5h后再给予100nmol/L FⅦa刺激12h后细胞ProM-MP-7蛋白水平。(2)观察用100nmol/L FⅦa刺激时丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)各亚通路信号蛋白(包括细胞外信号调节激酶ERK1/2,丝裂原激活蛋白激酶P38及c-Jun-N末端蛋白激酶JNK)磷酸化水平变化。(3)在FⅦa刺激前0.5h分别加入ERK1/2,P38和JNK信号通路特异阻断剂PD98059,SB203580和SP600125,培养12h后检测细胞ProMMP-7蛋白的变化。结果:(1)FⅦa可刺激LoVo系细胞表达ProMMP-7并呈时间依赖性和剂量依赖性,在刺激的12h左右ProMMP-7达峰值,是正常对照组的5.5±0.6倍(P=0.006);用TF抗体预处理的LoVo细胞系,其FⅦa上调ProMMP-7表达的作用被完全阻断。(2)用100nmol/L

FⅦa刺激LoVo细胞5min时,MAPKs磷酸化活性蛋白p-ERK1/2和p-P38表达水平开始增加,至10min时达峰值(分别为对照组的2.2±0.3倍和3.9±0.5倍,P值分别为0.02和0.01),存在时间效应关系,而p-JNK活性无改变(为对照组的1.1±0.1倍)。(3)ERK1/2通路阻断剂PD98059及P38通路阻断剂SB203580可部分减少FⅦa上调LoVo细胞系表达ProMMP-7的效应,分别降低了32%±5%(P=0.01)和61%±10%(P=0.009),JNK通路特异性阻断剂SP600125对ProMMP-7的表达无明显影响。结论:FⅦa通过与LoVo细胞表面的TF结合诱导ProMMP-7的表达,并呈时间依赖性和剂量依赖性;ERK1/2和P38MAPKs亚通路参与LoVo细胞TF信号转导通路并与TF/FⅦa调控ProMMP-7表达有关。
目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂MS-275诱导人肝癌细胞株HepG2细胞周期阻滞作用,并对其信号传导机制进行初步探讨。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2;应用MTT比色法观察MS-275对HepG2的生长抑制作用,应用流式细胞仪检测MS-275对细胞周期的影响;Western印迹分析细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p-p38MAPK三种蛋白表达的差异。结果HDAC抑制剂MS-275能抑制肝癌细胞生长,具有时间和剂量的依赖性。可以引起细胞周期G0-G1期阻滞。MS-275可以使HepG2细胞p21蛋白表达提高,CyclinD1蛋白表达降低,在SB203580组两蛋白的表达又恢复到对照组水平。p-p38MAPK蛋白在两组表达均提高。结论MS-275能诱导肝癌细胞株的细胞周期阻滞,这种作用可能是通过p38MAPK信号传导途径介导的,与下调CyclinD1的表达、上调p21的表达有关。
目的:探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号传导对低氧预处理(HPC)的细胞保护作用以及HPC后血红素氧化酶-1(HO-1)mRNA表达的影响。方法:选用新生Wistar大鼠心脏进行成纤维细胞培养,给予HPC及低氧/复氧处理(HR)。药物处理组在HPC和HR处理过程中向培养液中加入SB203580。测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度和细胞HO-1

Selleck AUY 922 Saracatinib mRNA表达量。结果:低氧/复氧后,HPC/SB组LDH浓度显著高于HPC/NSB组(P<0.01,P
Aim:To

investigate the mechanism of silibinin-protected isoproterenol-inducedapoptosis 无 in rat cardiac myocytes.Methods:The viability of rat cardiac myocyteswas measured by MTT method.The apoptotic ratio was measured by terminaldeoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling.Protein kinase C(PKC) activity assay was carried out according to the instructions of the PepTagnon-radioactive protein kinase C assay kit.Western blot analysis was used toevaluate the level of Ras,Raf-1 and mitogen-activated protein kinase (MAPK)expression.Results:The protective effects of silibinin were significantly sup-pressed by inhibitors,including genistein,manumycin A and GW5074 [inhibitorsfor protein tyrosine kinases (PTK),Ras and Raf-1,respectively].The exposure ofrat cardiac myocytes to isoproterenol alone caused decreased PKC activity,whichwas prevented by pretreatment with silibinin dose-dependently.Simultaneously,the increased expression of Ras and Raf-1 activated by silibinin were blocked bythe PKC inhibitor,stauroporine.

收集山东大学齐鲁医院普外科手术切除肝门部胆管癌及癌旁石蜡组织,并制成石蜡组织切片,经免疫组织化学染色检测肝门部胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中的E-cadherin蛋白表达水平,并统计分析其与对应标本中FBXW7表达之间的相关性。8.应用FBXW7稳定低表达和高表达的细胞及其对照组细胞建立裸鼠转移瘤模型,观察肿瘤转移情况；通过HE染色检测肺脏及肝脏组织中转移灶数量,经体内实验验证FBXW7能否抑制胆管癌细胞转移。9.经免疫组织化学染色方法检测各组裸鼠肺脏及肝脏转移灶中FBXW7及E-cadherin表达情况,经体内实验验证FBXW7在胆管癌EMT中的调控作用。[结果]1.成功构建pBabe-shFBXW7.1及pBabe-shFBXW7.2质粒,并稳定转染HuCCTl细胞和RBE细胞(分别命名为HuCCT1-Vector、HuCCT1-shFBXW7.1、 HuCCT1-shFBXW7.2; RBE-Vector、RBE-shFBXW7.1、RBE-shFBXW7.2)。经qRT-PCR和Western

blot险测证实FBXW7低表达稳定转染细胞系构建成功。2.成功构建pBabe-FBXW7质粒,并稳定转染QBC939细胞和FRH0201细胞(分别命名为QBC939-Vector、QBC939-FBXW7; FRH0201-Vector、FRH0201-FBXW7)。经qRT-PCR和Western blot检测证实FBXW7高表达稳定转染细胞系构建成功。3.普通光学显微镜观察显示FBXW7能够抑制胆管癌细胞由上皮细胞形态向间质细胞形态转化。Western blot证实FBXW7能够促进上皮细胞标志分子E-cadherin和α-catenin的表达,同时抑制间质细胞标志分子Fibronectin和Vimentin的表达。4. Western blot证实FBXW7能够抑制干细胞特性标志分子Nanog和OCT4的表达；Primary sphere formation及Secondary BMS-907351订单 sphere formation实验证实FBXW7能够抑制胆管癌干细胞自我更新能力。5.经划痕实验、 Transwell小室迁移实验及Matrigel侵袭实验证实FBXW7能够抑制胆管癌细胞体外迁移和侵袭能力。6.统计学分析提示在肝内胆管癌中E-cadherin表达与肿瘤转移呈明显负相关,且其表达量与FBXW7呈正相关。7.统计学分析提示在肝门部胆管癌中E-cadherin表达与肿瘤转移呈明显负相关,且其表达量与FBXW7呈正相关。8.体内实验证实FBXW7可抑制胆管癌细胞转移能力。9.体内实验证实FBXW7可抑制胆管癌EMT。[结论]1.体内外实验证实FBXW7可抑制胆管癌EMT。2.体外实验证实FBXW7可抑制胆管癌细胞干细胞特性。3.体内外实验证实FBXW7能够抑制胆管癌细胞的迁移和侵袭能力。第三部分FBXW7抑制胆管癌上皮-间质转化、干细胞特性及转移的分子机制研究[目的]上述研究经体内外实验已经证实FBXW7能够通过抑制胆管癌EMT及干细胞特性进而抑制其转移。本部分将对FBXW7抑制胆管癌EMT的具体分子机制进行进一步探索。[方法]1.检测FBXW7高表达和低表达的细胞中mTOR及p-mTOR表达量,结合前期文献报道,明确FBXW7在胆管癌细胞中是否能够泛素化降解mTOR。2.应用mTOR特异性抑制剂rapamycin处理FBXW7低表达的细胞,经Western

Z VAD FMK blot检测EMT标志分子(E-cadherin、Vimentin)表达变化：经Primary

sphere formation及Secondary sphere formation实验检测胆管癌干细胞自我更新能力改变；经划痕实验、Transwell小室迁移实验检测细胞迁移能力变化,细胞侵袭能力变化经Matrigel侵袭实验检测验证。3.应用]mTOR特异性抑制剂rapamycin处理FBXW7低表达的细胞,经qRT-PCR及Western blot检测EMT转录调控因子(Snail、Slug及ZEB1) mRNA水平及蛋白水平改变,进一步分析FBXW7调控胆管癌EMT的分子机制。4.筛选最有意义的EMT转录调控因子,首先检测其在胆管癌细胞中的表达情况；应用胆管癌细胞及FBXW7低表达的胆管癌细胞,shRNA干扰技术沉默所筛选EMT转录调控因子,经Western selleck公司

selleck公司

selleck公司 blot检测EMT标志分子(E-cadherin、Vimentin)表达变化；同时经划痕实验、Transwell小室迁移实验检测细胞迁移能力变化,细胞侵袭能力变化经Matrigel侵袭实验检测验证。5.收集山东大学齐鲁医院普外科手术切除肝内胆管癌及癌旁石蜡组织,并制成石蜡组织切片,经免疫组织化学染色检测肝内胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中所筛选EMT转录调控因子蛋白表达水平,并统计分析其与对应标本中E-cadherin及FBXW7表达之间的相关性。6.收集山东大学齐鲁医院普外科手术切除肝门部胆管癌及癌旁石蜡组织,并制成石蜡组织切片,经免疫组织化学染色检测肝门部胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中的所筛选EMT转录调控因子蛋白表达水平,并统计分析其与对应标本中E-cadherin及FBXW7表达之间的相关性。7.对FBXW7稳定低表达细胞建立的裸鼠转移瘤模型腹腔注射rapamycin,观察肿瘤转移情况；HE染色检测肺脏及肝脏组织中转移灶数量,并与未用药组比较,经体内实验验证mTOR能否介导FBXW7调控胆管癌转移。8.对FBXW7稳定低表达细胞建立的裸鼠转移瘤模型腹腔注射rapamycin,免疫组织化学染色检测肝脏及肺脏转移灶中FBXW7及E-cadherin表达水平,并与未用药组比较,经体内实验验证mTOR能否介导FBXW7调控胆管癌EMT。[结果]1.经Western blot检测证实胆管癌细胞中FBXW7表达量与mTOR及p-mTOR呈负相关,结合前期报道,证实FBXW7在胆管癌细胞中可泛素化降解mTOR。2.经Western blot检测证实rapamycin可逆转FBXW7沉默引起的上皮细胞标志分子(E-cadherin)表达降低及间质细胞标志分子(Vimentin)表达升高；经Primary sphere formation及Secondary sphere formation实验证实rapamycin能够逆转FBXW7沉默引起的胆管癌干细胞自我更新能力增强；经划痕实验、Transwell小室迁移实验及Matrigel侵袭实验证实rapamycin能够逆转FBXW7沉默引起的胆管癌细胞体外迁移和侵袭能力增强。3.经qRT-PCR及Western blot检测证实rapamycin能够逆转FBXW7沉默引起的EMT转录调控因子Snail、Slug及ZEB1的表达增强。4.

CHIR99021和白血病抑制因子(leukaemia inhibitory factor,LIF)共同作用可以维持小鼠J1 ES细胞的细胞形态,并且上调小鼠J1 ES细胞标志基因的表达。终浓度为3μM的CHIR99021处理小鼠J1 ES细胞,并用等体积的DMSO处理的ES细胞作为对照。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)染色结果表明,CHIR99021处理的小鼠J1

ES细胞表现出更高水平的碱性磷酸酶活性。免疫荧光染色(immunofluorescent Staining)结果表明CHIR99021可以上调Nanog的表达。免疫荧光染色和蛋白免疫印迹(immunoblotting)结果显示,CHIR99021处理的细胞,β-catenin表达显著增强,双荧光素酶报告分析系统(dual-luciferase 因为 reporter assay system)结果表明CHIR99021处理后小鼠ES细胞中的Wnt通路活性增强。3.对CHIR99021处理后的小鼠J1 ES细胞进行表达谱芯片分析,寻找差异表达基因,进一步揭示CHIR99021维持ES细胞干性的机制。芯片数据证明,CHIR99021能够显著上调干性相关基因的表达,同时也能下调分化相关转录因子的表达。利用DAVID(Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery)在线软件对筛选出的差异表达基因进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析,发现CHIR99021不仅能通过Wnt/β-catenin通路,同时也能通过其它通路如TGF-β和BMP等来促进小鼠J1 ES细胞的自我更新和多能性维持。4.CHIR99021通过抑制Nodal通路和促进Bmp4表达来增强BMP通路。定量PCR分析CHIR99021和SB431542(简称SB)处理及对照细胞中的Nodal,Smad7,BMP4及下游调控基因Lefty1,Lefty2和Ids的表达变化。结果表明,Nodal通路相关的基因表达下调,而BMP通路相关的基因表达上调。蛋白免疫印迹检测CHIR99021和SB431542处理及对照细胞中的Smad2和Smad1/5的磷酸化水平,结果与定量PCR结果一致。Dorsomorphin(Dorso)是BMP信号的小分子抑制剂,可阻断BMP介导的Smad1/5的磷酸化作用。CHIR99021和Dorso相关的实验结果表明,CHIR99021处理后细胞形态的维持需要BMP信号的活化。5.CHIR99021影响小鼠J1

ES细胞的表观遗传修饰。CHIR99021能够通过调控表观遗传相关基因,如Dnmt3l,Dnmt3a,Dnmt3b,Hdac9,Smarcal1和Cbx7的表达,改变ES细胞的表观遗传修饰。芯片和定量PCR结果表明,CHIR99021能下调Dnmt3l,Dnmt3a,Dnmt3b,Hdac9和Smarcal1的表达并上调Cbx7的表达。与转染NC-FAM的细胞相比,β-catenin敲降细胞中Dnmt3l的表达显著上调。据此推测,Dnmt3l可能是β-catenin的一个下游靶标。其他表观遗传调控基因可能不是β-catenin的下游靶标,但是可以被CHIR99021调节。综上所述,本研究表明小分子化合物CHIR99021可以通过调控蛋白编码基因的表达来促进小鼠J1

selleck抑制剂 ES细胞的自我更新和多能性维持,进一步揭示了CHIR99021促进小鼠ES细胞的自我更新的机制,并且为CHIR99021诱导多能性干细胞(iPS)重编程方面的研究提供了理论基础。
目的:本项目在前期研究工作的基础上,进一步探讨DADS下调TGF-β1介导的Wnt/β-catenin通路,抑制人胃癌MGC803细胞EMT及其分子机理,为寻找DADS抑制胃癌细胞迁移侵袭的作用靶点奠定理论基础。方法:人胃癌MGC803细胞分别分为未处理组、DADS处理组、外源性TGF-β1处理组、TGF-β1+TGF-β1抑制剂SB431542处理组、TGF-β1+DADS处理组、TGF-β1+Rac-1抑制剂NSC23766处理组,RT-PCR与Western 此网站 blot分别检测各组细胞TGF-β1、β-catenin、Rac-1、E-cadherin、Vimentin的表达。裸鼠成瘤实验观察各组移植瘤生长,免疫组织化学检测瘤体组织中Ki-67、CD34、E-cadherin、Vimentin的表达变化。结果:RT-PCR与Western blot显示,DADS可呈时间依赖性下调MGC803细胞TGF-β1、Rac-1、β-catenin、Vimentin m RNA及蛋白的表达和可呈时间依赖性上调E-cadherin m RNA及蛋白表达,以48h效果最佳(P<0.05)。裸鼠移植瘤实验显示,与未处理组相比,DADS处理组移植瘤生长速度与体积明显降低(P<0.05),TGF-β1处理组移植瘤生长速度与体积明显增加(P<0.05),加入DADS、SB431542、NSC23766可抑制TGF-β1对移植瘤生长速度与体积的促进作用(P<0.05)。免疫组化检查发现,与未处理组比较,DADS处理组瘤体的Ki-67、CD34、Vimentin蛋白阳性明显减少,E-cadherin蛋白阳性明显增多;相反,TGF-β1处理组的Ki-67、CD34、Vimentin蛋白阳性表达明显增强,而E-cadherin蛋白的阳性表达明显减弱。TGF-β1+SB431542、TGF-β1+DADS、TGF-β1+NSC23766较TGF-β1处理组Ki-67、CD34、Vimentin蛋白阳性明显降低及E-cadherin蛋白明显增加。结论:1.TGF-β1可促进MGC803细胞EMT与移植瘤生长;2.DADS可下调TGF-β1抑制MGC803细胞EMT与移植瘤生长;3.

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猪链球菌血清2型(Streptococcus suis serotype2)是一种重要的人畜共患病病原体，猪链球菌感染具有较高的病死和病残率，其最主要的临床症状是脑膜炎，与其它细菌性脑膜炎相似，我们认为猪链球菌致脑膜炎的过程也是多步骤的，其中最关键的步骤是猪链球菌如何穿过血脑屏障(blood-brain barrier，BBB)进入中枢神经系统。 BBB是重要的结构和功能屏障，在维护中枢神经系统（CNS）免受血液中的有害物质和微生物的侵入方面起重要作用，其主要由脑微血管内皮细胞（BMEC）、星形胶质细胞和周细胞组成，而脑微血管内皮细胞是其最主要的组成部分。因此，猪链球菌与脑微血管内皮细胞相互作用的研究对揭示猪链球菌穿过BBB的作用机制，进而研究猪链球菌致脑膜炎的机制均有重要意义。 我们课题组在前期工作中，利用人脑微血管内皮细胞（hCMEC/D3），这一国内外公认的模拟BBB较好的细胞系，建立了人BBB体外模型，并确认了猪链球菌以细胞旁的途径穿过BBB。本研究旨在利用建立的人BBB体外模型，筛选可能影响猪链球菌穿BBB能力的毒力因子，并研究分析其作用机制。本研究筛选了本课题组前期发现的多个可能毒力基因如SSU05_1000，SSU05_MRP，SSU05_1815及SSU05_1664等在猪链球菌穿血脑屏障过程中的作用。实验结果表明，敲除SSU05_1000，SSU05_MRP基因后，猪链球菌穿BBB能力显著下降，而敲除其它毒力基因对猪链球菌穿BBB能力无显著影响。因此，我们推测SSU05_1000，SSU05_MRP很可能在猪链球菌穿BBB过程中发挥重要作用。

很少 SSU05_1000是本课题组新发现的细胞壁蛋白，具有较强的免疫原性。本课题组前期动物实验结果表明：SSU05_1000有助于猪链球菌抵抗免疫细胞的杀伤，从而实现血中存活，有助于细菌进入脑部。但是，具体的作用机制并不清楚，且目前尚未有对该蛋白的研究报道。 为了研究SSU05_1000在猪链球菌穿BBB过程中作用机制，本研究对该基因进行了重组表达和纯化。首先，构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒，并将其转入表达菌株大肠杆菌BL21（DE3）中。IPTG诱导后，SDS-PAGE电泳显示该蛋白为在细菌裂解液上清中，为可溶性表达，然后利用镍亲和层析法对该蛋白进行纯化，得到纯度90%以上的重组SSU05_1000蛋白，并用TritonX-114去除污染的脂多糖（LPS）。

为了验证SSU05_1000基因在猪链球菌穿血脑屏障过程中的作用，将获得的重组蛋白预处理hCMEC/D3细胞，然后评价05ZYH33△1000的穿过能力。结果表明：SSU05_1000蛋白可以使05ZYH33△1000穿膜能力恢复到05ZYH33野生株水平。为了分析猪链球菌穿血脑屏障过程中激活的信号通路，本研究筛选了多种信号通路的抑制剂。研究结果表明：p38MAPK和JNK通路抑制剂预处理hCMEC/D3细胞后，能显著降低猪链球菌穿血脑屏障能力。提示：猪链球菌在穿血脑屏障过程中可能需要激活MAPK信号通路。在此基础上，本研究进一步研究了SSU05_1000蛋白与MAPK信号通路激活之间的关系。Western blot检测结果显示SSU05_1000可以激活p38，JNK信号通路。 综上所述，本研究结果提示SSU05_1000通过激活p38, JNK信号通路从而破坏BBB的完整性，打开细胞间隙，有助于猪链球菌穿过BBB。
软骨内成骨及膜内成骨过程是骨骼形成的两种主要方式。软骨内成骨过程包括软骨雏形形成和骨形成，首先聚集的骨髓间充质细胞分化为软骨细胞，然后开始软骨内成骨过程为软骨细胞增殖、分化和凋亡，凋亡的肥大软骨细胞随新生的血管一同进入成骨细胞，最终以矿化的软骨基质区为中心开始成骨过程。软骨生长板是长骨纵向生长的重要场所，调控长骨的纵向生长速度[1]。

还有 软骨内成骨过程被很多生长因子所介导的信号通路所调控，其中包括FGFs(Fibroblast Growth Factors，成纤维细胞生长因子)。FGFs要与其特异性的受体FGFR1-4(Fibroblast Growth Factor Receptor，成纤维细胞生长因子受体)结合才能发挥功能。既往研究发现FGFRs突变影响骨发育，对骨细胞的增殖、分化，骨的形成起到关键作用[2-4]。 AS (Apert Syndrome，Apert综合征)是一种人类颅缝早闭综合征，以冠状缝早闭，颅面畸形和手足的并指/趾畸形为典型体征[5-6]。AS90%是由两种FGFR2功能获得性突变，即FGFR2Ser252Trp或者Pro253Arg突变引起，其中67%是FGFR2Ser252Trp[7]。这两种突变都是影响FGFR2免疫球蛋白样结构域II和III之间高度保守区域，使FGFR2可能获得对配体结合范围的扩大，从而使靶细胞的FGFR2信号持续增强[8]。 Cohen，Kreiborg发现AS患者除了骨发育反常外，颅底软骨发育及干骺端软骨等软骨发育也出现发育障碍[6]。不仅如此，在之前建立的FGFR2突变小鼠模型中，也发现软骨内成骨发育异常，导致小鼠身材弱小，四肢及脊柱骨骼发育迟缓及颅底发育不良[9-11]。FGFR2主要其可激活下游MAPK[12-14]和PKC通路[14-15]，调控间充质干细胞增殖，影响直接成骨和软骨内成骨过程[11,16]。 我们利用条件打靶技术构建Fgfr2+/S252W模式动物，模拟Apert综合征。我们发现突变小鼠不仅表现出颅缝早闭，还有骨发育迟缓，体形弱小。这与FGFR2受体功能增强对成骨，软骨细胞影响有关。为了证实FGFR2在早期骨发育中的作用，我们利用同窝出生野生型及突变Fgfr2+/S252W小鼠进行比较，在出生后早期对骨发育进行形态、组织学观察及分子水平进行研究并比较两者BMSCs(Bone selleck chemical Mesenchymal Stem Cells，骨髓间充质干细胞)在软骨内成骨过程中的增殖、分化差异。我们并发现在FGFR2突变引起小鼠骨骼发育异常，可能是由p38及Erk1/2信号通路介导的。 实验结果： 1. FGFR2功能获得性突变使小鼠呈现出类似人类Apert综合征的典型骨骼表型，包括颅骨早闭，圆头畸形，身材矮小，有望成为研究Apert综合征的良好动物模型之一。 2. Fgfr2+/S252W小鼠软骨内成骨发育迟缓，骨量减少导致长骨纵向生长障碍。 3.组织学观察发现FGFR2持续增强导致干骺端生长板增殖、肥大软骨层缩短，抑制生长板细胞增殖，并且表达成软骨、成骨标志蛋白下降。 4. Fgfr2+/S252W突变小鼠骨髓基质细胞体外培养诱导实验提示，FGFR2功能持续增强抑制细胞增殖以及软骨细胞早、中期分化，但增强软骨细胞终末期成骨分化能力，最终抑制细胞矿化能力。 5.

研究对象：胎盘组织。选取2008年7月至2010年7月在郑州大学第二附属医院妇产科住院分娩的孕产妇共95例,分妊娠期高血压疾病组和正常对照组,如下： (1)正常对照组：随机选择同期在郑州大学第二附属医院妇产科住院分娩的正常孕妇20例。 一般 (2)妊娠期高血压疾病组(HDCP):75例,又可分为三组,其中妊娠期高血压20例、轻度子痫前期25例、重度子痫前期30例。 研究对象筛选标准：即往健康,均为单胎妊娠,无其他妊娠合并症(如妊娠期糖尿病、慢性内外科合并症等)及并发症(如胎膜早破、宫内感染、前置胎盘、胎儿生长受限等),均以剖宫产终止妊娠。诊断标准及分类标准参照乐杰主编人民卫生出版社出版《妇产科学》第7版。

2.研究方法： (1)所有标本均采用HE染色及免疫组化染色,采用图像分析方法检测各组胎盘中IISP70、P38MAPK、Caspase3的表达及定量。 (2)实验结果处理运用SPSS17.0统计软件系统分析,以P0.05)。 3.胎盘组织中HSP70的表达：与正常妊娠对照组相比,妊娠期高血压疾病组中HSP70的表达明显升高(P<0.05),并随着疾病的严重程度呈上升的趋势；其中,轻度子痫前期胎盘中HSP70表达明显高于妊娠期高血压组,P<0.05；重度子痫前期高于轻度子痫前期组,P<0.05),并随着疾病的严重程度呈上升的趋势；其中,轻度子痫前期胎盘中P38MAPK的表达高于妊娠期高血压组,P<0.05；重度子痫前期高于轻度子痫前期组,P<0.05),并随着疾病的严重程度呈上升的趋势；其中,轻度子痫前期胎盘中Caspase3的表达高于妊娠期高血压组,P<0.05；重度子痫前期组高于轻度子痫前期组,P
背景 妊娠期糖代谢异常是指妊娠期内首次发生或发现的糖代谢紊乱,主要包括妊娠期糖耐量受损(GIGT)和妊娠期糖尿病(GDM)。无论GIGT还是GDM都对母婴危害极大。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)系统是细胞内重要信号转导系统,参与细胞的生长、分化、凋亡等生理病理过程。P38MAPK是其重要成员,多种应激物质均可引起P38MAPK的表达变化,产生多种生物学效应,对机体带来不利影响。国内外大量研究发现,P38MAPK在2型糖尿病心脏、肾脏的氧化应激损伤、细胞凋亡中具有促进作用,但在妊娠期糖代谢异常疾病中研究甚少。

目的 本实验通过建立妊娠期糖代谢异常大鼠模型,初步探讨P38MAPK在妊娠期糖代谢异常大鼠心脏、肾脏组织中的表达变化及与细胞凋亡的关系。 材料与方法 选取雌性SD大鼠40只,雄性10只,体重190-220g,将雌性大鼠分为高糖高脂饮食-孕鼠组(sucrose and fat diet pregnant rat, SFP)和未孕组(sucrose 可能 and fat diet virgin rat, SFV),普通饮食-孕鼠组(normal diet pregnant rat, NP)和未孕组(normal diet virgin rat, NV),相应组受孕。四组大鼠于受孕组妊娠第18天行口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test, OGTT),妊娠第20天麻醉后心内取血,检测空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)等指标,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。心脏取血后,脱臼法处死大鼠,取心脏、肾脏组织,一份行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心、肾组织中P38MAPKmRNA的表达水平,一份做石蜡切片用于细胞凋亡原位检测(TUNEL检测法),计算凋亡指数；同时取胰腺组织行苏木精-伊红(HE)染色,光镜下观察组织病理变化。经SPSS10.0统计学分析软件进行数据分析,比较四组之间空腹血糖,空腹胰岛素,总胆固醇,甘油三酯,胰岛素抵抗指数,心脏、肾脏组织中P38MAPK的表达水平、细胞凋亡等变化,分析四组之间P38MAPK的表达水平有无差异及与细胞凋亡的相关性。 AZD4547供应商 结果 (1)SFP组的空腹血糖、血脂、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数与其他3组相比(NP组,NV组,SFV组)明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。口服葡萄糖耐量试验提示SFP组的血糖在0min,30min,60min,120min增高,与其他三组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)；在SFV组和NP组,P38MAPKmRNA的表达水平与NV组相比也有所升高,差异有统计学意义(P0.05)。

(3) TUNEL原位凋亡检测结果显示：在心脏,肾脏组织中,凋亡指数从SFP组,SFV组到NP组均依次降低(2.27±0.13,1.46±0.13,1.44±0.14,P<0.05；2.34±0.12,1.44±0.13,1.41±0.15,P<0.05),在NV组几乎无凋亡细胞存在。SFP组凋亡指数与SFV组,NP组之间相比,差异具有统计学意义(P0.05)。 (4)单因素相关分析显示,在心脏、肾脏组织中,SFP组、SFV组、NP组,P38MAPKmRNA的表达量与细胞凋亡指数均呈正相关,相关指数r依次降低(0.925,0.615,0.531；0.946,0.642,0.547)。 结论 1.高糖高脂饮食喂养的妊娠期大鼠,存在与人类妊娠期糖代谢异常的类似改变,可作为研究妊娠期糖代谢异常疾病的模型使用。 2.正常大鼠经高糖高脂饮食喂养,心、肾组织中P38MAPK表达水平升高,出现细胞凋亡,二者呈正相关,提示糖脂毒性、氧化应激引起的P38MAPK和细胞凋亡可能共同参与了大鼠心、肾损伤。 3.妊娠期大鼠经正常饮食喂养,存在生理性胰岛素抵抗；心、肾组织中P38MAPK表达水平升高,出现细胞凋亡,二者呈正相关,提示生理性胰岛素抵抗、P38MAPK和细胞凋亡可能参与了妊娠大鼠心、肾的细胞损伤。 4.

Two new α-aminophosphonate derivatives containing thieno[2,3-d]pyrimidine, diethyl(((6-ethyl-2-methyl-4-oxothieno[2,3-d]pyrimidin-3(4H)-yl)amino)(4-methoxyphenyl)methyl)phosphonate(1) 很少 and diethyl((4-bromophenyl)((6-ethyl-2-methyl-4-oxothieno[2,3-d]pyrimidin-3(4H)-yl)amino)methyl)phosphonate(2), have been synthesized by a facial phosphorylated reaction, and their structures were characterized by NMR, IR, HRMS and X-ray single-crystal diffraction. Compound 1(C21H28N3O5PS, Mr = 465.49) belongs

to the orthorhombic system, space group P212121, with a = 10.83653(16), b = 12.04906(19), c = 18.0061(3) , V = 2351.06(6) 3, Z = 4, Dc = 1.315 g/cm3, μ = 2.177 mm-1, F(000) = 984.0, the final R = 0.0389 and w R = 0.0985 for all data. Compound 2(C20H25Br N3O4 PS, Mr = 514.37) belongs to the orthorhombic system, space group P212121, with a = 10.9187(5), b = 11.9522(4), c = 17.7667(7) , V = 2318.60(16) 3, Z = 4, Dc = 1.474 g/cm3, μ = 4.175 mm-1, F(000) = 1056.0, the final R = 0.0367 and w R = 0.0946 for all data.
【目的】确定PI3K抑制剂XC302连续口服给药的剂量限制性毒性(DLT)和最大耐受剂量(MTD),评估其耐受性并初步观察XC302治疗晚期实体肿瘤患者的疗效。【方法】常规治疗失败的晚期实体肿瘤患者分别进入4个组别接受XC302每天1次或每天2次口服治疗,起始剂量为50 mg/d,按”3+3″模式进行剂量递增或根据前一阶段试验结果调整。根据NCI-CTCAE 3.0版毒性评定标准评估不良反应。按RECIST 1.0版标准进疗效评估。【结果】共入组30例晚期肿瘤患者。XC302连续给药常见的不良反应包括白细胞减少(23.3%)、血红蛋白下降(30%)、恶心(20%)、谷丙转氨酶(ALT)升高(63.3%)及谷草转氨酶升高(AST)(50%)、碱性磷酸酶升高(ALP)(23.3%)和谷氨酰转肽酶升高(GGT)(26.7%)。DLT为可逆的3度ALT和AST升高。MTD为100

http://www.selleckchem.cn/products/Lapatinib-Ditosylate.html mg每天一次(空腹)及75

mg qd(餐后)。23例患者进行了疗效评价,12例(52.5%)达到稳定(SD)。有1例软组织肉瘤患者无进展生存期(PFS)长达64周。【结论】PI3K抑制剂XC302连续口服给药总体耐受性良好且治疗晚期实体肿瘤有较高的疾病控制率,值得进一步研究。
目的研究EGFR、Kras、BRAF在食管鳞癌(ESCC)组织中表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测116例ESCC组织和20例癌旁正常组织EGFR、Kras、BRAF的表达,分析其与ESCC临床病理特征的关系。结果 哪里 116例患者的ESCC组织中EGFR、Kras、BRAF均有表达,阳性率分别为70.7%、49.1%和31.0%,高于癌旁正常组织。EGFR、BRAF在两者中表达差异有统计学意义(P<0.05);EGFR表达与分化、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),BRAF表达与浸润深度及分期有关(P0.05)。EGFR与BRAF表达呈正相关,与Kras无关。结论 EGFR、BRAF过表达可能与ESCC的发生发展有关,Kras作用尚不明确。EGFR、BRAF可作为预测ESCC预后的重要指标。
目的:探究不同剂量柚皮素(naringenin)对人下咽癌FADU细胞的作用及其相关机制。方法:以不同剂量(0、100、200、400、800μg/m L)柚皮素对FADU细胞进行处理,倒置显微镜观察细胞形态学变化;cck-8法检测药物作用后不同时间(24、48、72 h)FADU细胞增殖的变化;流式细胞仪检测柚皮素作用48 h细胞凋亡的变化;采用Transwell趋化小室体外侵袭实验测定48 h后细胞的侵袭能力的变化;蛋白免疫印迹法检测48 h后细胞内PI3K/AKT信号通路凋亡相关蛋白表达的影响。结果:cck-8法检测发现柚皮素抑制FADU细胞增殖作用明显,呈浓度和时间依赖性;流式细胞结果发现200,400,800μg/m L柚皮素作用48 h后,FADU细胞的凋亡率显著增高,差异有统计学意义(P
目前,晚期三阴性乳腺癌(triple negative breast carcinoma,TNBC)的药物治疗已取得了一些进展,相应的临床研究即有阳性的结果,也有阴性的结果,都为我们的临床实践带来帮助。其中,靶向治疗尚没有突破,化疗方案的优化方兴未艾,免疫治疗则初现端倪。作者就晚期TNBC的药物治疗进展进行了综述。
目的改进pictilisib的合成工艺。方法以3-氨基-2-噻吩甲酸甲酯为起始原料,经环合、氯代、取代、甲酰化,制得2-氯-4-(吗啉-4-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛,再经还原、氯代、缩合制得关键中间体2-氯-6-[(4-甲磺酰哌嗪-1-基)甲基]-4-(吗啉-4-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶,该中间体与2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼环戊烷-2-基)-2H-吲唑经Suzuki偶联、脱保护成盐、碱化得到目标化合物。结果与结论目标化合物结构经1H-NMR、13C-NMR、IR及MS谱确证,总收率为34.

It also discusses

the data supporting current standard clinical outcomes, and offers conclusions that may improve the management of Venetoclax体外 pancreatic cancer in the future.
Multiple roles of glycogen synthase kinase-3(GSK-3)in neural tissues:GSK-3 is a serine/threonine kinase that has two isoforms encoded by two different genes,GSK-3αand GSK-3β,in mammals.GSK-3 has several sites of serine and tyrosine phosphorylation.Its activity is negatively regulated by phosphorylation of serine 21 for
目的研究淫羊藿苷(ICA)对阿尔茨海默病(AD)细胞模型糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)表达的影响及机制。方法以Aβ25~35孵育PC12细胞制备的AD细胞模型为研究对象,分为对照组、β-淀粉样蛋白(Aβ)组、ICA组、PI3K/Akt信号通路的经典抑制剂(LY)组、ICA+LY组,Western印迹法检测各组的蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的表达。结果与对照组相比,Aβ组的p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显下降(P<0.01)。与Aβ组相比,ICA组的p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显增高(P<0.01)。与ICA组相比,ICA+LY组p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显下降(P
放射治疗是原发或转移脑肿瘤的有效治疗手段,但存在神经系统毒性,可导致认知功能障碍,特别是学习能力及记忆力下降。临床发现放射治疗引起的海马组织结构、功能变化与记忆力下降有关~[1],下降程度与海马组织所受放射剂量的多少有关~[2]。越来越多的学者希望通过研究放射治疗后海马组织形态结构、基因表达、信号通路改变与海马组织相关的学习能力、记忆力等认知功能障碍的关系,以阐明放射性认知功能障碍的机制。本文就放射治疗损伤海马组织导致认知功能
该文研究GDF-5联合淫羊藿素(ICT)诱导BMSCs成软骨分化,并探讨Wnt信号通路在其中的作用。采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,取P3代细胞分成6组:BMSCs组,ICT组,GDF-5组,GDF-5+ICT组,GDF-5+ICT+SB216763组,GDF-5+ICT+XAV-939组,连续诱导培养14

d。倒置相差显微镜观察细胞形态学改变;Alcian Blue染色检测蛋白聚糖变化;RT-PCR检测aggrecan,Col2,Sox9,Dvl1,Gsk3β,β-catenin mRNA表达水平;Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白和β-catenin蛋白表达水平。结果提示,与BMSCs组相比,GDF-5组,GDF-5+ICT组,GDF-5+ICT+SB216763组蛋白聚糖Alcian blue染色均明显较深;成软骨分化标记基因aggrecan,Col2,Sox9 mRNA表达水平及Ⅱ型胶原蛋白表达水平,Wnt信号通路相关基因β-catenin EX 527浓度 mRNA及蛋白表达均逐渐增加,Gsk3βmRNA表达量逐渐减少。相反,相对于GDF-5+ICT组,添加XAV-939组则表现为成软骨分化及Wnt信号通路相关基因Dvl1,β-catenin表达下调,Gsk3βmRNA表达增加,Ⅱ型胶原蛋白及β-catenin蛋白表达水平均下降,上述差异均有统计学意义。GDF-5联合淫羊藿素能够诱导大鼠BMSCs成软骨分化,其中ICT起促进作用。ICT可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进大鼠BMSCs体外成软骨分化。
目的探讨健脾解毒方对大肠癌细胞转移能力的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8检测不同浓度健脾解毒方醇提物对Lo selleck Vo细胞生长的抑制作用。分别采用健脾解毒方、过表达环氧合酶-2(COX-2)基因和(或)糖原合成激酶-3β(GSK-3β)选择性抑制剂SB-216763作用Lo Vo细胞24h,Transwell检测细胞转移能力;Western blottting检测细胞中COX-2和β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白表达;ELISA检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-7(MMP-7)表达。结果健脾解毒方能够以剂量和时间依赖性方式抑制Lo

Vo细胞的生长。与空白对照组比较,健脾解毒方能够明显抑制Lo Vo细胞的转移能力(P
目的:探讨GSK-3β在钙黏蛋白17(CDH17)介导的胃癌细胞侵袭中的作用及机制。方法:分别用CDH17 si RNA转染或GSK-3β抑制剂SB216763处理胃癌MKN-45细胞,以无处理和转染空载体的MKN-45细胞为空白对照及阴性对照,检测各组细胞GSK-3β、β-cantenin、NF-κB(p50/p65)的表达以及侵袭力变化。结果:与空白对照细胞比较,CDH17 si RNA转染后的MKN-45细胞CDH17、磷酸化GSK-3β、β-cantenin与p50/p65蛋白表达均明显降低,侵袭细胞数明显减少(均P0.05),磷酸化GSK-3β与p50/p65表达明显降低,侵袭细胞数明显减少(均P0.05)。结论:在CDH17介导的胃癌细胞侵袭信号通路中,GSK-3β可能处于β-cantenin下游,通过其磷酸化水平而调节NF-κB活性的关键分子。
目的探讨糖原合成激酶-3(GSK-3)在脂多糖(LPS)诱导肝硬化患者外周血单核细胞(PBMCs)炎症反应中的作用。方法将不同分期的肝硬化患者PBMCs分为对照组、LPS组、SB216763组、SB216763+LPS组,收集细胞培养上清液,采用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)与白细胞介素10(IL-10)的表达水平。结果所有研究对象中,LPS组TNF-α和IL-10含量明显高于对照组(P<0.01),SB216763+LPS组TNF-α和IL-10的含量较LPS组明显降低(P<0.01)。肝硬化失代偿期并腹膜炎患者、LPS组的TNF-α含量显著高于肝硬化代偿期患者(P<0.

大量研究表明,除刺激胰岛素分泌外,GLP-1可通过促进胰岛β细胞增殖,抑制β细胞凋亡,从而增加胰岛β细胞量.本文就其相关分子信号转导机制进行综述.
目的:探讨电针”内关”穴对心肌肥厚模型大鼠一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响。方法:SD大鼠50只随机数字表法分为正常组、模型组、电针组、p38抑制剂组、电针+p38抑制剂组,采用皮下注射盐酸异丙肾上腺素3

mg/(kg.d)建立心肌肥厚大鼠模型,电针组采用连续波,频率2 Hz,强度1 mA,通电20 min,1次/d,p38抑制剂组在造模基础上0.3 mg/(kg.d)SB203580皮下注射,共14 d,电针+p38抑制剂组在造模基础上同时应用抑制剂和电针,大鼠于第15 d测量左心室壁平均厚度、心肌细胞平均直径、心肌纤维横径,硝酸还原酶法测定血清和心肌组织NO含量,并对数据进行统计分析。结果:模型组大鼠左心室壁平均厚度、心肌细胞平均直径、心肌纤维横径于造模后升高,心肌组织和血清NO含量造模后降低,和正常组比较,有非常显著性差异(P<0.01);经电针和抑制剂治疗后大鼠左心室壁平均厚度、心肌细胞平均直径、心肌纤维横径均明显低于模型组,NO均明显高于模型组,和模型组比较有显著性差异(P<0.05,P0.05)。结论:电针"内关"可以明显抑制心肌肥厚,其抗心肌肥厚作用可能是通过升高NO来实现的。
心脏重构是一种常见的病理生理状态,包括心肌肥厚及间质纤维化,是各种心血管疾病发展为慢性心功能不全、心力衰竭的重要环节,由多种体内外刺激因素通过启动细胞内共同信号转导通路而促发/激活。有研究表明,p38丝裂原蛋白活化激酶(MAPK)激活参与心脏重构并在其中起着重要作用,用特异性抑制剂阻断该信号通路可明显减轻心脏重构。该文就p38MAPK对心脏重构重要环节影响的研究进展予以综述。
目的探讨地塞米松对海水淹溺性肺水肿的保护作用及其分子机制。方法采用气管内滴注海水的方法复制海水淹溺性肺损伤的大鼠模型,测定肺水肿的指标及肺组织中claudin-4、核转录因子-κB(NF-κB)、p38蛋白水平的表达;培养A549细胞,分别应用NF-κB抑制剂、p38抑制剂、糖皮质激素受体(GR)阻断剂(RU486)研究地塞米松改善海水淹溺性肺水肿的分子机制。结果吸入海水后肺水肿形成,海水可活化NF-κB及p38,同时下调claudin-4,地塞米松可缓解上述改变;应用PDC抑制NF-κB活化,并采用SB203580抑制p38活化可缓解海水诱导的claudin-4下调和单层细胞通透性的增高,应用RU486阻断GR后,地塞米松上调claudin-4的作用则大大降低。结论地塞米松可抑制海水诱导的NF-κB活化,缓解NF-κB活化介导的claudin-4表达下调及肺通透性增高,从而减轻海水淹溺性肺水肿。
缺血/再灌注损伤(IRI)是体外循环心内直视手术常见的并发症,甚至是导致死亡的主要原因,其确切机制目前尚未明了,胰岛素抵抗可能是其发生机制之一,而心肌胰岛素抵抗的产生与葡萄糖转运蛋白4的表达降低和转位异常有密切关系。p38MAPK作为分裂原激活的蛋白激酶家族的一员,在许多生物效应中发挥着重要的作用,与缺血/再灌注损伤、胰岛素抵抗、葡萄糖转运等有着密切关系,p38MAPK可能参与缺血/再灌注损伤心肌胰岛素抵抗的过程。
目的:探索Fas通路在结肠癌细胞中诱导上皮间质转化(epithelial-mesenchymal

哪里 CAL-101研究购买 transition,EMT)的分子机制。方法:分别对结肠癌细胞SW480及DLD1予以低剂量FasL(12.5 ng/mL)处理。作用3d后分别提取实验组和对照组细胞的总蛋白、总RNA,并进行Western blot、RT-PCR检测,分析FasL作用下结肠癌细胞的上皮标记物、间质标记物以及EMT相关的转录因子的表达状况。在低剂量FasL作用3d后行免疫荧光检测,观察EMT相关转录因子在细胞内的分布情况。建立稳定敲除Snail及Twist的结肠癌细胞系,再予以低剂量FasL刺激,采用Western

blot、RT-PCR检测是否发生EMT过程。对结肠癌细胞SW480予以低剂量FasL(12.5 ng/mL)处理后,通过Western 那个 blot检测实验组和对照组细胞ERK1/2通路及p38通路的激活状况。对SW480细胞进行信号通路抑制剂的预处理,再予以低剂量FasL刺激,采用Western blot、RT-PCR检测是否发生EMT过程,从而探索Fas通路诱导EMT的可能机制。结果:低剂量FasL可使结肠癌SW480和DLD1细胞的上皮标记物表达下调,间质标记物表达上调,EMT相关转录因子在细胞核周聚集,细胞发生梭形改变,提示发生EMT。而将结肠癌细胞的Snail或Twist基因敲除后,FasL的上述诱导作用明显减弱。低剂量FasL可激活结肠癌细胞的ERK1/2通路激活,而ERK抑制剂可减弱FasL诱导的EMT过程。结论:Fas通路可能通过激活ERK1/2通路诱导结肠癌细胞发生EMT。
20130644蛋白激酶B和丝裂原活化蛋白激酶在烟酸保护的HaCaT细胞抵抗中波紫外线损伤中的作用/林福全(杭州市第三医院皮肤科),许文,关翠萍…∥中华皮肤科杂志.-2012,11(45).-806～810检测烟酸对UVB照射后角质形成细胞株HaCaT细胞死亡及凋亡的影响,观察烟酸单独或者联合UVB
放射性肺纤维化是放疗常见的并发症,是效应细胞受到射线照射后的综合反应,以渗出性炎症起病,最终肺成纤维细胞增生。肺成纤维细胞是肺纤维化的主要效应细胞,经放射线刺激后的成纤维细胞过度增殖,凋亡受阻,细胞周期也随之改变。同时,成纤维细胞分泌的转化生长因子β增加,而活化后的转化生长因子β又进一步刺激肺成纤维细胞,促进其增殖。同时一些细胞因子及蛋白进一步刺激成纤维细胞,导致胶原大量沉积,肺泡塌陷及肺间质纤维化。该文主要介绍近年射线对成肺成纤维细胞影响的研究情况。
目的探讨α硫辛酸对高糖环境下心肌成纤维细胞(CFb)中胶原生成的影响及作用机制。方法将原代培养乳鼠CFb按培养液不同分组:正常糖组(NG,5.5mmol/L葡萄糖);高糖组(高糖,25.

肺泡损伤以炎细胞浸润、肺泡隔增厚、肺泡腔缩小为主，伤后1到3天逐渐加重，5到7天逐渐缓解；细支气管于伤后1到3天出现损伤，以上皮层增厚、空泡样改变为主，细胞脱落不明显；毛细血管于伤后5到7天出现损伤，表现为袖套样结构形成；但整个病理过程无明显的纤维化； 2.损伤后AT1以断裂和表面积下降为主，伤后1到3天损伤逐渐加重，之后逐渐缓解；AT1表面积比例呈现相同的变化规律。正常大鼠AT2细胞密度为2394±150cells/mm2，伤后1天显著下降（907±289cells/mm2，P0.05），之后逐渐增加；vCEs密度伤后1到2天持续下降，2天下降至最低（normal642±67vs2dpi508±382cells/mm2，P>0.05），3天增加至最高峰（741±100cells/mm2），5到7天逐渐减少；但vCEs与AT1无显著的相关性；

4.伤后2、3天是肺组织Ki67mRNA表达的高峰，此时AT2的增殖比例显著升高（正常8.04%±1.77%vs3天23.81%±3.34%，P
目的 Nintedanib 观察糖尿病大鼠创面组织内皮细胞迁移VEGFR-2信号通路的变化，确定其作用环节和效应靶点。 方法 1、按随机数字表法将84只SD大鼠分为糖尿病组(DM组，42只)和非糖尿病对照组（C组，42只）；糖尿病模型稳定8周后建立深Ⅱ度烫伤模型，其中设假烫糖尿病组（0d，n=6）和假烫非糖尿病组（0d，n=6）。 2、观察大鼠体重和50%创面愈合时间，血糖仪检测尾静脉血糖变化，透明胶纸描计计算创面愈合率，于烫伤后0，1，3，7，10，14，21d，每时相点分别处死6只糖尿病组和非糖尿病对照组大鼠，留取创面皮肤组织。 3、蛋白酶K消化法检测皮肤组织糖含量，组织切片HE染色和Masson’s染色，观察皮肤组织形态学变化。 4、ELISA法检测创面组织中VEGF、VEGFR-2、F-Actin、AGEs的水平。 5、Western blot法检测创面组织中phospho-P38MAPK表达；免疫组织化学方法检测创面组织中VEGFR-2（phospho-Tyr1214）、VEGFR-2（phospho-Tyr1175）、VEGFR-2（phospho-Tyr951）、FAK、PI3K的含量及MVD水平。

结果 1、与非糖尿病组相比，糖尿病创面组织局部糖含量明显升高（P 0.05）。 3、与非糖尿病组相比，糖尿病组phospho-Tyr1214及其下游信号蛋白phospho-P38MAPK表达水平显著降低（P 0.05），其下游信号蛋白FAK及PI3K表达水平显著降低（P
目的：晚期糖化终产物(AGEs)通过与特异性受体晚期糖化终产物受体（RAGE）结合，损伤血管内皮细胞、促进白细胞黏附、刺激血管平滑肌细胞增殖、促进炎症因子的表达等而加速动脉粥样硬化的发生。本课题组前期研究发现AGEs通过RAGE，p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK），核因子-κB(NF-κB)途径，促进Jurkat细胞分泌肿瘤坏死因а(TNF-а)、干扰素-γ(IFN-γ)，并引起钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（CaMKIV）表达增加，因此本研究将进一步观察CaMKIV在AGEs诱导Jurkat细胞分泌IFN-γ中的作用，探讨RAGE胞内信号通路中起关键作用的信号分子。

通常 方法：①常规方法制备AGEs。200μg/ml的AGEs作用于植物血球凝集素(PHA)（0.25μg/ml）预刺激48h后的jurkat细胞0、30、60min后，蛋白免疫印迹法（Westernblot）分别检测胞浆及胞核CaMKIV的表达，计算CaMKIV的核浆比值，同时设RAGE抗体（1μg/ml）干预组、非特异性抗体IgG（1μg/ml）及牛血清白蛋白（BSA）（200μg/ml）对照组。②200μg/ml的AGEs作用于CaMKIV抑制剂（KN62）（10μM）预处理的Jurkat细胞24h，ELISA检测IFN-γ表达。③200μg/ml的AGEs作用于KN62（10μM）预处理的Jurkat细胞30min，Western Sorafenib购买 blot检测检测IκB磷酸化表达水平。④200μg/ml的AGEs作用于KN62（10μM）预处理的Jurkat细胞30min，Western blot检测检测p38MAPK磷酸化水平的影响。 结果：①200μg/ml的AGEs作用于PHA预刺激的jurkat细胞30、60min后，Westernblot结果显示CaMKIV的核浆比值增大，提示AGEs能引起CaMKIV发生核转位，与BSA组及PHA对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；RAGE抗体能抑制AGEs诱导的CaMKIV核转位（P<0.01），KN62能抑制AGEs诱导的IFN-γ的表达（P<0.01），KN62能抑制AGEs上调p-IκB（P<0.

1%、21.6%，两组相比差异有显著性（χ2=15.931，P<0.05）；ABCG2蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小及肿瘤数目等均无关（P均﹥0.05）；与血清AFP水平、组织分化及淋巴转移有关（P均
小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）约占肺癌患者总数的15%-20%，与吸烟关系密切，约60%-70%的患者就诊时已处于广泛期，预后很差。内科药物治疗仍然为SCLC的主要的治疗手段。由于其细胞生物学行为复杂，恶性程度高，治疗后容易出现复发及耐药。通过多药联合、优化给药顺序、改变用药方法及调整药物剂量强度等手段并没有获得预期的疗效，且药物治疗的毒副反应较多，SCLC的死亡率依然高居各种肿瘤之首，故寻求安全、有效的治疗方案变得迫切而棘手。近年来，随着SCLC内科治疗药物研究的不断深入，一些研究热点药物如替莫唑胺、Hedgehog信号通路抑制剂、bcl-2抑制剂、ipilimumab、贝伐单抗等已在Ⅱ期或Ⅲ期试验中显示出良好的抗肿瘤活性，为SCLC的药物治疗提供了新的方向。本文就目前针对SCLC的药物治疗进展情况做一综述。
目的：探讨阻断Hedgehog信号通路对转化生长因子-β1（Transforming

点击此处 growth factor-β1，TGF-β1)诱导非小细胞肺癌(Non-smallcell lung cancer, NSCLC)上皮间质转化（Epithelial-MesenchymalTransition, EMT）的影响。 方法： 1采用TGF-β1（1、5和10ng/ml)诱导肺腺癌A549细胞48h，倒置显微镜观察A549细胞株形态学变化，荧光定量PCR检测Gli1mRNA的表达水平，Western blotting检测Gli1、Vimentin和E-cadherin的表达水平，细胞免疫荧光方法检测Gli1蛋白表达量的变化。划痕实验检测A549细胞株迁徙能力的变化。 2采用5ng/ml TGF-β1诱导非小细胞肺癌H460和SK-MES-1细胞48h，荧光定量PCR检测两种细胞中Gli1mRNA的表达水平，Westernblotting检测Gli1、E-cadherin和Vimentin的表达水平，Transwell小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。 3分别采用Cyclopamine和GANT61特异性阻断A549细胞Hedgehog信号通路中的信号转导因子Smoothened(Smo)及Humanglioma-associated

oncogene homolog1（Gli1），24h后，加入终浓度为5ng/ml的TGF-β1诱导48h,荧光定量PCR检测Gli1mRNA的表达水平，Western blotting检测Gli1、Vimentin和E-cadherin的表达水平，细胞免疫荧光方法检测Vimentin和E-cadherin蛋白表达量的变化。Transwell小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。 4以Gli1siRNA转染A549细胞，8h后，加入5ng/ml的TGF-β1诱导48h,荧光定量PCR检测Gli1mRNA的表达水平，Western blotting及细胞免疫荧光方法检测Gli1、Vimentin和E-cadherin的表达水平，Transwell小室侵袭和迁移实验检测侵袭及迁移能力的变化。 5采用GANT61特异性阻断H460和SK-MES-1细胞Gli1，24h后，加入5ng/ml的TGF-β1诱导48h,荧光定量PCR检测Gli1mRNA的表达水平，Western Y-27632核磁共振 blotting检测Gli1、E-cadherin和Vimentin的表达水平，Transwell小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。

结果： 1倒置显微镜下观察经TGF-β1诱导48h后的A549细胞形态发生了明显的改变，Western blotting检测显示随着TGF-β1药物浓度的升高，各组NSCLC细胞中上皮细胞标志物E-cadherin表达明显减弱，而间质细胞标志物Vimentin表达明显上升。细胞划痕实验检测结果显示TGF-β1诱导后A549细胞迁移能力增强，Transwell小室侵袭实验检测结果显示TGF-β1诱导后H460和SK-MES-1细胞株侵袭能力增加。 没有 2荧光定量PCR和Western blotting检测结果均表明在TGF-β1诱导NSCLC发生EMT的过程中皆伴随着Hedgehog信号通路下游效应因子Gli1mRNA及蛋白的高表达，细胞免疫荧光检测也证实了相同的结果。 3通过siRNA和药物Cyclopamine及GANT61特异性阻断NSCLC细胞Smo及Gli124h后，各组分别加入终质量浓度为5ng/mL的TGF-β1进行诱导。荧光定量PCR、Western blotting或细胞免疫荧光检测结果显示siRNA和药物均显著抑制Gli1mRNA及蛋白的表达。Western blotting检测结果显示，siRNA和药物干预后的NSCLC细胞中Vimentin蛋白表达明显减弱，而上皮细胞标记蛋白E-cadherin表达明显增多，细胞免疫荧光检测显示了相同的结果。Transwell小室侵袭和迁移实验结果显示，siRNA和药物干预后的NSCLC细胞株侵袭和迁移的能力明显下降。 结论：特异性阻断Hedgehog信号通路可以抑制TGF-β1诱导NSCLC细胞EMT的产生，提示Hedgehog信号通路在NSCLC细胞EMT的产生中起重要作用。
目的：通过检测Shh、Ptchl、Smo、Glil在胰腺癌组织和癌旁组织中表达的差异,初步探讨Shh、Ptchl、Smo、Glil在胰腺癌中异常表达与肿瘤发生的关系,以期为临床提供实验依据。方法：我们选取50例手术切除的新鲜胰腺癌组织和癌旁组织,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western blot检测胰腺癌组织和癌旁组织中Shh、Ptchl、Smo、Glil mRNA和蛋白的表达情况,并分析其与胰腺癌临床病理参数之间的关系。结果：RT-PCR检测结果显示：Shh、Ptchl、Smo、GlilmRNA在胰腺癌组织中的相对表达量分别是0.309±0.162、0.413±0.115、0.327±0.264、0.341±0.132,在胰腺癌旁组织中为0.184±0.227、0.203±0.143、0.148±0.276、0.105±0.351(P0.