛋白活性变化。MTT、3H-TdR掺入实验和流式细胞仪检测常氧及低氧条件下Ad-PTEN转染前后细胞增殖变化。 4.Ad-PTEN转染后常氧及低氧条件下PASMCs平面迁移距离的变化。 5.RT-PCR和Western blot检测常氧及低氧条件下转染前后细胞Akt1/Akt2/Akt3 mRNA表达变化。 结果: 1.原代培养的大鼠PASMCs经α-SM-actin免疫细胞化学染色得到证实,并冻存第四代细胞。组织块法和酶法培养的PASMC的生长曲线和蛋白质含量上有一定程度上的差异,但差异并不显著(p>0.05),二者均于7～8 d达高峰,而后由于接触抑制而下降。组织块法培养PASMC的胞内[Ca2+]含量为(195.32±14.62) nmol/L,而酶消化法为(150.18±11.87)

MG-132数据表 nmol/l,差异有显著性意义(P
创伤、肿瘤等病因导致的大段骨缺损一直是困扰骨科医师的难题。治疗方法主要有自体骨移植、异体或异种骨移植、生物材料填充等。自体骨移植是治疗骨缺损最有效的方法及金标准,但自体骨往往不能满足较大骨缺损对植骨量的要求,同时会造成供骨区新的创伤;而异体或异种骨移植以及生物材料等但均难以获得满意的疗效。近年来组织工程骨的研究为骨缺损修复带来了新的希望。骨组织工程学的原理是运用工程学和生命科学技术构建具有生物功能的人工骨,主要包括三个方面:种子细胞、支架材料以及组织工程骨的构建。间充质干细胞(MSCs)是组织工程骨较理想的种子细胞,根据其基因来源可分类为自体组织工程骨和异基因组织工程骨。目前主要研究的是自体组织工程骨,动物实验显示有较好的成骨能力并成功修复了骨缺损;临床试验也获得成功并取得了较好的效果。但自体组织工程骨因不能预构建、常有3~4w等待期等不足限制了其在临床应用以及产业化。异基因组织工程骨可克服这些不足,能满足“随取随用”的临床应用宗旨。 Selleckchem ATM激酶抑制剂 异基因MSCs构建的组织工程骨能否进入临床应用取决于免疫原性以及成骨能力。其免疫原性主要与种子细胞相关。研究显示MSCs仅表达MHC-I,不表达MHC-II、Fas/FasL、CD80、CD86、CD40和CD40L;体外实验:混合淋巴培养(MLC)显示其并不引起异体淋巴细胞的增殖及活化;体内实验:同种异体MSCs在体内能较长时间存在而不被识别清除;因此认为MSCs免疫原性低甚至无免疫原性。近来亦认为MSCs具有免疫抑制作用,可诱导免疫耐受。MSCs经成骨诱导后其免疫原性无显著增强,不引起异体淋巴细胞增殖反应。

关于异基因骨组织工程的报道不多,涉及免疫原性的研究更少。De Kok等应用同种异体MSCs构建组织工程骨修复了狗牙槽骨缺损,通过循环抗体检测证实无免疫排斥反应;Hiroyuki等构建异基因组织工程骨修复大鼠骨缺损的实验中发现使用免疫抑制剂的实验组骨缺损能够较好的被修复,而未使用组成骨较困难,不能修复骨缺损;显示异基因组织工程骨的成骨能力与其免疫原性密切相关。目前异基因组织工程骨的研究仅限于鼠等小动物,移植排斥研究仅有外周体液免疫检测以及应用抑制剂进行对比且获得的结论也不确定。本实验拟进行大动物实验,选用了在器官以及免疫系统等与人类相似的猪为实验动物。贵州小香猪和广西巴马猪两种近交系小型猪分别为实验供体、受体,建立小型猪胫骨干中段2cm的节段骨缺损模型。探讨了小型猪骨髓MSCs的分离纯化以及鉴定,异基因组织工程骨体外构建。根据异基因组织工程骨移植的特点,运用流式技术、ELISA、RT-PCR、免疫组化等方法监测术后的移植排斥情况,并通过X线检查、组织的特殊染色、生物力学测试等观察成骨效果。

主要的结果和结论如下: 1.微量淋巴细胞毒实验(CDC)显示贵州小香猪和广西巴马猪品系间呈强阳性,品系内成阴性结果;单向混合淋巴细胞培养(MLC)结果显示两品系猪间猪白细胞表面抗原(SLA)不相容,品系内相容性好。结论:贵州小香猪和广西巴马猪是品系较纯的两种品系猪,品系间完全不匹配,即两品系猪之间器官移植发生排斥可能性大,符合实验目的。 2.构建小型猪胫骨干中段2cm的节段骨缺损模型,采取钢板固定,通过术后X线检查,12 w大体标本以及组织学均显示未能骨愈合。结论:小型猪胫骨干2cm的节段骨缺损模型能够满足实验要求。 3.比较Percoll及Ficoll两种介质结合贴壁法分离纯化小型猪骨髓MSCs,结果显示Percoll介质结合贴壁法获得的MSCs具有较好的活力、纯度以及成骨活性。经鉴定符合MSCs的属性。结论:Percoll介质结合贴壁是分离纯化小型猪骨髓MSCs的适宜方法。 4.小型猪MSCs不能刺激异基因淋巴细胞活化、增殖;MSCs经成骨诱导不同时间后也不能刺激异基因淋巴细胞增殖;提示小型猪MSCs及其经成骨分化后的免疫原性均较低。MSCs与多孔β-TCP复合构建组织工程骨;高浓度MSCs通过沉淀法可获得较高的上架率;β-TCP对MSCs的细胞活力以及免疫原性无明显影响。 selleck kinase抑制剂 5.免疫学监测的实验分组:A异基因组织工程骨组;B自体组织工程骨组;C纯TCP组;D空白缺损组。术后免疫学监测发现:各实验组术后外周血CD4+、CD8+和CD4+CD8+双阳性细胞无显著变化;A组在同一时间点的CD4+、CD8+和CD4+CD8+细胞值与其余实验组比较无明显差异;术后早期淋巴细胞转化试验显示各实验组的SI <2;A组术后单向MLC检查淋巴细胞增殖不明显,T淋巴细胞毒实验测得细胞毒性活力较低;ELISA检测各实验组术后早期血清IL-2、IL-10,发现IL-2在早期呈逐渐升高趋势,A组、B组和C组在术后3d时升高较明显(P<0.05),和B组比较无显著区别。术后A组I型胶原和骨钙素的mRNA的表达均逐渐上调,明显强于C组(P<0.05),和B组比较无明显差异。组织检查:可见β-TCP逐渐降解,新生幼稚编织骨及血管逐渐形成,最终被成熟骨组织取代;组织学评分A组较C组有显著差异(P<0.

-)的浓度、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)和NADPH氧化酶的活性。RT-PCR法检测细胞eNOS和NADPH氧化酶p22phox的mRNA表达。 结果:细胞流式仪发现体外分离培养的细胞高表达CD34,免疫组化法进一步发现该类细胞还可表达内皮系特异标志vWF;同时该类细胞也能摄取ac-LDL和结合UEA-1,提示本实验已成功分离和体外培养出兔外周血EPCs。与正常组相比,高胆固醇血症组兔EPCs的数量( 30.43±1.76 vs 50.18±6.83)/ (视野×200) (P0.05),但有增加的趋势。

4.1μM阿托伐他汀和1μM罗格列酮均可分别使高胆固醇血症组eNOS表达增加60%和23%。两者联合干预则使表达增加94%,较单药增加更为明显(P0.05)。1μM阿托伐他汀和1μM罗格列酮分别干预后均使NADPHp22phox mRNA表达下降(P<0.05),联合干预后则进一步下降,但仍高于正常组(P0.05),而且1μM阿托伐他汀组不影响其表达(P>0.05)。1μM罗格列酮及1μM罗格列酮和1μM阿托伐他汀联合用药组较高胆固醇血症和正常组高(P0.05)。罗格列酮联合阿托伐他汀组TC和LDL较损伤未干预组和罗格列酮组显著降低(P0.05),其对TG、HDL和血糖也无影响。 selleck抑制剂 2.损伤未干预组的EPCs数量较正常组降低了40%;罗格列酮组和阿托伐他汀组均使EPCs数量升高,分别增加了57%和65%,且与正常组无差异(P>0.05);药物联合组则使EPCs数量进一步提高,增加了1倍(P0.05)。

5.与正常组相比,未损伤干预组α-SMA表达显著增加;罗格列酮组和阿托伐他汀组均分别使α-SMA表达下降,而药物联合干预组则使α-SMA进一步下降。 6.损伤未干预组较正常组血清NO水平降低83%(P<0.05),罗格列酮组和阿托伐他汀组NO水平分别较损伤未干预组升高了30%和38%,罗格列酮联合阿托伐他汀组使NO进一步升高了62%,但仍低于正常组水平(P<0.05)。损伤未干预组抗超氧阴离子(O2.-)能力较正常组下降了约1.7倍;罗格列酮使其抗O2.-能力提高了1倍(P<0.05);阿托伐他汀组则提高了87%(P<0.05);两药联合提高了1.5倍(P<0.05);罗格列酮组和阿托伐他汀组均分别使损伤未干预组eNOS的mRNA表达上调(P<0.05),罗格列酮组和阿托伐他汀组均使损伤未干预组表达下降(P
目的:1.体内和体外建立表皮细胞去分化模型,检测与去分化有关的信号通路,确定调控该过程的关键蛋白,为进一步探明表皮细胞去分化发生机制提供理论基础;2.体外诱导骨髓间充质干细胞向汗腺细胞分化,并利用干细胞移植技术促进体内损伤汗腺的修复与再生。 Dolutegravir分子量 方法:1.将去除基底干细胞层的人表皮片移植到全层皮肤切割伤BALB/c裸鼠皮下,分别于移植后3d、5d和7d取出移植皮片,采用免疫组织化学法、流式细胞检测、Western

bloting和RT-PCR法检测移植皮片表型的改变。同样方法处理瘢痕皮片和角膜上皮,通过免疫组织化学染色观察二者表型的改变。2.离体条件下选择热和bFGF作为诱导因素处理成熟表皮细胞。采用细胞化学染色、流式细胞检测和Western bloting观察细胞表型的改变;通过Giemsa染色和电镜检测观察细胞形态的改变;通过二维和滋养层培养体系观察细胞的增殖能力,包括克隆形成和复层生长情况;采用器官培养体系体外构建三维皮肤观察细胞再分化形成表皮情况;应用基因芯片技术观察细胞基因表达的改变。用β-粘连蛋白(β-catenin)激动剂处理细胞观察细胞表型和增殖能力的改变;通过siRNA抑制β-catenin的表达观察其对表皮细胞去分化过程的影响;利用Smad4敲除小鼠间接激活表皮细胞β-catenin,并观察CK14和Ki67在表皮组织内的表达情况。3.体外分离、培养和鉴定人成体骨髓间充质干细胞(MSCs)和人汗腺细胞(SGCs);分别用BrdU或绿色荧光蛋白(green 很少 fluorescence protein,GFP)标记MSCs;将融合的SGCs经47℃高温处理造成体外热损伤休克模型,再加入标记的MSCs共同培养,5d后,检测MSCs表型的改变;将具有汗腺表型的干细胞局部移植于裸鼠烫伤脚掌观察汗腺组织再生修复情况,结合碘.淀粉发汗实验检测汗腺功能以判定治疗效果;选择一例烧伤自愿患者,该患者双上臂背侧均有相似的瘢痕,经发汗实验证明无汗液分泌。经伦理委员会批准和知情同意条件下,抽取其骨髓和切取小块正常皮肤分离培养骨髓间充质干细胞和汗腺细胞进行共培养,诱导骨髓间充质干细胞获得汗腺细胞表型,通过自行设计的方案将该细胞种植于右侧切除瘢痕处。创面愈合后实验侧行发汗实验、汗液成份分析以及组织学检查。 结果:1.去基底细胞层处理的表皮片干细胞标志物CK19和β1整合素染色阴性;移植后5d,存活皮片CK19和β1整合素染色呈多层分布,而不是正常表皮中的单层分布。流式细胞仪检测结果显示,表皮片移植后CK19阳性细胞和β1整合素阳性细胞分别由移植前的0.00%和0.00%增加到7.54%和5.24%,而CK10阳性细胞由99.62%下降为86.

05)。但是与LPS组相比,LPS+小檗碱组ERK活性水平差异有统计学意义(P
目的:探讨p38MAPK蛋白在体外培养神经元中的激活及钙调蛋白抑制剂W-7的干预作用。方法:神经元原代培养并采用NSE免疫细胞化学技术鉴定神经元。取原代培养7d的大鼠皮质神经元随机分为5组:正常对照组,仅用DMEM/F12完全培养基;NMDA组,去除正常神经元培养液,加入NMDA50μmol.L-1,处理时间10min;W-7干预组,W-7浓度分别为25、50和100μmol.L-1,继续培养24h,加入NMDA

50μmol.L-1。免疫细胞化学染色法及免疫印记法检测皮质神经元内p38MAPK蛋白的表达水平。结果:培养6～12h后大部分神经元贴壁,随时间延长形态多变,突起逐渐增多,神经元突起间互相接触形成网络。NSE鉴定神经元纯度为90.86%;免疫细胞化学染色法检测,NMDA组p38MAPK蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),W-7组低于NMDA组(P<0.05或P<0.05),W-7干预组p38MAPK表达水平低于NMDA组(P<0.01),呈剂量依赖性。结论:NMDA导致皮质神经元p38MAPK蛋白表达增高,W-7可降低p38MAPK的蛋白表达。
PC12细胞被广泛用于神经细胞功能、分化、凋亡和神经递质分泌,以及潜在的分子机制的研究。氧化应激可导致PC12细胞凋亡,其作用方式为激活对氧化还原反应敏感的细胞信号传导,主要与丝裂原活化蛋白激酶、线粒体凋亡及NF-κB信号传导途径有关。本文综述了氧化应激致PC12细胞凋亡的信号传导途径,旨在为神经系统氧化应激相关疾病的抗氧化剂药物治疗和凋亡信号途径药物干预治疗提供理论依据。
肠缺血再灌注(intestinal Palbociclib ischemia reperfusion,IIR)损伤是常见的组织器官损伤之一,它在严重感染、外伤、休克、心肺功能不全、器官移植等的过程中起重要作用。其机制主要为缺血一段时间后,组织适应了低氧环境的新陈代谢,血流的回复导致激活血管内巨噬细胞,继而相应的生成活性氧自由基(ROS),ROS又诱发内皮损伤,以及原炎性因子
前B细胞克隆增强因子(PBEF)是具有促进早期B细胞分化的一类生长因子,其基因于1994年首次自人外周血淋巴细胞cDNA基因文库中克隆获得。2005年在内脏脂肪细胞中发现一种与PBEF基因序列相同的cDNA基因序列,将其命名为Visfatin即内脏脂肪素或内脂素,此后研究发现其具有烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)活性,因此又将其命名为Nampt。现将近年来PBEF基因的分子生物学特征及其
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内主要的信号转导系统之一。p38MAPK是MAPK家族中的重要成员,其介导的信号转导通路在炎性反应中具有重要作用。p38MAPK与急性坏死性胰腺炎关系密切,不仅参与了急性坏死性胰腺炎胰腺的局部损伤,还参与了胰外并发症的发生。本文对p38MAPK信号通路在炎症中的作用及其在急性坏死性胰腺炎中的研究进展予以综述,旨在为急性坏死性胰腺炎的治疗提供新的思路。
缺血再灌注损伤(Ischemia-Reperfusion

因为 Injury,IRI)是指在缺血基础上恢复血流后,不仅未减轻原有组织的缺血性损伤,反而使其功能障碍或结构损伤进一步加重的现象。肠道是对缺血反应最敏感的组织之一,严重创伤、失血等原因均可引起肠缺血再灌注损伤(Intestinal MS 275 Is-chemia-Reperfusion Injury,IIRI)。研究发现
近年来的研究发现,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是细胞将信号从细胞膜传递到细胞核的主要通路。其中p38MAPK可通过调节转化生长因子β1、核因子-κB及血管内皮生长因子等炎症因子的表达影响糖尿病肾病的进程。研究p38MAPK及其信号转导通路机制可能为糖尿病肾病的治疗提供新的理论基础,也可为临床提供新的更为有效的诊治手段。
目的探讨吡格列酮(PIO)对血管内皮细胞的保护作用及其可能机制。方法用四唑盐比色法(MTT法)检测PIO对高糖损伤血管内皮细胞的最佳保护浓度;按不同干预条件,将血管内皮细胞分为7组:正常培养组[A组,葡萄糖(Glu)5.5 mmol/L],高糖培养组(B组,Glu 37.5 mmol/L),C、D、E组分别为不同浓度PIO+高糖培养,F、G组为不同浓度SP600125+PIO+高糖培养。Western blot法检测各组c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达。结果 PIO在1×10-8~1×10-4mmol/L时对高糖损伤的血管内皮细胞有保护作用;与B组相比,C~E组p-JNK表达降低,差异有统计学意义(P<0.

94(95%CI:0.88~0.96),敏感性为93.0%,特异性为86.0%。结论 ELF试验是有效诊断慢性丙肝患者肝纤维化的无创性检查方法,能够准确的诊断肝纤维化分期和肝硬化。
受体相互作用蛋白2(receptor-interacting protein 2,RIP2)属于RIP家族成员,在多种组织中均有分布。RIP2可与多种蛋白相互作用,参与多个受体的信号转导,发挥生理功能,被认为是固有免疫、适应性免疫、凋亡信号途径的重要衔接分子。基于其特殊的分子结构及生物学功能,RIP2在炎症、肿瘤、自身免疫病等多种疾病中发挥着重要作用。本文就RIP2的结构、生物学功能以及其在相关疾病特别是口腔疾病发生发展中所起作用作一综述。
AIM: 而且 To investigate the role of sorafenib(SFN) in autophagy of hepatocellular carcinoma(HCC). We evaluated how SFN affects autophagy signaling pathway in human HCC

cell lines. METHODS: Two different human HCC cell lines, Hep3 B and Huh7, were subjected to different concentrations of SFN. Cell viability and onset of apoptosis were determined with colorimetric assay and immunoblotting analysis, respectively. The changes in autophagy-related proteins, including LC3, ULK1, AMPK, and LKB, were determined with immunoblotting analysis in the presence or absence of SFN. To assess autophagic dynamics, autophagic flux was measured with chloroquine, a lysosomal inhibitor. 无 The autophagic responsiveness between different HCC cell lines was compared under the autophagy enhancing conditions.RESULTS: Hep3 B cells were significantly more resistant to SFN than Huh7 cells.

Immunoblotting analysis revealed a marked increase in SFN-mediated autophagy flux in Huh7 cells, which was, however, absent in Hep3 B cells. While both starvation and rapamycin enhanced autophagy in Huh7 cells, only rapamycin increased autophagy in Hep3 B cells. Immunoblotting analysis of autophagy initiation proteins showed that SFN substantially increased 查找更多 phosphorylation of AMPK and consequently autophagy in Huh7, but not in Hep3 B cells.CONCLUSION: The autophagic responsiveness to SFN is distinct between Hep3 B and Huh7 cells. Resistance of Hep3 B cells to SFN may be associated with

altered autophagy signaling pathways.
目的探讨姜黄素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMs)分泌炎症因子的影响。方法分离、培养腹腔巨噬细胞,用不同浓度姜黄素(12.5、25、50 mg/L)预处理细胞12 h,进而使用100ng/ml LPS刺激细胞,12 h后收集培养基上清液,ELISA检测促炎介质肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(interleukin-6,IL-6)的含量;30 min后收集细胞裂解物,Western blot检测p38 MAPK激酶活性。结果未经处理的腹腔巨噬细胞经LPS刺激12 h后,上清中TNF-α、IL-6的表达水平显著上升(p0.05);而50、25 mg/L姜黄素可以明显抑制LPS诱导的TNF-α、IL-6的表达(p
神经变性疾病是由于神经元或者髓鞘的损伤、丢失引起的神经系统疾病,其病因复杂,影响因素甚多,发病机制尚不完全明确。蛋白激酶在神经变性疾病的发生发展过程中发挥着重要的作用。然而,蛋白激酶抑制剂能有效保护神经细胞,缓解或减轻神经变性疾病的病情。本文就阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病等神经变性疾病中所涉及的蛋白激酶及其抑制剂进行综述,分析各蛋白激酶与主要神经变性疾病疾病之间的相互关系,为针对这些疾病的药物研发提供新的思路和策略,认为新型复方药物可能成为治疗神经变性疾病药物研发的方向。
目的探讨番荔枝内酯Bullatacin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用MTT法检测不同浓度(6.25、12.

我们用Rg3(50μg/ml)处理胃癌细胞,通过ELISA检测FUT4、SP1和HSF1的表达。 13.CCK-8检测细胞增殖的能力。 IV.实验结果 1. H.pylori和CagA对细胞增殖的影响机制的研究 (i)与胃炎,胃溃疡的患者相比,胃癌组织和血清中Cag A、p-EGFR、FUT4和LeY的表达增高。

(ii)在胃癌组织和血清中,Cag A与p-EGFR、FUT4和LeY的表达相关。 (ⅲ) Cag A促进细胞增殖并且呈剂量依赖性。 (ⅳ) Cag A上调PCNA的表达及EGFR、ERK1/2和P38的磷酸化水平。 (ⅴ) Cag A上调FUT4的表达并呈剂量依赖性。 (ⅵ) Cag A上调LeY、LeB、LeX和sLeX的表达。 2.塞来昔布和LeY寡糖抗体抑制细胞增殖的机制的研究 (i)与普通胃上皮细胞相比,胃癌细胞增殖能力强。 (ii)与胃炎,胃溃疡的患者相比,胃癌组织和血清中H. pylori、COX-2、CA724和GRN的表达上调。 (iii)在胃癌中,H. pylori的表达和LeY、COX-2、CA724及GRN的表达相关。 (iv)塞来昔布抑制FUT1、FUT4和LeY的表达。 (v)LeY调节H. pylori的毒性。 (vi)联合使用塞来昔布和LeY寡糖抗体处理细胞,能抑制胃癌细胞的增殖。 3.Rg3对胃癌细胞凋亡的作用机制的研究 无 (i)Rg3通过激活caspase-3,-8,-9及PARP的裂解促进胃癌细胞凋亡。 (ii)在胃癌细胞中,Rg3下调FUT4的表达。 (ⅲ) CagA调节SP1和HSF1的表达。 (iv)Rg3调节SP1和HSF1的表达。 (v)SP1和HSF1调节FUT4的表达。 V.结论 1.胃癌中CagA、pEGFR、FUT4和LeY的表达升高；CagA通过EGFR/MAPKs信号通路促进FUT4和LeY的表达。 2.LeY抗体增加塞来昔布的抗肿瘤作用；LeY抗体和塞来昔布通过抑制COX-2和LeY的表达及其介导的MAPKs/COX-2信号通路抑制肿瘤细胞的增殖。

3.Rg3通过调节SP1和HSF1的表达而下调FUT4的表达,达到治疗肿瘤的效果。 4. FUT4/LeY、COX-2/LeY和SP1/HSF1可能是胃癌的潜在治疗靶点。
目的 宫血宁胶囊（GXN）是利用云南省道地中药材重楼开发的总甾体皂苷（TSSPs）制剂，目前已成为国内妇科专家首推的治疗妇科血症的中成药制剂。在既往的研究中我们已经发现GXN能够增强子宫收缩和促凝血功能是治疗异常子宫出血（AUB）的两个关键药效学基础，并通过植化研究鉴定出十余种甾体皂苷，进行构效关系分析确定了具有螺甾结构的偏诺类皂苷具有显著的促子宫平滑肌收缩活性，并且研究证实了单体Tg引起大鼠血小板聚集、促进凝血的信号转导通路。然而，甾体皂苷引起子宫平滑肌收缩的药理学作用，尤其是作用的信号转导通路尚不十分清楚。本研究的目的在于探索中药甾体皂苷诱导子宫平滑肌收缩的信号转导通路，明确甾体皂苷缩宫作用机制，为寻找作用靶点以及药物的二次开发提供理论依据。 内容 明确偏诺皂苷Tg诱导的大鼠子宫平滑肌收缩与MLC20磷酸化的关系；探讨PLC-IP3、RhoA/ROK、ERK/MAPK、P38/MAPK、JNK/SAPK和PKC等可能通路的参与与否以及通路间的相互作用；构画Tg引起子宫平滑肌收缩的分子机制图。 方法 选用120~140g的雌性SD大鼠、采用组织块贴壁法进行原代大鼠子宫平滑肌细胞的分离和培养；利用离体子宫平滑肌收缩实验研究Tg的体外效应和各种抑制剂对Tg作用的影响；采用蛋白免疫印迹（Western blotting）技术检测可能涉及的信号通路中信号蛋白肌球蛋白轻链（MLC20）、ERK、p38、JNK和钙调结合蛋白（CaD）的磷酸化改变；利用细胞内钙离子标记、激光共聚焦检测平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。 Selleck VX-770 结果 1. Tg引起子宫平滑肌收缩效应的确定以及收缩与MLC20磷酸化效应的关系 寻找更多 从总甾体皂苷（TSSPs）中分离提取的单体化合物Tg具有显著的促子宫平滑肌收缩作用，作用的起始浓度为1.25μM，随着给药浓度的增加，收缩效应逐渐增强。已知生理状态下平滑肌细胞内p-MLC20表达水平与平滑肌收缩密切相关，为了揭示Tg诱导的大鼠子宫平滑肌收缩作用是否与平滑肌细胞内MLC20磷酸化关联，采用western

blotting技术评价Tg刺激后胞内MLC20磷酸化水平的改变，发现Tg能够呈剂量和时间依赖性诱导组织细胞内p-MLC20表达水平的升高。MLC20磷酸化反应通常由MLCK介导，应用MLCK特异性抑制剂ML-7能够显著抑制Tg诱导的MLC20磷酸化以及子宫平滑肌收缩。而MLCK主要通过活化的CaM来激活，应用CaM特异性抑制剂W-7也能显著抑制Tg诱导的p-MLC20水平升高及子宫平滑肌收缩效应。 2.平滑肌细胞[Ca2+]i对MLC20磷酸化和Tg缩宫作用的影响 为了验证[Ca2+]i在Tg引起子宫平滑肌收缩以及MLC20磷酸化效应中的角色，研究首先从检测[Ca2+]i水平的改变入手。以2.5μM Tg刺激预先以Fluo4-AM共孵育的子宫平滑肌细胞，激光共聚焦显微镜下可见Tg刺激后，细胞内荧光强度显著性增高，作用12s出现荧光强度的峰值，持续1-2s后很快下降，提示Tg能够刺激子宫平滑肌细胞内[Ca2+]i瞬时升高，形成“钙振荡”。去除细胞外钙或利用L型钙离子通道阻断剂尼群地平以阻断外钙内流，或利用thapsigargin内钙耗竭剂阻断内钙释放，都能显著抑制Tg诱导的子宫平滑肌收缩以及p-MLC20水平的升高。应用PLC/IP3信号通路的特异性抑制剂几乎完全抑制Tg的缩宫作用以及p-MLC20水平升高。另外，Rethunium Red（兰尼碱受体（RYR）的特异性阻滞剂）能够阻止钙离子与受体的结合，从而抑制Ca2+引发的Ca2+释放（CICR），应用54μM Rethunium Red能抑制Tg缩宫作用的发挥。 3. RhoA/ROK信号通路在Tg缩宫机制中的调节作用 RhoA/ROK信号通路的激活可以通过使MLCP失活而提高p-MLC20浓度。应用ROK特异性抑制剂Y27632的既能够抑制Tg引起的子宫平滑肌收缩，也能抑制平滑肌细胞内p-MLC20升高。 4. ERK/MAPK信号通路在Tg诱导的子宫平滑肌收缩中的调节作用 MEK特异性抑制剂U0126能够抑制Tg诱导的子宫平滑肌收缩，主要表现为收缩频率的降低；并且，Tg呈剂量和时间依赖地引起子宫平滑肌细胞内ERK1/2磷酸化水平的升高，这一效应能够被U0126完全抑制；Tg还能引起CaD的磷酸化效应增强，可以被U0126部分抑制。为了验证ERK/MAPK通路的激活是否由ras/raf途径介导，检测raf蛋白的表达发现Tg尚能够引起平滑肌细胞内p-c-Raf表达的升高，具有时间依赖性；而应用ras阻断剂可以抑制Tg诱导p-ERK1/2升高。 5.

MicroRNA-145通过TGF-β1信号通路促进了升主动脉瘤患者主动脉壁中层结构重塑目的：升主动脉壁中层结构重塑是升主动脉瘤患者主动脉壁的主要病理特征,但是,导致升主动脉瘤患者主动脉壁中层结构重塑的机制仍未完全阐明。有研究报道MicroRNA-145是新进发现的可调节平滑肌细胞寿命和可塑性的细胞因子。本研究将检测升主动脉瘤壁中MicroRNA-145的表达,并检测MicroRNA-145在升主动脉瘤患者主动脉壁中层结构发生重塑过程中的作用。方法：手术过程中获取10例因升主动脉瘤接受升主动脉置换术的患者的主动脉壁为病例组标本,对照组主动脉壁组织来自于因冠状动脉粥样硬化需进行冠状动脉搭桥手术的患者的升主动脉壁。研究过程中,应用H-E染色和Masson三色染色分别检测升主动脉壁形态学变化和升主动脉壁中胶原纤维的变化,应用实时定量反转录酶-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测主动脉壁中microRNA-145的表达量,应用western

blot技术检测升主动脉壁中骨桥蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达量。通过体外细胞培养,获取人体升主动脉壁平滑肌细胞,应用MicroRNA-145模拟物和抑制物外在干预升主动脉壁平滑肌细胞,观察MicroRNA-145的表达水平对升主动脉平滑肌细胞产生骨桥蛋白和Ⅲ型胶原蛋白作用的影响。然后应用MicroRNA-145模拟物和TGF-β1 siRNA共同作用于升主动脉壁平滑肌细胞,观察抑制TGF-β1的表达对MicroRNA-145促进升主动脉壁平滑肌细胞产生骨桥蛋白和Ⅲ型胶原蛋白作用的影响。结果：与正常对照组相比,升主动脉瘤患者主动脉壁中MicroRNA-145.骨桥蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达明显增加(P
目的：以小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白配体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor-related protein ligand, 点击此处 mGITRL)作为共刺激分子在体外诱导Thl7细胞分化,研究参与该过程的信号分子,寻找其作用机制；建立小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)模型,并用mGITRL蛋白进行处理,研究GITR/GITRL通路下游信号分子对CIA发病的影响,寻找其可能的作用机制。方法：(1)免疫磁珠法分离小鼠脾脏来源的CD4+CD62L+初始型T细胞,以1×106/孔的浓度将初始型T细胞在Th17细胞不完全诱导体系中培养,体系中含有预包板的抗CD3

selleck化学药品液面控制 mAb (1μg/ml),游离的TGF-β(3ng/ml)、IL-6 (30ng/ml)、IL-23 (30ng/ml).抗IL-4 mAb (5μg/ml)以及抗IFN γmAb (5μg/ml),再将mGITRL蛋白(1μg/ml)以及对照蛋白(1μg/ml)分别加入体系中,72h后通过流式细胞术检测Th17细胞的比例变化。(2)在小鼠初始型CD4+T细胞培养孔中加入抗CD3 mAb以及mGITRL蛋白,37℃、5%C02培养72小时,然后再加入不同浓度的mGITRL蛋白(0、0.5、1.0、2.0μg/ml)作用20mins>或者加入1.0μg/ml mGITRL蛋白作用不同时间(0、20、40、60mins),通过Western-Blot检测胞内p38 MAPK磷酸化水平。将1nGITRL蛋白、mGITRL蛋白+SB203580 (p38 MAPK抑制剂,5μM)以及mGITRL+DMSO(SB203580的溶剂)分别加入小鼠Th17细胞不完全诱导体系中(体系成分同上),培养72h,通过流式细胞术检测Th17细胞的比例变化,收集细胞培养上清,通过ELISA检测上清中IL-17A的水平。在小鼠Th17细胞不完全诱导体系中,加入mGITRL蛋白以及不同浓度的SB203580 (0、2.5、5、7.5、10μM),检测Th17细胞的比例、IL-17和RORγt mRNA的表达水平,培养上清中IL-17A的水平变化情况。将mGITRL蛋白、mGITRL蛋白+SB203580以及mGITRL+DMSO分别加入小鼠Th17细胞不完全诱导体系中(体系成分同上)培养72h后,通过qRT-PCR检测IL-21mRNA的表达水平变化；收集细胞培养上清,ELISA法检测上清中IL-21的水平变化。(3)在小鼠初始型CD4+T细胞培养孔中加入抗CD3

mAb以及mGITRL蛋白,37℃、5%CO2培养72小时,再经过不同浓度的mGITRL DNA Synthesis抑制剂 (0、0.5、1.0、2.0μg/ml)刺激相同时间(20mins),或经过相同浓度(1.0μg/ml)的]mGITRL蛋白处理不同时间(0、20、40、60 mins),然后通过Western-Blot检测胞内STAT3 Tyr705以及Ser727位点磷酸化水平；用SB203580 (p38 MAPK抑制剂)预处理活化的初始型T细胞不同时间(30、60、90mins)之后,再经过mGITRL蛋白刺激,通过Western-Blot检测胞内STAT3 Tyr705以及Ser727位点磷酸化水平。将mGITRL蛋白、mGITRL蛋白+Stattic (STAT3抑制剂)以及mGITRL+DMSO (Stattic的溶剂)分别加入小鼠Th17细胞不完全诱导体系中(同前),在Th17细胞诱导条件下培养72h,收集细胞培养上清,ELISA法检测上清中细胞因子IL-17A以及IL-21的水平变化；收集培养结束的细胞,通过qRT-PCR检测IL-21mRNA的表达水平。(4)将牛Ⅱ型胶原(CⅡ)与等体积的弗氏完全佐剂1：1混合,充分研磨直至混合物完全乳化,取乳化物(100μg CⅡ/只)于小鼠尾根部皮内注射。初次免疫当日为第0天,于初次免疫后第21天用C II与弗氏不完全佐剂的乳化物加强免疫,诱导小鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型。将小鼠随机分成三组：CIA-GITRL组、CIA-GITRL-SB203580组以及CIA-GITRL-Carrier (SB203580的溶剂)组(每组6只),在初次免疫后第22天给予CIA-GITRL组小鼠连续5天进行尾静脉注射mGITRL蛋白(20μg mGITRL蛋白溶于100μlPBS缓冲液中)；在初次免疫后第20天给予CIA-GITRL-SB203580组小鼠尾静脉注射SB203580 (2.

0软件进行分析处理。 结果 1.纳入本课题的患者共31人，年龄（62.32±15.71）岁，男性16人，女性15人，死亡14人，28天存活17人，血培养阳性组10人，血培养阴性组21人。

更多 2.血培养阳性组的PCT、BNP、WBC、CR、APACHEII和SOFA评分明显高于血培养阴性组。PPCT=0.011，PBNP=0.005，PAPACHEII=0.015，PCR=0.000，PSOFA=0.013。P
目的： 探讨葡萄糖转运体4表达与葡萄糖代谢在大鼠心肌活力改变中的关系，并对其机理进行初步探讨。 方法： 30只健康雄性SD大鼠，SPF级，随机分成2组，分别为实验组21只和对照组9只。实验组每天腹腔注射盐酸异丙肾上腺素（5mg/kg），对照组每天腹腔注射生理盐水（5mg/kg），连续注射7天，取尾静脉血检测血糖后，经尾静脉注射~(18)F-FDG，取心脏组织，以γ放射免疫计数器测定其放射性计数，并检测血清中胰岛素及超敏肌钙蛋白I（high-sensitivity cardiac troponini I，hs-cTnI）的水平。以免疫组化技术测定心肌细胞葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter4，GLUT4)的表达。两组间计量数据比较采用两样本t检验，放射性计数与大鼠心肌组织GLUT4的表达进行Pearson相关分析。 结果： 实验组大鼠与对照组大鼠的空腹血糖和血清胰岛素浓度的差异无统计学意义（12.633±2.067与13.422±1.812，27.627±10.967与28.4711±7.867，t＝-0.991和-0.208，P均＞0.05）。实验组大鼠的hs-cTnI与对照组大鼠的hs-cTnI分别为（11.392±1.621）ng/ml和（0.052±0.025）ng/ml，前者明显大于后者（t＝32.055，P＜0.05）,提示实验组大鼠心肌损伤。实验组与对照组大鼠的每克心脏与标准对照管放射性计数的比值分别为1.687±0.133和2.576±0.285，前者明显小于后者（t＝-8.953，P＜0.05）。实验组缺血区、实验组梗死区及对照组大鼠心肌细胞GLUT4表达的平均阳性率分别为（68.643±10.504）%、（12.148±2.225）%及（47.322±6.448）%，实验组缺血区明显高于实验组梗死区（t＝24.112，P＜0.05）；实验组缺血区GLUT4表达的平均阳性率高于对照组（t＝-5.619，P＜0.05）；实验组梗死区GLUT4表达的平均阳性率明显低于对照组（t＝15.964，P＜0.05）。心梗病灶中仍可见局限性GLUT4高表达，而缺血病灶中则有低GLUT4表达区。实验组大鼠的每克心脏与标准对照管放射性计数的比值与实验组大鼠心肌缺血区、实验组大鼠心肌梗死区的GLUT4表达的平均阳性率呈明显正相关（R2=0.914，P＜0.05及R2=0.922，P＜0.05）。对照组大鼠的每克心脏与标准对照管放射性计数的比值与对照组大鼠心肌的GLUT4表达的平均阳性率呈明显正相关（R2=0.950，P＜0.05）。

并且 结论： 心肌缺血时，随着心肌GLUT4表达增加，心肌~(18)F-FDG的摄取增加，即对葡萄糖的摄取和利用增加；心肌梗死时，心肌GLUT4表达下降，心肌~(18)F-FDG的摄取减少，即对葡萄糖的摄取和利用减少乃至缺如。心梗病灶中仍可见局限性GLUT4高表达，而缺血病灶中则有低GLUT4表达区，这或许可解释少数患者临床上心肌活力显像与冠脉复通术疗效差异的情况。总之，心肌活力改变时，心肌GLUT4的表达与心肌葡萄糖的代谢有密切的关系。
背景失眠是最常见的睡眠障碍，可引起患者的警觉性、记忆、执行等认知功能的损害，其中最常见的是学习记忆困难。既往失眠的研究一般未区分失眠的类型，可能混杂了抑郁、焦虑等因素，故原发性失眠患者是否存在认知功能的改变尚不明确。研究显示，在许多睡眠相关疾病中存在炎症因子的异常表达。既往多采用睡眠剥夺或者注射外源性的炎症因子等手段来探索炎症因子与失眠的关系，但是受试者往往是健康青年人，试验效果短暂，与自然病程的失眠相差甚远，故原发性失眠患者是否存在炎症因子的改变尚不清楚。 Onalespib 目的探索PI和抑郁共病性失眠（DCI）患者空间记忆能力和TNF-α血清水平的变化，进一步明确空间记忆功能改变是否与TNF-α相关联。方法依据DSM-Ⅳ诊断标准收集PI病例30例（男9例，女21例）和DCI病例30例（男10例，女20例），对照组30例（男10例，女20例）为健康志愿者。采集一般资料，用匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）评定睡眠情况、17项汉密尔顿抑郁量表（HAMD-17）评定抑郁程度、蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评价总体认知功能。再利用九盒迷宫实验测定受试者的记忆功能（空间工作记忆、物体工作记忆、空间参考记忆、物体参考记忆），用图片再认实验检测受试者物体再认记忆，并于次日上午8点抽取受试者静脉血液2ml，取血清置于-80℃冷冻保存，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子TNF-α的血清浓度。 结果PI组、DCI组和正常对照组间性别、年龄及受教育年限的差异均无显著性（Ps＞0.05）；PI组和DCI组PSQI分值均高于正常对照组（Ps＜0.05），但两组间无统计学差异（Ps＞0.05），PI组和DCI组的HMAD-17分值均高于正常对照组（Ps<0.

05μg/ml和0.1μg/ml PLY分别处理THP-1细胞12h后，通过瑞氏染色观察到细胞发生明显的凋亡形态学改变，透射电子显微镜观察到THP-1细胞发生凋亡，并且出现凋亡小体和核碎裂象等典型凋亡形态特征；0.05μg/ml PLY和0.1μg/ml PLY作用THP-1细胞6h后通过AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率分别为13.15%和24.58%，作用12h后细胞凋亡率分别为17.09%和60.08%（P
目的：通过研究姜黄素对转化生长因子-β

（Transforming growthfactor-β，TGF-β1）诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞内基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9, MMP-9)表达以及侵袭能力的影响，探讨TGF-β/Smad和(或)TGF-β/MAPKs信号通路在姜黄素抑制TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能存在的作用机制。 方法：1. CCK-8法检测姜黄素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用。 2．侵袭小室观察姜黄素对TGF-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞内的侵袭能力的影响。 3. Western blot检测姜黄素对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞内MMP-9的蛋白表达以及上游Smad2、ERK1/2、p38的磷酸化水平。 4.明胶酶谱法检测姜黄素对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞上清液中MMP-9的活性变化。 5. Western blot和酶谱法检测姜黄素，ERK特异性抑制剂PD98059，p38特异性抑制剂SB203580对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9蛋白表达及活性变化。 结果：1. CCK-8结果证实低浓度(≤10μM)姜黄素作用48h内，对乳腺癌MDA-MB-231细胞没有明显的细胞毒性作用（P＞0.05）；浓度大于10μM的姜黄素呈剂量，时间依赖性抑制细胞的生长（P＜0.05）。 Obeticholic Acid solubility dmso 2.侵袭小室检测显示姜黄素(≤10μM)呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量（P＜0.05）。 3. Western blot显示姜黄素(≤10μM)可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9，p-Smad2，p-ERK1/2以及p-p38的蛋白表达，其抑制作用呈浓度，时间依赖性。 Selleck CP868596 4.明胶酶谱法结果表明姜黄素(≤10μM)随浓度增加对TGF-β1诱导的MMP-9活性的抑制作用显著增强（P＜0.05）。 5. ERK特异性抑制剂PD98059（30μM）抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素(10μM)相似，而p38特异性抑制剂SB203580（20μM）对MMP-9没有明显影响（P＞0.05）。 结论：姜黄素可能通过TGF-β/Smad，TGF-β/ERK信号通路降低TGF–β1诱导的MMP-9表达及其活性，从而抑制MDA-MB-231细胞侵袭性。
目的：甲基乙二醛（MGO）是葡萄糖活性代谢产物，晚期糖化终产物受体（RAGE）可抑制MGO代谢的关键酶乙二醛酶1（GLO-1）。MGO和晚期糖化终产物受体的水平在糖尿病人中明显增高，与糖尿病加速动脉粥样硬化有关，但它们之间相互作用在糖尿病加速动脉粥样硬化中的意义仍不清楚。本课题组前期研究发现MGO诱导Jurkat细胞分泌炎症因子TNF-α、IFN-γ。本实验将进一步研究RAGE及其胞内信号对MGO诱导的Jurkat细胞分泌TNF-α和IFN-γ的影响，为了解糖尿病加速动脉粥样硬化机制提供了实验基础。

方法：①不同浓度的MGO（0、15、30、60μM）作用PHA（0.25μg/ml）预刺激的Jurkat细胞24h，Western blot检测RAGE表达。②不同浓度MGO（0、15、30、60μM）作用于PHA预刺激的Jurkat细胞24h，ELISA检测TNF-α和IFN-γ的分泌；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。③不同浓度MGO（0、15、30、60μM）作用PHA预刺激的Jurkat细胞24h, 哪里 Western blot测钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（CaMKIV）的表达；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。免疫荧光检测30μM MGO作用0、15、30、60min后的Jurkat细胞内CaMKIV转核情况；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。④30μM

MGO作用PHA预刺激24h的Jurkat细胞0、15、30、60min，Western blot检测p38MAPK磷酸化表达；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。⑤30μMMGO作用于CaMKIV抑制剂KN62（10μM）、p38MAPK抑制剂SB203580（25μM）预处理的Jurkat24h，ELISA检测TNF-α和IFN-γ的分泌。 结果：①MGO作用于PHA预刺激的Jurkat细胞24小时，Western Blot显示Jurkat细胞表达RAGE，15、30、60μM MGO均上调RAGE的表达，与MGO未作用组比较差异有统计学意义（P<0.05）。RAGE抗体能抑制MGO诱导Jurkat细胞分泌TNF-α及IFN-γ（p0.05）。③15-60μM MGO能增加CaMKIV的表达，与MGO未作用组比较差异有统计学意义（p<0.05）。RAGE抗体抑制MGO诱导的CaMKIV的表达（p0.05）。免疫荧光显示30μM MGO作用15-60min促进Jurkat细胞CaMKIV核转位；RAGE抗体抑制MGO诱导的CaMKIV蛋白核转位，而非特异抗体预处理对MGO诱导CaMKIV蛋白核转位无影响。④30μM MGO作用Jurkat细胞15-60min引起Jurkat细胞内p38MAPK磷酸化表达增加（p<0.05）；RAGE抗体抑制MGO引起的p38MAPK磷酸化（p0.05）。⑤CaMKIV，p38MAPK通路抑制剂预处理抑制MGO诱导TNF-α和IFN-γ的分泌（p
目的：探讨烟酸能否通过诱导血红素加氧酶1表达抑制氧化应激导致的内皮细胞凋亡，以及烟酸诱导血红素加氧酶1表达的信号途径。进一步阐明烟酸抗动脉粥样硬化的药理机制，为烟酸的临床应用提供新的实验依据。 方法：过氧化氢（100uM）用于诱导氧化应激，实验分别使用不同浓度烟酸（0.25，0.5或1.

05)。但是与LPS组相比,LPS+小檗碱组ERK活性水平差异有统计学意义(P
目的:探讨p38MAPK蛋白在体外培养神经元中的激活及钙调蛋白抑制剂W-7的干预作用。方法:神经元原代培养并采用NSE免疫细胞化学技术鉴定神经元。取原代培养7d的大鼠皮质神经元随机分为5组:正常对照组,仅用DMEM/F12完全培养基;NMDA组,去除正常神经元培养液,加入NMDA50μmol.L-1,处理时间10min;W-7干预组,W-7浓度分别为25、50和100μmol.L-1,继续培养24h,加入NMDA

50μmol.L-1。免疫细胞化学染色法及免疫印记法检测皮质神经元内p38MAPK蛋白的表达水平。结果:培养6～12h后大部分神经元贴壁,随时间延长形态多变,突起逐渐增多,神经元突起间互相接触形成网络。NSE鉴定神经元纯度为90.86%;免疫细胞化学染色法检测,NMDA组p38MAPK蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),W-7组低于NMDA组(P<0.05或P<0.05),W-7干预组p38MAPK表达水平低于NMDA组(P<0.01),呈剂量依赖性。结论:NMDA导致皮质神经元p38MAPK蛋白表达增高,W-7可降低p38MAPK的蛋白表达。
PC12细胞被广泛用于神经细胞功能、分化、凋亡和神经递质分泌,以及潜在的分子机制的研究。氧化应激可导致PC12细胞凋亡,其作用方式为激活对氧化还原反应敏感的细胞信号传导,主要与丝裂原活化蛋白激酶、线粒体凋亡及NF-κB信号传导途径有关。本文综述了氧化应激致PC12细胞凋亡的信号传导途径,旨在为神经系统氧化应激相关疾病的抗氧化剂药物治疗和凋亡信号途径药物干预治疗提供理论依据。
肠缺血再灌注(intestinal 查找更多 ischemia reperfusion,IIR)损伤是常见的组织器官损伤之一,它在严重感染、外伤、休克、心肺功能不全、器官移植等的过程中起重要作用。其机制主要为缺血一段时间后,组织适应了低氧环境的新陈代谢,血流的回复导致激活血管内巨噬细胞,继而相应的生成活性氧自由基(ROS),ROS又诱发内皮损伤,以及原炎性因子
前B细胞克隆增强因子(PBEF)是具有促进早期B细胞分化的一类生长因子,其基因于1994年首次自人外周血淋巴细胞cDNA基因文库中克隆获得。2005年在内脏脂肪细胞中发现一种与PBEF基因序列相同的cDNA基因序列,将其命名为Visfatin即内脏脂肪素或内脂素,此后研究发现其具有烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)活性,因此又将其命名为Nampt。现将近年来PBEF基因的分子生物学特征及其
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内主要的信号转导系统之一。p38MAPK是MAPK家族中的重要成员,其介导的信号转导通路在炎性反应中具有重要作用。p38MAPK与急性坏死性胰腺炎关系密切,不仅参与了急性坏死性胰腺炎胰腺的局部损伤,还参与了胰外并发症的发生。本文对p38MAPK信号通路在炎症中的作用及其在急性坏死性胰腺炎中的研究进展予以综述,旨在为急性坏死性胰腺炎的治疗提供新的思路。
缺血再灌注损伤(Ischemia-Reperfusion

Pimasertib细胞系 Injury,IRI)是指在缺血基础上恢复血流后,不仅未减轻原有组织的缺血性损伤,反而使其功能障碍或结构损伤进一步加重的现象。肠道是对缺血反应最敏感的组织之一,严重创伤、失血等原因均可引起肠缺血再灌注损伤(Intestinal Momelotinib研究购买 Is-chemia-Reperfusion Injury,IIRI)。研究发现
近年来的研究发现,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是细胞将信号从细胞膜传递到细胞核的主要通路。其中p38MAPK可通过调节转化生长因子β1、核因子-κB及血管内皮生长因子等炎症因子的表达影响糖尿病肾病的进程。研究p38MAPK及其信号转导通路机制可能为糖尿病肾病的治疗提供新的理论基础,也可为临床提供新的更为有效的诊治手段。
目的探讨吡格列酮(PIO)对血管内皮细胞的保护作用及其可能机制。方法用四唑盐比色法(MTT法)检测PIO对高糖损伤血管内皮细胞的最佳保护浓度;按不同干预条件,将血管内皮细胞分为7组:正常培养组[A组,葡萄糖(Glu)5.5 mmol/L],高糖培养组(B组,Glu 37.5 mmol/L),C、D、E组分别为不同浓度PIO+高糖培养,F、G组为不同浓度SP600125+PIO+高糖培养。Western blot法检测各组c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达。结果 PIO在1×10-8~1×10-4mmol/L时对高糖损伤的血管内皮细胞有保护作用;与B组相比,C~E组p-JNK表达降低,差异有统计学意义(P<0.