6 ABL抑制PDGF诱导的ERK1/2信号通路的激活 免疫共沉淀分析结果显示,ABL(5、10、20μM)可剂量依赖性地抑制PDGF(20 ng/ml)诱导的PDGF受体(PDGFR)的磷酸化,对PDGFR下游的MEK1/2、ERK1/2的激活分析显示,增加的MEK1/2和ERK1/2的磷酸化水平也随着ABL浓度的增加而逐渐降低。通过转染持续激活的MEK1/2表达质粒pCMV-MEK1,发现强制活化的ERK1/2可部分逆转ABL处理所致的VSMC增殖抑制,提示抑制ERK1/2信号通路的活化是ABL抗VSMC增殖的重要环节。 1.7 ABL抑制球囊损伤诱导的新生内膜形成 为了确定ABL在体内的抗VSMC增殖活性,建立大鼠颈总动脉内皮球囊损伤模型。形态学分析显示,给予ABL(26 mg/kg/day)的大鼠,球囊损伤诱导的血管新生内膜的增生程度较单纯球囊损伤组明显减轻,其面积分别为0.05±0.02

mm2和0.15±0.04 mm2,两者比较具有显著性差异(P < 0.01)。对血管组织切片进行TUNEL染色发现,ABL组新生内膜中阳性染色细胞数目较球囊损伤组明显升高,提示ABL可诱导新生内膜细胞发生凋亡。 综上所述,ABL可以阻断PDGF激活的ERK1/2信号通路,从而阻滞VSMC细胞周期的进程,抑制细胞DNA的合成,诱导细胞凋亡,并且可以抑制大鼠颈总动脉球囊损伤模型中血管新生内膜的形成。 2 ABL与Celecoxib协同抑制环加氧酶-2(COX-2)的表达和乳腺癌细胞的生长 以往研究证实,ABL具有抑制COX-2表达和PGE2释放的作用,但是ABL在肿瘤治疗方面是否具有成药性尚不清楚。COX-2特异抑制剂Celecoxib在乳腺癌的治疗和预防方面的有效性已得到临床证实,但是由于其副作用多的缺点而限制了该药的应用。基于ABL和Celecoxib具有相似的作用靶点,本研究探讨了二者联用对乳腺癌细胞的抑制作用,并对其抗肿瘤活性和药理机制进行了评价。 selleck 抑制剂 2.1 ABL和Celecoxib协同抑制乳腺癌细胞的增殖 将处于对数生长期的乳腺癌细胞(MDA-MB-231,MDA-MB-468和MCF-7)接种于96孔板中,分别加入不同浓度的ABL(5、10、25、50、100、150μM)和Celecoxib(2.5、5、10、20、40μM)处理细胞48 selleck chemicals h后,用MTT法检测细胞增殖活力。结果显示,随着化合物浓度的增加,各种乳腺癌细胞增殖活力不断下降,呈剂量依赖性的特点。然而,在两种化合物共同作用于乳腺癌细胞后,ABL(50μM)与Celecoxib(5μM)就可以产生明显的抑制作用,且抑制强度均明显高于相同剂量的单一制剂处理组(P < 0.05)。用Calcusyn软件分析发现,ABL与Celecoxib联用CI值< 0.05)。而在COX-2低表达的MDA-MB-468和MCF-7细胞中,两种化合物联用对凋亡的影响不明显。此外,通过Western blot检测发现,两种制剂联用能够显著激活MDA-MB-231细胞中的Caspase-3与Caspase-9,从而促进细胞凋亡的发生。

2.3 ABL和Celecoxib协同抑制乳腺癌细胞COX-2表达和活性 为了进一步探讨ABL与Celecoxib协同作用促进高表达COX-2的MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡的作用机制,进而检测了ABL和Celecoxib对COX-2的表达和活性的影响。RT-PCR、Western blot和免疫荧光染色结果表明,在高表达COX-2的MDA-MB-231细胞中,ABL(50μM)与Celecoxib(5μM)的联用明显抑制COX-2的转录和表达,减少PGE2的分泌,抑制作用明显高于相同剂量的单化合物处理组;在COX-2低表达的MCF-7细胞中,ABL(50μM)与Celecoxib(5μM)的联用同样可以抑制TPA(0.1μM)诱导的COX-2的表达。 2.4 ABL和Celecoxib协同抑制乳腺癌细胞COX-2基因转录的分子机制 报告基因分析结果表明,在转染COX-2启动子报告基因的MCF-7细胞中,ABL(50μM)与Celecoxib(5μM)可以协同抑制TPA(0.1μM)诱导的COX-2报告基因转录活性(P GDC-0449化学结构 < 0.05)。染色质免疫沉淀(ChIP)和DNA蛋白亲和分析实验发现,ABL与Celecoxib的协同效应是通过抑制转录因子ATF-2、CREB-1和c-Fos的激活及其与COX-2基因启动子区的CRE和AP-1元件的结合从而下调COX-2基因的转录活性。 2.5 ABL和Celecoxib协同抑制乳腺癌细胞中Akt和p38信号通路的激活 Akt和MAPK信号通路在介导COX-2基因的转录激活中发挥重要作用。在MCF-7细胞中,ABL(50μM)与Celecoxib(5μM)可以协同抑制TPA(0.1μM)诱导的Akt和p38信号通路的激活,而对JNK和ERK途径的影响不明显。将Akt表达质粒Ca-Akt和p38表达质粒MKK6b分别转染MCF-7细胞,均可以部分消除ABL与Celecoxib对COX-2的报告基因活性的协同抑制效应,转录因子活性分析也得到相似的结果。

综上所述,在细胞和整体水平上,ABL可以通过抑制乳腺癌细胞COX-2的表达和激活从而协同增强Celecoxib的抗肿瘤效应,为两者的联用提供实验依据。 3 ABL衍生物ABL-N通过激活JNK信号通路促进乳腺癌细胞凋亡 以往研究表明,ABL抑制肿瘤生长和诱导细胞凋亡的作用较弱,为了提高ABL的效力和成药性,对ABL的6-OH进行修饰,筛选得到ABL-N。活性分析显示,ABL-N对多种肿瘤细胞株的增殖具有很强的抑制效应。在前期研究的基础上,本部分重点观察了ABL-N对体外培养的人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响,并且通过体内实验对ABL-N的抗瘤活性进行了评价。 3.1 ABL-N抑制肿瘤细胞的增殖 将多种组织来源的肿瘤细胞株( MCF-7、MDA-MB-468、MDA-MB-231、Du145、PC-3、LoVo和HT-29)接种于96孔板中,分别加入不同浓度ABL-N(5、10、20、40μM)处理细胞1、3、6、12、24 h后,用MTT法检测各种细胞的增殖活力。结果显示,随着ABL-N浓度的增加和作用时间的延长,各种肿瘤细胞株增殖活力逐渐下降,提示ABL-N具有较广的抗肿瘤谱,其抗肿瘤增殖作用具有剂量和时间依赖性。 3.2 ABL-N阻滞乳腺癌细胞周期进程 用流式细胞仪检测细胞周期分布结果显示,ABL-N(20μM)作用于乳腺癌细胞(MDA-MB-231,MDA-MB-468和MCF-7)6、12、24 h后,可使处于G2/M期的细胞数明显增加,提示ABL-N可能是通过抑制细胞周期进程,使细胞停滞于G2/M期从而抑制细胞的增殖。 3.

05),和C组相比各T组GSK-3β蛋白磷酸化水平显著升高(P0.05),和T组相比GSK-3β蛋白磷酸化水平显著降低(P
糖原合酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β),是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它参与调节细胞的多种生命活动,如增殖、分化、凋亡、粘附和细胞因子活性等。新近研究发现GSK-3β还参与了信号通路TNF-α-NF-κB的调控。例如GSK-3β基因敲除小鼠会出现严重炎症反应缺陷和肝细胞发育障碍,致使其胚胎期死于大量肝细胞凋亡,类似肿瘤坏死因子受体(Tumor necrosis factor 还有 receptor, TNFR)敲除或核因子-κB(Nuclear factor-κB, NF-κB)亚基p65敲除小鼠表型;同时该基因敲除小鼠的胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEF)亦对肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)等多种炎症因子有严重反应缺陷,导致TNF-α-NF-κB信号通路不能激活。 已知在70%肝切除术所造成的大鼠肝再生模型中TNF-α-NF-κB信号通路于肝切后数h迅速激活,随后启动多种重要基因如IL-6、iNOS、MMPs、cyclinD1等表达,从而对保护肝细胞抵抗细胞凋亡,促进细胞周期进程具有关键性作用。许多文献表明,一旦TNF-α-IKK-IκB-NF-κB信号通路上任一环节受阻,肝细胞对TNF-α诱导的凋亡作用尤其敏感,肝细胞再生进程将受严重影响。

考虑到GSK-3β能参与多种重要的细胞生命活动,而同时目前文献中关于GSK-3β在肝再生过程中的调控作用尚无报道,因此本课题旨在证明以下几个问题:1、GSK-3β在肝再生过程是否以及如何变化;2、抑制GSK-3β活性是否影响肝再生;3、如果GSK-3β对肝再生过程具有一定调控作用,其机制是什么,是否与TNF-α-NF-κB信号通路有关。 因此我们采用肝切前0.5h静脉注射GSK-3β专一性抑制剂SB216763的方法使GSK-3β活性受到抑制,而后行大部肝切除术,取不同再生时间点的标本检测再生肝细胞的增殖、凋亡以及分子生物学指标等。我们发现GSK-3β在肝切后0.5h内即发生大量核转位;其次使用GSK-3β专一性抑制剂SB216763抑制其活性可导致大鼠肝切后24h的再生肝细胞增殖减少,凋亡增加,凋亡蛋白活性增强;再者抑制GSK-3β活性可下调转录因子NF-κB的DNA结合活性及其下游基因iNOS和IL-6的表达;此外GSK-3β活性受抑制使再生肝细胞的p21和COX2的表达也受到不同影响。因此我们认为GSK-3β参与了肝再生初期的调控。其作用机制包括促进NF-κB信号通路活性和下游基因表达;以及增强COX2表达和抑制细胞周期抑制蛋白p21表达,从而保护肝细胞、促进细胞周期进程。
肝细胞肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,目前已成为我国第二位的恶性肿瘤致死原因。肝癌治疗目前仍以手术为主的综合治疗,但中晚期患者常常由于肝癌发生了转移而失去实施手术的机会。而在临床中,肝癌的侵袭转移和术后复发是患者死亡的主要原因。所以,肝癌的转移与复发成为当前肝癌治疗研究的热点问题。虽然目前对肝癌转移的相关因素研究较多,但确切的机制仍不清楚。新近的研究表明,糖原合成酶激酶(GSK)-3β在细胞的迁移过程中起可能起到重要作用。

也许 GSK-3是一个丝氨酸/苏氨酸类激酶,早期研究认为该酶的功能在于磷酸化肝糖原合成酶(GS)并使之失活。后来研究表明,该酶可磷酸化众多底物,从而发挥调节细胞增殖、凋亡等许多重要的细胞功能,在蛋白合成、细胞增殖、细胞分化和细胞运动等诸多方面,都扮演着相当重要的角色。GSK-3广泛的存在于真核生物中,在哺乳动物体内发现有两种亚型存在,即GSK-3α和GSK-3β,GSK-3β是两个亚型中较小的一个,由482个氨基酸组成,分子量为47kD。GSK-3β最初由骨骼肌中分离出来,但该酶广泛表达于动物的所有组织,特别在大脑。GSK-3β与多种情况下的细胞凋亡有关,但是确切的机制还不是很清楚。

selleck screening library 目前已有研究表明GSK-3β在肝癌的发生发展过程中起到了重要作用,并参与了肝癌细胞生长和细胞凋亡信号通路调控。Patricia等人发现,通过抑制GSK-3β的活性可有效地抑制肝癌细胞的生长。但是,GSK-3β是否参与了肝癌细胞的转移仍然是个有待于研究的问题。因此,本研究通过改变GSK-3β的活性来观察其对肝癌细胞迁移能力的影响,以期了解GSK-3β在肝癌细胞迁移过程中所扮演的角色,为原发性肝癌的治疗提供新的靶点。 1.下调GSK-3β活性对肝癌细胞迁移能力的影响 目的:通过药理学方法抑制GSK-3β活性观察其对肝癌细胞迁移速度的影响。方法:应用药理学方法,以GSK-3β特异性的抑制剂LiCl和SB216763分别抑制SMMC-7721和Hep3B细胞中GSK-3β的活性,通过划痕试验检测不同活性状态下肝癌细胞迁移能力的差别。结果:划痕24h后,SMMC-7721细胞的相对迁移率分别下降36.44%和41.78%;Hep3B细胞的相对迁移率都下降26.66%。其中,SMMC-7721细胞对抑制剂的反应比Hep3B细胞更敏感,迁移率降低40%左右。并且发现Hep3B细胞对SB216763和LiCl敏感程度相当,而SMMC-7721对SB216763较为敏感。结论:应用GSK-3特异性抑制剂后,单位时间内肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721的迁移率较对照组明显降低,证明GSK-3β的活性下调后肝癌细胞的迁移能力降低。 2.GSK-3βS9A、GSK-3βWT、GID5-6对肝癌细胞迁移能力的影响: 目的:通过调节GSK-3β活性观察其对肝癌细胞迁移速度的影响。方法:应用载体表达法,通过chamber小室观察转染不同质粒后,SMMC-7721肝癌细胞迁移能力的变化。结果:转染GSK-3βWT、GSK-3βS9A后,肝癌细胞中GSK-3β的活性被增强,而其相对迁移率却分别下降为30.9%和18.09%;而转染GID5-6后,肝癌细胞的相对迁移率下降为18.04%。结论:肝癌细胞的迁移能力不仅与GSK-3β的活性有关,也与其他一些影响因素相关。结合GSK-3β在神经细胞的发育过程中,p-GSK-3β的不对称分布影响其极性形成这一事实,我们认为p-GSK-3β的不对称分布可能也参与影响肝癌细胞迁移的过程之中。 3.

构建Pthlh不同长度报道基因，利用双荧光素酶基因报告系统研究突变X对Pthlh转录活性的影响。 实验结果： 一、PTH1-34可治疗FGFR3功能增强的软骨发育不良 1. PTH处理可使TDII小鼠存活，但存活的TDII小鼠仍然存在骨骼发育障碍：个体短小、骨骼短缩弯曲、生长板结构紊乱、颅底软骨连接提前闭合、骨小梁减少等； 2. PTH处理促进ACH小鼠大体生长，缓解其头颅圆钝，促进其次级骨化中心出现，以及改善其成年期骨量减少； P450 pathway 抑制剂s 3. PTH可促进培养骨组织生长，并主要通过促进软骨生长发挥作用； 4. PTH可促进ACH小鼠肢芽Micromass软骨小结形成及基质分泌； 5. PTH对ACH软骨的影响可能通过降低FGFR3的表达及活性，促进PTHrP表达来完成。 二、FGFR3参与终板/椎间盘稳态维持 1. ACH小鼠终板自发性退变—-骨化较WT小鼠延迟； 2.全身及软骨内敲除FGFR3小鼠脊柱侧弯、骨量减少、椎体生长板及终板结构紊乱，椎体/椎间盘发退变较野生小鼠提前：骨赘生成； 3.成年期软骨细胞敲除FGFR3后小鼠椎间盘终板出现退变的早期表现：软骨基质丢失，终板出现类似异位成骨的骨样组织，成骨标记OC、软骨基质降解酶MMP13表达增加。

三、突变X基因抑制软骨发育及Pthlh转录活性 1.突变X基因抑制软骨增殖、基质分泌及降低软骨分化相关基因Col2、Col10、Aggrecan、PTHrP及FGFR3表达； 2.突变X可能通过pthlh基因启动子上的AP1结合位点抑制其转录活性。 结论： 一、PTH1-34可治疗FGFR3功能增强所致软骨发育不全及致死性发育不良 二、FGFR3对终板/椎间盘退变有一定的保护作用 三、突变X基因可能通过抑制软骨增殖分化、Pthlh转录活性及促进FGFR3表达导致软骨发育障碍
TLR2(Toll like receptor2)作为固有免疫受体家族的重要成员,参与机体免疫系统抵御体内及体外危险因素的攻击。近期研究表明TLR2还参与包括癌症、自身免疫及心脑血管等多种疾病的发生和进展。本研究发现TLR2在急性粒细胞性白血病细胞高表达。因此靶向TLR2进行药物开发对多种疾病具有很好的治疗前景。本研究主要通过构建TLR2特异性配基细胞筛选模型,从噬菌体展示肽库中筛选出与TLR2特异性结合的多肽。以多肽为载体偶联不同治疗性物质,靶向治疗急性粒细胞白血病和肿瘤。具体内容主要分为以下三部分：

1.TLR2特异性配基细胞筛选模型的构建、验证及TLR2配基多肽的筛选。 为了构建TLR2特异性配基细胞筛选模型,我们将TLR2及其辅助型受体CD14、 TLR1和TLR6的表达质粒与TLR2信号通路NF-κB启动子荧光素酶报告基因质粒共转染至人胚肾HEK293细胞,经过筛选得到稳定表达细胞株。利用这一筛选系统从噬菌体展示7肽库中通过生物淘洗-快速差异筛选配基方法(BRASIL)筛选出与TLR2特异性结合的肽段Pep2和C8,经ELISA、流式细胞术和细胞免疫荧光方法鉴定以上肽段均能特异性结合TLR2。通过荧光素酶活性实验验证肽段C8作为TLR2配基激活TLR2/TLR1信号通路；激光共聚焦实验验证肽段Pep2作为靶向TLR2的细胞穿膜肽经受体内化进入细胞。综上所述,通过以上实验证明我们成功构建了TLR2特异性配基的细胞筛选模型,并且筛选到靶向结合TLR2的多肽。

或者 2.以靶向TLR2细胞穿膜肽Pep2为载体治疗急性粒细胞性白血病和淋巴瘤 细胞穿膜肽作为新的靶向药物传输载体在多种癌症治疗中具有高效低毒的优点。本研究发现TLR2在急性粒细胞性白血病(AML)和多种淋巴瘤细胞中高表达。为了验证靶向结合TLR2的细胞穿膜肽Pep2是否可以作为新的药物传输载体用于治疗AML,我们将该肽段偶联上一段促进细胞凋亡的多肽D(KLAKLAK)2,组成新的嵌合肽Pep2-D(KLAKLAK)2。实验结果表明Pep2-D(KLAKLAK)2可以靶向促进高表达TLR2(TLR2high)的AML细胞发生凋亡,而对低表达TLR2(TLR2low)的慢性粒细胞性白血病(CML)细胞则没有作用。Pep2-D(KLAKLAK)2抗白血病效应进一步在白血病临床骨髓样本和小鼠模型中得到验证。白血病小鼠骨髓切片TUNEL染色表明此嵌合多肽以TLR2依赖性方式促进AML细胞凋亡。综上所述,本研究证明TLR2可以作为治疗AML和淋巴瘤的潜在靶点,而嵌合多肽Pep2-D(KLAKLAK)2是一个有开发价值的候选药物。 以及 3.以细胞穿膜肽Pep2为载体靶向抑制TRB3的功能抑制肿瘤发生与进展 肿瘤细胞的过度增殖、侵袭和转移涉及一系列相关基因的表达和功能异常。TRB3(Tribbles Homologue3)在多种肿瘤细胞及肿瘤组织中高表达。为了探究TRB3与肿瘤发生和进展的关系,本研究发现抑制肿瘤细胞内TRB3的高表达能抑制肿瘤细胞的自噬活性。本研究深入探讨了TRB3调节自噬的分子机制,发现TRB3主要与自噬通路的“货车蛋白”P62相互作用,进而干扰P62与泛素化蛋白以及自噬标志蛋白LC3的结合,造成自噬活性被抑制,从而促进肿瘤的发生和进展。本研究进一步发现干扰肿瘤细胞内TRB3的表达显著降低肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移能力,提高荷瘤动物生存率。这些结果提示TRB3是治疗肿瘤的一个潜在靶点。利用这一机制,本研究从P62蛋白结构域中筛选出一段靶向结合TRB3的具有α螺旋结构的肽段,以细胞穿膜肽Pep2作为载体将其带入肿瘤细胞。结果显示该嵌合肽能干扰TRB3与P62的结合,激活肿瘤细胞自噬活性,在体内和体外起到抑制肿瘤生长和转移的作用。综上所述,我们的研究证明TRB3能作为连接自噬和肿瘤的桥梁,靶向阻断P62/TRB3之间相互作用可以明显抑制肿瘤发展。
多囊肾病(polycystic kidney disease,PKD)是指双侧肾脏发生多个囊肿且进行性长大而导致肾脏结构和功能损害的一种单基因遗传性疾病。根据遗传方式的不同多囊肾可以分为两种：常染色体显性遗传性多囊肾病和常染色体隐性遗传性多囊肾病。在北美大约有500,000受累ADPKD的发病率为1/500-1000,ARPKD的发病率为1/40000。B6C3Fe ala-bpck是一种常染色体隐性遗传性多囊肾(ARPKD)的动物模型。缺失的TMEM67基因与人类的MKS3以及Wistar大鼠多囊肾模型具有同源性。 目的： 在确定此模型作为ARPKD研究的可行性后,构建含目的基因TMEM67全长的载体pFlag-CMV-TMEM67.

05),且CCI组比HBO组降低显著(P<0.05)。CCI组、HBO组的磷酸化p38及P2X4受体含量较S组增加(P<0.05),且CCI组磷酸化p38及P2X4受体的表达比HBO组显著增加(P0.05),但与未给抑制剂第一部分实验的CCI组、HBO组比较明显增高(P<0.05);CCI组及HBO组的P2X4受体表达比S组显著增高(P0.05)。结论高压氧可能通过P2X4受体介导的p38

S6 Kinase 抑制剂 MAPK信号通路影响神经病理性疼痛大鼠。
目的分析胆酸降载脂蛋白A(Apo A)效应与miR-23b-3p的关系,研究胆酸降Apo A作用新机制。方法首先用生物信息学在线工具对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子肝细胞核因子4γ(HNF4γ)进行靶基因分析,使用荧光素酶报告系统对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子HNF4γ进行靶基因验证实验,Western blot检测Apo A表达水平、p38MAPK(MAPK:丝裂原活化蛋白激酶)及p-p38MAPK,实时定量PCR检测miR-23b-3p表达水平。结果生物信息学分析表明HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因,荧光素酶报告系统转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组,验证了HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因。胆酸呈剂量和时间依赖性抑制Hep G2细胞Apo A的表达,以32 mg/L和24 h的作用最显著。胆酸抑制Apo A表达与活化MAPK和上调miR-23b-3p有关。结论胆酸呈剂量和时间依赖性地下调Hep G2细胞Apo A表达水平;胆酸降Apo A与上调miR-23b-3p有关。
分娩疼痛具有典型的内脏痛及躯体痛,电针分娩镇痛是一种安全有效、操作简单、对母婴无创伤的非药物治疗方法。在针灸镇痛领域,MAPKs是较为重要的研究对象。p38MAPK信号通路可被应激刺激激活,对疼痛发生、发展起着重要的作用,从基因水平及细胞分子学理论了解P38 TNF-alpha抑制剂 MAPK与分娩镇痛的关系,是研究电针分娩镇痛机制一个很好的侧重点,也为电针分娩镇痛的进一步研究提供科学依据和理论基础。
目的观察黄芩苷对宫颈癌HeLa细胞侵袭转移的作用及其相应机制。方法利用MTT法检测黄芩苷对HeLa细胞增殖的影响;Transwell小室法检测黄芩苷对HeLa细胞侵袭能力的影响;Real-time

PCR法检测黄芩苷对MMP-2、MMP-9RNA表达水平的影响;Western blot法检测黄芩苷对MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响;Western blot法检测黄芩苷对P38和p-P38蛋白表达的影响;Real-time PCR法检测黄芩苷和sb203580联合应用对MMP-2和MMP-9RNA表达水平的影响。结果黄芩苷能够有效抑制HeLa细胞的增值,当质量浓度超过60μg/mL时,与对照组相比(0μg/mL)差异出现统计学意义。在低于细胞增殖抑制浓度时,黄芩苷也能够有效抑制HeLa细胞的侵袭,10、20、40μg/mL组穿过基质胶到达小室底端的细胞数目分别为对照组的(97.58±17.78)%、(67.95±49.75)%和(32.35±20.41)%。黄芩苷能够有效抑制HeLa细胞中MMP-2和MMP-9的表达及有效抑制HeLa细胞中P38的磷酸化水平;P38信号通路抑制剂预处理,能够增强黄芩苷对MMP-2和MMP-9表达的抑制作用。结论黄芩苷能够有效抑制HeLa细胞的侵袭转移,这种作用可能与其通过调节P38信号通路的活性进一步调节MMP-2和MMP-9的表达有关。
目的研究血管紧张素Ⅱ(Ang

Ⅱ)对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)转录因子Ets-1及其下游促纤维化因子表达和细胞增殖的调节及相关的分子机制。方法将原代培养的大鼠CFs分为对照组,Ang Ⅱ处理不同时间组以及不同剂量组,采用实时定量RT-PCR及western blotting实验技术检测Ang Ⅱ对Ets-1mRNA及蛋白表达的影响。用Ang Ⅱ受体拮抗剂、MAPKs、PKC及PTK抑制剂预处理CFs,测定其对Ang Ⅱ诱导的Ets-1、结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达及细胞增殖的影响。结果在CFs中,Ang Ⅱ可呈时间及浓度依赖性诱导Ets-1表达(P
目的探讨p38 {Selleck Anti-diabetic Compound Library|Selleck Antidiabetic Compound Library|Selleck Anti-diabetic Compound Library|Selleck Antidiabetic Compound Library|selleck Anti-diabetic Compound Library|selleck Antidiabetic Compound Library|selleck Anti-diabetic Compound Library|selleck Antidiabetic Compound Library|Anti-diabetic Compound Library|Antidiabetic Compound Library|Anti-diabetic Compound Library|Antidiabetic Compound Library|Anti-diabetic Compound Library|Antidiabetic Compound Library|Anti-diabetic Compound Library|Antidiabetic Compound Library|Anti-diabetic Compound Library|Antidiabetic Compound Library|Anti-diabetic Compound Library|Antidiabetic Compound Library|Anti-diabetic Compound Library|Antidiabetic Compound Library|Anti-diabetic Compound Library|Antidiabetic Compound Library|Anti-diabetic Compound Library|Antidiabetic Compound Library|buy Anti-diabetic Compound Library|Anti-diabetic Compound Library半抑制浓度|Anti-diabetic Compound Library价格|Anti-diabetic Compound Library花费|Anti-diabetic Compound Library溶解度|Anti-diabetic Compound Library购买|Anti-diabetic Compound Library制造商|Anti-diabetic Compound Library查找购买|Anti-diabetic Compound Library订单|Anti-diabetic Compound Library mouse|Anti-diabetic Compound Library chemical structure|Anti-diabetic Compound Library分子量|Anti-diabetic Compound Library molecular weight|Anti-diabetic Compound Library数据表|Anti-diabetic Compound Library supplier|Anti-diabetic Compound Library体外|Anti-diabetic Compound Library细胞系|Anti-diabetic Compound Library concentration|Anti-diabetic Compound Library nmr|Anti-diabetic Compound Library体内|Anti-diabetic Compound Library clinical trial|Anti-diabetic Compound Library cell assay|Anti-diabetic Compound Library screening|Anti-diabetic Compound Library high throughput|buy Antidiabetic Compound Library|Antidiabetic Compound Library半抑制浓度|Antidiabetic Compound Library价格|Antidiabetic Compound Library花费|Antidiabetic Compound Library溶解度|Antidiabetic Compound Library购买|Antidiabetic Compound Library制造商|Antidiabetic Compound Library查找购买|Antidiabetic Compound Library订单|Antidiabetic Compound Library chemical structure|Antidiabetic Compound Library数据表|Antidiabetic Compound Library supplier|Antidiabetic Compound Library体外|Antidiabetic Compound Library细胞系|Antidiabetic Compound Library concentration|Antidiabetic Compound Library clinical trial|Antidiabetic Compound Library cell assay|Antidiabetic Compound Library screening|Antidiabetic Compound Library high throughput|Anti-diabetic Compound high throughput screening| MAPK对人主动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响。方法分别使用药理学抑制剂和siRNA干预细胞。药理学抑制剂试验细胞分为:1正常对照组,平滑肌细胞完全培养基正常培养;2 DMSO(p38 MAPK抑制剂溶剂)对照组,0.01%DMSO处理;3 p38 MAPK抑制剂组,0.01%p38 MAPK抑制剂(20 mg/m L)处理。基因沉默试验细胞分为:1静态对照组,平滑肌细胞完全培养基正常培养;2阴性对照siRNA组,M ACSfectin试剂转染阴性对照siRNA 48 h;3 p38 M APK siRNA组,M ACSfectin试剂转染p38 M APK siRNA 48 h。采用qRT-PCR法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达;采用Western blotting法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达以及p38 MAPK转染效率;荧光显微镜观察siRNA转染效率。结果与正常对照组相比,DMSO对照组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达无明显变化(P>0.05),p38 MAPK抑制剂组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达显著降低(P0.

5g/kg·d给治疗组灌胃30天，观察各组大鼠一般情况，称体重；用放射免疫法检测各组大鼠性激素水平；用精子自动检测仪检测精子的密度及活率；用免疫组织化学法检测各组大鼠睾丸中TGF-β1/CYP19的表达。 研究结果：模型组大鼠体重与对照组相比明显减轻（P﹤0.05），与正常对照组相比，模型组T、E2显著降低(P0.05)；精子密度显著降低（P﹤0.05），精子活率显著减弱（P﹤0.05）；免疫组化结果显示，TGF-β1和CYP19均表达于睾丸长形精子细胞，模型组大鼠睾丸TGF-β1的表达显著高于对照组，而金匮肾气丸治疗后，其表达略有降低，但金匮肾气丸治疗组TGF-β1的表达仍高于正常对照组，模型组大鼠CYP19的表达明显低于正常对照组，而金匮肾气丸治疗组的表达略高于模型组而低于正常对照组。

研究结论：金匮肾气丸能够显著增加肾阳虚大鼠的体重、血清性激素水平及精子的密度与活率，降低肾阳虚大鼠睾丸中TGF-β1的表达，同时能增加CYP19基因的表达。 第二部分：阻滞TGFβRⅠ后肾阳虚大鼠精子生成及 TGF-β1/CYP19的表达 研究目的：观察显微注射后大鼠性激素水平、精子密度及活率、TGF-β1/CYP19的表达等。 研究方法：将40只成年雄性SD大鼠随机分为4组：正常组、模型组、正常+阻滞组、模型+阻滞组，每组10只。20只成年雄性SD大鼠进行显微注射TGFβRⅠ阻滞剂，阻滞TGF-β1表达；检测大鼠的性激素水平；用精子自动检测仪检测精子的密度及活率；用免疫组织化学法观察各组大鼠睾丸中TGF-β1/CYP19的表达。研究结果：进行显微注射后，模型组、正常+阻滞组、模型+阻滞组与正常组比较，血清T及E2水平升高，精子密度及活率升高，均具有统计学意义(P0.05)；免疫组织化学染色结果显示，TGF-β1/和CYP19阳性表达位于长形精子细胞，两组大鼠TGF-β1/和CYP19表达均无显著差异，但较正常组大鼠相比，TGF-β1表达仍较高，而CYP19表达仍较低。

Target Selective Inhibitor Library concentration 研究结论：金匮肾气丸能显著改善模型大鼠的肾阳虚症状，增加精子生成，其机制可能是通过抑制了TGFβRⅠ的表达，进而影响了精子生成，为进一步探讨金匮肾气丸治疗雄性生殖障碍的机制提供了可靠的实验依据。
研究目的 骨质疏松症是一种以骨量低下、骨微结构破坏,导致骨脆性增加、易发生骨折为特征的系统性、全身性骨病。在老年人群及绝经后妇女中骨质疏松发病率很高,严重影响了生活质量。据统计,60岁以上老年人中,患此症的比例达60%-80%,骨质疏松症已成为一个全球性的健康问题,该病的预防和治疗已经成为我国公共卫生事业面临的严峻问题。目前,用于治疗骨质疏松的药物可分为1、抗骨吸收的药物,如降钙素、维生素D、雌激素、双膦酸盐等。2、增加骨形成的药物,如氟化物、甲状旁腺激素等。3、具有促进骨形成和抑制骨吸收双重作用的药物,雷奈酸锶(strontium 点击此处 ranelate)。由于雷奈酸锶在抑制骨吸收的同时促进骨的形成,因此,比起传统的治疗骨质疏松症药物,雷奈酸锶在影响骨代谢方面具有双重作用,锶盐代表了在骨质疏松症治疗史上一个新的发展方向。目前对其在抗骨质疏松症方面的研究已成为热点。 骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)是一种多潜能成体干细胞,具有向成骨细胞分化的能力。在BMSCs向成骨细胞分化中,受到多种信号通路调控,其中TGF-p(研究转化生长因子β1、transforming growth factor β1)、 BMPs(骨形态发生蛋白,bone morphogenetic selleck抑制剂 proteins)、Wnt、MAPK(丝裂原活化蛋白激酶,mitogen-activated protein kinase)和Hedgehog(刺猬蛋白信号通路)信号通路发挥了重要作用。TGF-β在骨形成和骨吸收中的平衡方面起重要作用,可促进骨髓间充质干细胞向成骨分化,抑制其向破骨细胞分化,它在骨重建过程中的作用逐渐成为人们研究的热点。Smads蛋白直接参与TGF-β超家族成员的信号转导过程,它作为TGF-β下游的信号蛋白分子,将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内,是TGF-β信号转导通路的始动因子。Runx2又称为核心结合因子al

(Cbfα1),是一种多功能转录因子蛋白,在成骨细胞的分化和骨形成方面起重要的作用,TGF-β、BMP-2等多种因子可作为Runx2的上游调节因子调节Runx2的活性。 我们前期研究已经证实Sr可通过上调TGF-β1和Runx2表达来促进BMSCs向成骨细胞分化。因此,本实验在前期研究基础上进一步阐明Sr是否通过TGF-β1/Smad信号通路诱导BMSCs向成骨分化。 1.材料与研究方法 1.1、BMSCs的获取取四周龄SD大鼠颈推脱臼处死,75%乙醇浸泡5-10min,无菌操作下取双侧股骨和胫骨,剪去干垢端,用无菌注射器吸取含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素G和100mg/ml链霉素的DMEM/F12培养液反复冲洗骨髓腔得到骨髓细胞悬液,并移至15ml离心管；1000r/min,5min离心,制成单细胞悬液,以1-3x105cells/cm2接种于25cm2培养瓶中,置于37℃、5%CO2培养箱内进行培养；24h后半量换液,以后每2-3d换液一次；倒置显微镜下观察细胞,至细胞融合至80%时进行传代,此后每隔3-4d传代一次。 1.2、BMSCs的成骨诱导选取第3-5代BMSCs,将细胞种植于培养皿或培养板中,待细胞贴壁后加入成骨诱导液(含10%胎牛血清、100U/ml青霉素及100μg/ml链霉素、10-8mol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/ml抗坏血酸的DMEM/F12培养基)培养。 1.3、Western blotting法检测p-Smad2、Smad2和Runx2蛋白的表达水平选取第3代细胞,接种于60mm培养皿中,收集细胞时,先用预冷的PBS洗2遍,加入细胞裂解液,4℃裂解20-30min,在冰上用预冷的细胞刮刀将细胞刮下移至1.

01);p-p38在第1天时表达降低,CARP在第7天表达降低(P<0.01)。结论MI后早期p38和CARP即被激活,并促进随后心肌重塑的发展,抑制p38可以抑制CARP,改善心肌重塑。
目的:研究白细胞介素1β(IL-1β)对A549细胞分泌趋化因子白细胞介素8(IL-8)的诱导作用、相关的细胞内信号通道的激活和传导机理。方法:使用IL-1β刺激A549细胞后,Western

blot检测细胞内磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2),磷酸化p38(p-p38)和磷酸化JNK(p-JNK)蛋白的表达水平;逆转录-聚合酶反应(RT-PCR)检测IL-8 mRNA的表达;ELISA检测IL-8的蛋白水平。结果:IL-1β刺激后细胞内p-ERK1/2、p-p38和p-JNK的蛋白表达明显增加;A549细胞IL-8 mRNA表达明显升高;IL-8的蛋白表达水平明显高于未干预组。MEK1/2激酶抑制物U0126完全阻断了细胞内p-ERK1/2蛋白表达的升高,显著减低了IL-1β诱导的IL-8 mRNA和蛋白表达的增高;p38激酶抑制物SB203580部分阻断了细胞内p-p38表达的增高,对IL-8 mRNA无明显的影响但减低了IL-8蛋白表达的增高。c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路抑制物SP600125不表现对p-JNK抑制作用,没有影响IL-8mRNA和蛋白的表达。结论:IL-1β通过激活ERK1/2,p38信号通道,介导了A549细胞分泌IL-8。
探讨紫杉醇在人乳腺癌细胞株MCF-7中诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2表达及与其诱导的相关途径.用不同浓度的紫杉醇刺激MCF-7细胞,MCF-7细胞生长受抑制.通过荧光实时定量PCR检测,发现紫杉醇刺激MCF-7细胞后硫氧还蛋白结合蛋白-2mRNA的表达升高.经荧光素酶活性检测,得出紫杉醇诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2基因启动子活性的增高.p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂,SB203580抑制了紫杉醇诱导的硫氧还蛋白结合蛋白-2mRNA的表达.因此,紫杉醇抑制MCF-7细胞生长,并通过p38丝裂原激活蛋白激酶途径诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2表达.
目的:探讨人源乳酸杆菌对Hpylori诱导SGC7901细胞分泌IL-8及p38MAPK磷酸化水平的影响.方法:实验分为空白对照组、Hpylori刺激组、SB203580干预Hpylori刺激组和Lac15干预Hpylori刺激组.采用免疫细胞化学法观察该人源乳酸杆菌Lac15对Hpylori致SGC7901细胞p38MAPK磷酸化的影响.ELISA法观察该人源乳酸杆菌对Hpylori致SGC7901细胞分泌IL-8的影响.结果:Hpylori能诱导细胞的p38MAPK磷酸化水平增高(IA:1.90±0.36vs14.01±1.12,P<0.05或0.01),与Hpylori刺激组比较,具有统计学意义.结论:p38MAPK磷酸化参与Hpylori诱导的SGC7901细胞分泌IL-8,人源乳酸杆菌Lac15可能通过抑制p38MAPK磷酸化途径抑制IL-8的分泌,从而抑制炎症反应.
AIM:To

或者 STI571研究购买 investigate the molecular mechanism and functional consequences of heme oxygenase-1(HO-1) activation by lansoprazole in endothelial cells and macrophages. METHODS:Expression of HO-1 mRNA was analyzed by Northern blotting.Western blotting was used to determine the HO-1 and ferritin protein levels. NADPH-dependent reactive oxygen species(ROS) formation was measured with lucigenin-enhanced chemiluminescence.HO-1 promoter activity in mouse fibroblasts,stably transfected with

a 15-kb HO-1 gene that drives expression of the reporter gene luciferase, was assessed using in vivo bioluminescence imaging. RESULTS:Lansoprazole increased HO-1 mRNA levels in endothelial cells and HO-1 protein levelsin macrophages.In addition,lansoprazole-induced ferritin protein levels in both cell systems.Moreover, induction of the antioxidant proteins HO-1 and ferritin by lansoprazole was followed by a decrease in NADPH- mediated ROS formation.The radical scavenging properties BMN 673临床试验 of lansoprazole were diminished in the presence of the HO inhibitor,chromium mesoporphyrin IX.Induction of HO-1 gene expression by lansoprazole was not related to oxidative stress or to the activation of the mitogen-activated protein kinase pathway. However,the phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor LY294002 showed a concentration-dependent inhibition of HO-1 mRNA and promoter activity. CONCLUSION:Activation of HO-1 and ferritin may account for the gastric protection of lansoprazole and is dependent on a pathway blocked by LY294002.

05)；对照组、T2DM组和T2DM并CHD组三组间BMI差异无统计学意义(P>0.05)；T2DM、T2DM并CHD组WHR显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01或P0.05)； 2、各组间临床生化指标方面：MAP(mmHg)三组间差异无统计学意义(P>0.05)；对照组、T2DM组和T2DM并CHD组三组FINS、TC、LDL-C、脂蛋白(a)差异无统计学意义(P>0.05);

更多 T2DM组、T2DM并CHD组FPG、HOMA-IR、 HbAlc、TG、VLDL-C显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01或P0.05); T2DM组、T2DM并CHD组HDL-C低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且T2DM组与T2DM并CHD组组间差异也有统计学意义(P<0.05);T2DM并CHD组Hs-CRP显著高于T2DM组及对照组,差异有统计学意义(P<0.01)；T2DM组、T2DM并CHD组Leptin和IMT显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),同时T2DM组与T2DM并CHD组组间差异也有统计学意义(P
术后认知功能障碍(POCD)是术后常见并发症之一,尤其多见于老年人。确切发生机制尚不明确,近年来研究集中于手术、麻醉等引起的炎症反应机制在POCD中的作用。本文就其进行综述,并加以分析。 POCD指麻醉或者手术后病人认知功能的持续性下降,人群中常用的评估工具有简易智能状态检查量表(MMSE)、韦氏成人记忆量表(WMS)、明尼苏达多项人格调查表(MMPI)等。尚缺乏一个权威化检测工具和明确定义。常用的动物实验方法有跳台法、水迷宫、穿梭箱等空间记忆测试方法及味觉厌恶实验、痛觉厌恶实验等感知觉记忆测验.常以长时记忆的形成为标准,尤其是以LTP的形成为测量依据。 POCD的炎症反应机制包括以下几方面：1.炎症细胞。星形胶质细胞阻碍神经再生、释放炎症因子等；活化状态的小胶质细胞释放神经毒性物质,损伤神经元,并以慢性持续活化形成长期作用；中枢神经系统炎症反应会易化外周炎性细胞的浸润,如淋巴细胞、单核细胞,各自以其方式影响认知功能。2.炎症因子。IL-1β可促进神经毒性物质释放,并通过ROS、MAPK等途径造成海马LTP形成受损；TNF-a可促进谷氨酰胺兴奋性神经毒性损伤、易化外周炎症因子浸润、扩大神经系统级联炎症反应等；IL-6可抑制LTP、抑制海马神经元发生并造成其形态变化。各炎症因子的作用在体外动物实验中已得到证实。并且炎症因子联合作用共同损伤神经元。

老年人中枢神经系统炎症因子、炎症细胞本身处于一个较高水平,在应激情况下易发生炎症反应,进而损伤认知功能。 丙泊酚、米诺环素、乌司他丁等药物可以干预中枢神经系统炎症反应,降低循环中炎症因子水平,改善术后认知功能,降低POCD发生率。丙泊酚对认知功能的改善多数是以与吸入麻醉七氟醚比较得出结论。米诺环素、乌司他丁的作用尚需要进一步的动物实验及临床验证 最后,以该综述内容及相关文献为背景,收集数例临床病例,对其中的典型病例发病因素、处理等加以分析。
目的：观察不同氧浓度对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)水通道蛋白-5(AQP-5)的影响,并对其可能机制进行初步探讨。 此网站 方法：原代培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞随机分为五组(n=6)：A空白对照组；B LPS组;C LPS+40%O2组；D LPS+60%O2组;ELPS+90%O2组24h后ELISA检测各组细胞TNF-α含量,PT-PCR及Western Blot检测各组细胞AQP-5、p38MAPK mRNA及蛋白表达水平。 结果：1.ELISA结果显示,与A组相比B、C、D、E组TNF-α含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)；与B组相比C、D、E组TNF-α含量逐渐升高,差异有统计学意义(P
目的 本实验拟建立大鼠腹部不同深度切口模型,观察脊髓背角p-p38MAPK的表达变化,为更合理的研究围手术期应激反应的病理生理过程及疼痛机制提供新模型和思路。

方法 SD大鼠36只,随机分为6组(n=6)：(1)麻醉对照组(A组)：仅麻醉；(2)测压对照组(B组)：仅麻醉和监测；(3)模型组：切口长度均为2cm,根据切割深度不同分为4个亚组,①皮肤组(S组)：仅切割皮肤;②肌肉组(M组)：切割皮肤+肌肉;③腹膜组(P组)：切割皮肤+肌肉+腹膜;④探查组(G组)：切割皮肤+肌肉+腹膜+内脏探查。丙泊酚静脉麻醉下,建立大鼠腹正中切口模型。监测术中生命体征,测量热刺激缩足反射潜伏期(PWTL).观察体重、进食等变化。 另取大鼠32只,随机分为麻醉对照组(C组)和探查组(G2组),根据取标本时间不同,各组分为术后6h,1d,3d,7d四个亚组(n=4),免疫组织化学方法检测大鼠T8-T12节段脊髓背角p-p38MAPK表达的变化。 很少 结果 1.成功建立丙泊酚静脉麻醉下腹部不同深度切口模型。 2.模型组大鼠在切皮、切割完毕／探查完毕后1mmin、缝皮、术毕lmin,·MAP、 PR、 RR均高于基础值(PP>M>S。 3.术中大鼠未出现低血压、缺血缺氧等表现。术后所有大鼠均存活。 4.与A组、B组比较,术后第1d、2d模型组均有不同程度体重和进食下降,差异有显著性(P0.05)。与同时间点A组比较,探查组在术后6h与其有统计学差异(P<0.01)。探查组组内各时间点相比,差异有统计学意义(P
目的：本实验通过体外原代培样的方法建立SD大鼠关节软骨的有限细胞系,在此基础上采用脂联素诱导软骨细胞,观察NOS活性及NO、MMP-3浓度以及NO对MMP-3的影响,探讨脂联素在关节软骨病变发生、发展中的作用。 方法：1.选用SD大鼠的膝关节软骨作为细胞培养的组织来源,建立关节软骨细胞有限细胞系,选用第二代关节软骨为被干预细胞。2.实验1的实验组为0.25μg/ml脂联素组、0.5μg/ml脂联素组和0.75μg/ml脂联素组；对照组为同剂量DMEM培养基,其他条件同实验组。各组干预软骨细胞后,分别在24、48、72小时用硝酸还原酶法测定NO浓度、ELISA法测定NOS及MMP-3浓度。3.实验2的对照组为0.75μg/ml脂联素组；实验A组为0.75μg/ml脂联素联合氨基胍；实验B组为0.75μg/ml脂联素联合地塞米松。各组干预细胞后分别在24、48、72小时用硝酸还原酶法测定NO浓度、ELISA法测定NOS及MMP-3浓度。 结果：1.在实验1中,0.25μg/ml脂联素组的软骨细胞24h、48h、72h分泌的NO浓度与较对照组均显著升高(5.96+1.34vs2.00±0.69P<0.05；8.94±3.20vs2.67±0.37P<0.05；10.98±1.15vs2.78±0.95P<0.05),NOS表达水平也均显著升高(6.90±0.64vs2.43±0.15P<0.05；8.61+0.52vs2.61±0.33P<0.05；11.17±0.76vs3.19±0.31P<0.05；100.6±8.7vs111.5±12.1P<0.05；97.0±3.2vs111.5±12.

82±0.01和0.7±0.01,均高于non-pretreated组(0.52±0.01),差异均有统计学意义(P<0.01)。激光共聚焦显微镜检测线粒体内Cl-浓度显示,DIDS组和DIDS+SB203580组的Cl-浓度均低于non-pretreated组,差异有统计学意义(P<0.01),但均低于DIDS+SB203580组(P<0.01)。流式细胞术检测细胞凋亡率显示,LB处理后DIDS组、DIDS+SB203580组、SB203580组和non-pretreated组分别为23.4±1.58%、12.73±0.96%、24.53±0.93%和38.17±0.22%。Hoechst33258染色法检测显示,经LB处理后DIDS组、DIDS+SB203580组、SB203580组和Non-pretreated组的凋亡率分别为22.88±1.13%、12.45±0.74%、24.68±0.85%和37.8±0.99%。提示经LB处理后DIDS组.DIDS+SB203580组和SB203580组的凋亡率均低于non-pretreated组(P<0.01),DIDS+SB203580组的凋亡率低于SB203580组(P<0.01)。而鞘内注射LB组大鼠脊髓组织ROS水平均较未注射组水平显著升高(均有P<0.01)。而鞘内注射LB组大鼠脊髓背角浅层神经组织caspase-3阳性细胞数均较未注射组显著升高(均有P<0.01)。而鞘内注射LB组大鼠脊髓背角浅层caspase-9阳性细胞数均较未注射组显著升高(均有P<0.05)。而鞘内注射LB组大鼠脊髓p-p38MAPK蛋白表达水平均较未注射组显著升高(均有P<0.01)。而鞘内注射LB组大鼠脊髓背角浅层TUNEL阳性细胞数均较未注射组显著升高(均有P
第一部分双任务干预对携带LRRK2基因突变的帕金森病患者手灵活性的影响

一般 背景及目的：观察执行单任务和双任务时LRRK2-PD病人手灵活性变化及双任务干预情况。 方法：受试者总数为122例,帕金森病(PD)患者均来自“国家863”数据库,PD患者又按是否携带LRRK2基因突变分为两个亚组：LRRK2(+)PD(LRRK2基因突变携带PD患者)与非LRRK2(一)PD(非LRRK2基因突变携带PD患者)；由北京社区老年人数据库调取与PD患者年龄、性别匹配的健康人群作为对照,对照组按是否携带LRRK2基因突变分为两个亚组：LRRK2(+)对照组(LRRK2基因突变携带的健康受试者)和LRRK2(一)对照组(非LRRK2基因突变携带的健康受试者)。第一任务为普渡钉板测试,第二任务是连续减7,然后分别进行单任务、双任务测试,分别记录优势手、非优势手和双手30秒内插入的钉子数、正确的反应数。

这个 结果：LRRK2(+)PD组受试者UPDRSⅢ评分明显高于LRRK2(一)PD组受试者(P<0.05)。执行单一的钉板任务、双任务时,LRRK2(+)PD与非LRRK2(一)PD在30秒内放入的钉子数均较对照组都有显著下降(P<0.05)。LRRK2(+)PD正确反应数的变化大于LRRK2(-)PD,各项指标NVD、NVND、NVB有显著差异(P<0.05)。LRRK2(+)PD与LRRK2(一)PD患者在30秒内正确反应数的差异与UPDRSⅢ评分显著相关(p<0.05)；与对照组比较,受累手与非受累手钉板数变化无显著差异(P)0.05)。受累手执行双任务时,30秒内正确的反应数较对照组都有下降,差别有显著统计学意义(P<0.05)；不论受累手、非受累手执行双任务时,30秒内正确的反应率较对照组都有显著下降(P
为了揭示高效抗氧化剂MT(Metallothionein)对热应激泌乳牛淋巴细胞凋亡/坏死的调节机理,本论文首先以中国荷斯坦奶公犊脾淋巴细胞为体外培养对象,采用1h,43℃或正常培养,诱导细胞发生不同程度的凋亡和坏死,同时采用不同终浓度的MT处理,结合流式细胞术和western-blot支术,研究抗氧化剂MT和对细胞凋亡/坏死的影响及其相关信号通路的调节机理,初步了解抗氧化剂MT对热应激细胞的凋亡/坏死的影响及部分与凋亡信号通路相关的活性因子的调节机理；后以20头正处于热应激的中国荷斯坦泌乳牛为试验研究对象,依据不同MT剂量分成：A(0mg/头)、B(4mg/头)、C(8mg/头)和D(16mg/头)4组,静脉注射后采取时间递减法采血(第1次采血为注射MT之前),应用流式细胞术、western-blot和实时定量PCR技术,进行MT对奶牛热应激所致血淋巴细胞凋亡/坏死的影响及调节机理的研究,为生理活性物质和细胞凋亡的理论研究及其在生产优质安全奶产品中的应用提供科学依据和探索新的途径。主要研究结果如下：

购买2-Methoxyestradiol 1MT为5.25～8.25μg/mL时,对正常细胞凋亡有轻微上调作用；低浓度MT(2.25μg/mL)小幅度上调细胞坏死率；MT可提高细胞线粒体膜电位,其中热应激细胞所需MT浓度高(8.25μg/mL),而正常细胞需MT浓度宜适中(3.75～6.75μg/mL),其它浓度则不能充分保护细胞；热应激导致细胞的核转录因子活性亚基p50的磷酸化蛋白表达上调,但抑制活性亚基p65的磷酸化蛋白表达,对非热应激的原代脾淋巴细胞,MT可提高核转录因子亚基p65的活性,p65是细胞中发挥效用的亚基,因此热氧化应激导致NF-κB的活性下降,热应激信号不能很快转入细胞核内；MT具有上调phospho-P53的表达及其活性,调节热应激损伤所致细胞的凋亡,达到其保护作用：MT使用浓度为2.25μ.g/mL,因上调Phosphs-c-jun的表达量而提高AP-1的生成量,而热氧化应激时细胞Phospho-c-jun表达量低而抑制AP-1的生成量。因此,热处理提高牛脾淋巴细胞线粒体膜电位,但同时也导致细胞坏死率增加,而添加MT不仅提高细胞线粒体膜电压,还对热应激导致细胞坏死具有较好的抑制作用,MT保护细胞比热处理更具有现实的意义,同时也初步证明线粒体通路是MT调节细胞凋亡/坏死的信号转导通路之一 2注射MT后,在51～60d时,校正标准产奶量B、C和D组均显著性高于A组(P<0.05)；细胞的坏死率A组50d时较1d时显著下调(P<0.05)；60d时,细胞内NO含量较注射MT之前,极显著(P<0.01)增加,同时显著大于注射35d时(P<0.

Specific immunotherapies, such as vaccines(whole cell recombinant, peptide, and dendritic cell vaccines), adoptive cell therapy and immunotherapy targeting tumor stem cells, have the role of activating antitumor immune responses. In the future, treatments will likely include personalized medicine, tailored for numerous molecular therapeutic targets of multiple pathogenetic ALK抑制剂 pathways.
目的探讨环巴胺靶向抑制Shh信号对乳腺癌细胞增殖、凋亡以及Survivin表达的影响。方法采用荧光定量PCR法检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中Shh、PTCH1及GLi1的表达,MTT法检测不同浓度环巴胺对人乳腺癌细胞MCF-7增殖抑制的影响,流式细胞术检测环巴胺对MCF-7细胞凋亡的影响,Western blot检测环巴胺处理前后MCF-7细胞GLi1和Survivin的表达。结果 Shh、PTCH1及GLi1在乳腺癌组织中均呈高表达;不同浓度环巴胺均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡;环巴胺处理后GLi1和Survivin的表达均降低。结论 Shh信号在乳腺癌组织中呈激活状态,靶向抑制Shh信号可抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,其可能通过抑制Survivin表达发挥作用。
胰腺癌干细胞在胰腺癌的发生发展过程中起着很关键的作用。最近不断有报道证实针对肿瘤干细胞的治疗可以明显减弱肿瘤干细胞的信号传导。因此胰腺癌干细胞靶向治疗药物可以明显改善胰腺癌患者的预后。现对胰腺癌干细胞靶向治疗的进展作一综述。
肿瘤干细胞是肿瘤组织内具有自我更新能力及无限增殖潜能的一群细胞,对外源细胞毒性药物耐受。卵巢癌肿瘤干细胞在卵巢癌发生、化疗耐药和复发过程中起重要作用。传统治疗对减小肿瘤体积有效,但是治疗后残留的卵巢癌干细胞成为卵巢癌复发和难治的根源,针对卵巢癌肿瘤干细胞的靶向治疗可能在抗卵巢癌治疗中具有重要作用,为临床彻底治愈卵巢癌带来希望。
小细胞肺癌的药物治疗仍面临很大的挑战。局限期小细胞肺癌的标准治疗方案为基于铂类药物的化疗方案联合胸部放疗和预防性全脑放疗。对广泛期小细胞肺癌,化疗仍然是主要的治疗方法,必要时还可进行局部放疗。随着新型化疗药物、分子靶向药物和免疫调节剂的不断涌现,小细胞肺癌药物治疗有了更多的实际选择,但治疗结果迄今并未获得实质性的进步,有待今后进一步的深入研究。
Introduction:Few

data have been published comparing early-phase trials for lung cancer between China and the United States(US).This study was to investigate the differences of phase 1 trials for lung cancer between these two countries.Methods:In 2014,a cross-sectional C59 wnt制造商 survey was conducted to compare phase 1 trials for lung cancer between the Guangdong Lung Cancer Institute(GLCI),the University of Wisconsin Carbone Cancer Center(UWCCC),and the University of Texas MD Anderson Cancer Center(MDACC).Results:We found that the GLCI had a lower percentage of phase 1 lung cancer trials than the MDACC in December2014(23.8%[5/21]vs.59.8%[28/47],P

= 0.006) and the UWCCC in September 2014(16.7%[3/18]vs.34.8%[8/23],P = 0.345).Descriptive analyses were performed for early-phase trials conducted by the CancerTherapy Evaluation Program at the National Cancer Institute(CTEP/NCI),the MDACC,and the Chinese Thoracic Oncology Group(CTONG).There were 149 ongoing early-phase U0126 trials in the Department of Investigational Cancer Therapeutics(Phase 1 program) at the MDACC in October 2014.In contrast,no phase 1 trials had been initiated by the CTONG since its establishment in 2007.Conclusions:These data suggest that a significantly higher percentage of phase 1 trials for lung cancer were conducted in the US than in China.Early-phase oncology trials with robust preclinical data had a higher chance of being approved by the Investigational Drug Branch at the CTEP/NCI.Given the importance of early-phase oncology trials in developing innovative cancer medicines,such studies should be highly encouraged and strategically funded in China.

01);FCM显示联合组凋亡率增高,阻滞于G1期的细胞增多,S期明显减少(P0.05);LY294002组p-AKT水平降低,p-ERK水平增高;AZD6244组p-ERK水平降低,p-AKT水平增高;联合组p-AKT、p-ERK水平均降低,cyclin D1表达较其余各组低,激活型caspase-3较其余各组高。结论

PI3K抑制剂LY294002联合MEK抑制剂AZD6244通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期进展协同抑制SKOV3/DDP细胞生长。
PI3K/AKT/mTOR通路的异常活化在结直肠癌的发生发展中起到重要作用,以此通路为靶点的药物已成为结直肠癌治疗的研究热点,临床前和临床试验研究证明,针对PI3K/AKT/mTOR通路的多种抑制剂具有抗肿瘤活性。越来越多的临床数据显示,PTEN缺乏或PIK3CA基因突变对PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂敏感,KRAS突变则预示着耐药;寻找针对这一通路抑制剂敏感的优势人群也成为结直肠癌的研究热点;此外,PI3K/AKT/mTOR通路也会影响常规治疗的疗效,因此PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂联合细胞毒治疗方案在结直肠癌中可能起到协同作用。
Administration 因为 of monoclonal antibodies(mAbs)against epidermal growth factor receptor(EGFR)such as cetuximab and panitumumab in combination with conventional chemotherapy

substantially prolongs survival of patients with metastatic colorectal cancer(mCRC).However,the efficacy of these mAbs is limited due to genetic KU63794 variation among patients,in particular K-ras mutations.The discovery of K-ras mutation as a predictor of non-responsiveness to EGFR mAb therapy has caused a major change in the treatment of mCRC.Drugs that inhibit transformation caused by oncogenic alterations of Ras and its downstream components such as BRAF,MEK and AKT seem to be promising cancer therapeutics as single agents or when given with EGFR inhibitors.Although multiple therapeutic strategies to overcome EGFR mAb-resistance are under investigation,our understanding of their mode of action is limited.Rational drug development

based on stringent preclinical data,biomarker validation,and proper selection of patients is of paramount importance in the treatment of mCRC.In this review,we will 此网站 discuss diverse approaches to overcome the problem of resistance to existing anti-EGFR therapies and potential future directions for cancer therapies related to the mutational status of genes associated with EGFRRas-ERK and PI3K signalings.
为筛选到活性更好的抗肿瘤PI3K抑制剂,以2,4-二羟基吡啶为原料,经氯化后和吗啡啉反应、碘代、Sonogashira偶联、脱保护基与叠氮化反应得到三氮唑中间体8~13,最后经Suzuki反应,偶联上芳基得到2-芳基-4-吗啉-6-三氮唑基嘧啶14~27,其结构均经1HNMR和LC-MS确证。用MTT法评价了化合物14~27对PI3K高表达的人卵巢细胞A2780增殖的抑制活性,其中,在化合物测试浓度为10μmol/L时,14和25的抑制活性均高于正在临床实验的阳性对照药物GDC-0941和BEZ-235,抑制率分别达到76.7%与77.2%。这两个化合物在小鼠体内代谢良好,其中化合物25更为优异t1/2为3.