5mg·kg~(-1)·day~(-1)，s．c．)建立PD大鼠模型。IPT(1.5或3.0mg·kg~(-1)·day~(-1))或mitoK-ATP通道开放剂Diazoxide(1.5或3.0mg·kg~(-1)·day~(-1))在Rotenone给药前三天开始灌胃，自第四天起，于每天IPT或Diazoxide灌胃后1h背部皮下注射Rotenone(2.5mg·kg~(-1)·day~(-1))，连续给药4周，统计各组大鼠死亡率并进行行为学检测；免疫组织化学法检测脑黑质区DA能神经元的存活(TH染色)，同时检测黑质部位小胶质细胞的活化(OX-42和ED1染色)；RT-PCR法检测脑纹状体和黑质中TNF-α和COX-2 Dabrafenib半抑制浓度 mRNA水平的变化，ELISA法检测黑质和外周血中TNF-α蛋白水平的变化；应用BrdU标记及免疫组织化学法检测海马神经再生的变化。 结果：1) Rotenone组大鼠死亡率为40％，肌僵直实验中大鼠前爪移动潜伏期显著延长，滚轴实验中大鼠爬行时间显著缩短，提示大鼠出现明显的运动障碍；IPT(1.5或3.0mg·kg~(-1)·day~(-1))和Diazoxide(1.5或3.0mg·kg~(-1)·day~(-1))均可显著降低大鼠死亡率(分别为19％、13％，19％和19％)，显著缓解Roteone引起的肌僵直和运动障碍。2)Rotenone显著诱导大鼠黑质DA能神经元变性死亡(TH阳性细胞数下降至对照组的36.9％)，并伴有小胶质细胞活化的显著增强，TNF-α和COX-2

mRNA表达水平增加及外周血中TNF-α水平的增加；IPT(1.5或3.0mg·kg~(-1)·day~(-1))和Diazoxide(1.5或3.0mg·kg~(-1)·day~(-1))均可显著对抗Rotenone导致的神经毒性，促进DA能神经元存活(TH阳性细胞数恢复至对照组的93％、89.2％、92.9％，和94.2％)，并抑制Rotenone诱导的小胶质细胞活化、TNF-α和COX-2 mRNA表达增加及外周血中TNF-α的增加。3) Rotenone显著抑制大鼠海马DG区BrdU标记的新生细胞数量；IPT(3.0mg·kg~(-1)·day~(-1))和Diazoxide(3.0mg·kg~(-1)·day~(-1))均可逆转Rotenone抑制神经再生的作用，促进新生细胞数量恢复至正常水平。

点击此处 结论：K-ATP通道开放剂能够显著缓解Rotenone诱导的大鼠帕金森样症状，促进黑质DA能神经元存活，其神经保护作用机制与抑制小胶质细胞活化介导的神经炎性反应和促进神经再生相关。 第二部分小胶质细胞表达K-ATP通道的发现及其对小胶质细胞活化的调节 目的：在鉴证原代培养的大鼠小胶质细胞表达K-ATP通道的基础上，研究、阐明K-ATP通道调制Rotenone诱导的小胶质细胞活化的作用及其机制。 方法：应用RT-PCR、Western blotting、免疫双染法检测原代培养的大鼠小胶质细胞上K-ATP通道的表达及其亚基构成；显微镜下观察小胶质细胞活化的形态学变化；免疫荧光细胞化学法检测小胶质细胞活化marker

ED1的表达变化；ELISA法检测细胞培养液中TNF-α的含量；放射免疫测定法(RIA)检测PGE_2的含量；应用荧光探针DCFH-DA检测小胶质细胞内ROS的含量；应用荧光探针JC-1检测小胶质细胞线粒体膜电位；Western blotting检测小胶质细胞内p38和JNK磷酸化水平。 结果：1)原代培养的大鼠小胶质细胞表达K-ATP通道，其亚基组成为不同于神经元的Kir6.1和SUR2.2)10μM IPT或100μM Diazoxide预处理均能显著抑制Rotenone(10nM)诱导的小胶质细胞形态学的改变、ED1表达的上调及TNF-α、PGE_2、ROS的生成增加；并且该作用被mitoK-ATP通道阻断剂5-HD(250μM)取消。3) 10μM IPT或100μM selleck screening library Diazoxide预处理均能逆转Rotenone(10nM)导致的小胶质细胞线粒体膜电位的下降及p38、JNK磷酸化水平的增加；该作用可被5-HD所阻断。 结论：原代培养的大鼠小胶质细胞表达K-ATP通道，其亚基组成为Kir6.1和SUR2；小胶质细胞上mitoK-ATP通道的开放能抑制Rotenone诱导的小胶质细胞活化及致炎因子的生成，其作用机制与稳定线粒体膜电位及抑制p38／JNK MAPK信号通路激活有关。 第三部分K-ATP通道开放剂对成年C57Bl／6J小鼠脑神经再生的调节 目的：研究、阐明K-ATP通道开放剂调节神经再生的作用及其机制。 方法：应用RT-PCR、Western blotting法检测原代培养的成年C5781／6J小鼠神经干细胞上K-ATP通道的表达；[~3H]-脱氧胸腺嘧啶摄取实验检测IPT对原代培养的成年鼠神经干细胞增殖的影响；连续4周给予正常成年C57Bl／6J小鼠IPT(10mg·kg~(-1)·day~(-1)，i．p．)，应用BrdU标记新生细胞，神经元特异性抗体NeuN、星形胶质细胞抗体GFAP与BrdU免疫荧光双染检测新生细胞的分化；western blotting法检测ERK1／2和CREB的磷酸化水平；应用Kir6.2~(-/-)小鼠研究Kir6.2基因敲除对IPT促神经再生作用的影响。 结果：1)原代培养的C57B1／6J成年小鼠神经干细胞表达Kir6.1亚基组成的K-ATP通道，而不表达Kir6.2亚基。2)与对照组相比，IPT(1、10、100μM)均能显著促进原代培养的成年鼠神经干细胞的增殖。3)连续4周给予IPT(10 mg·kg~(-1)·day~(-1))显著增强正常C57B1／6J小鼠海马区神经再生，但不影响神经干细胞向神经元的分化率。4)连续4周给予IPT(10 mg·kg~(-1)·day~(-1))促进正常C57B1／6J小鼠海马区ERK1／2和CREB的磷酸化。5)Kir6.2基因敲除不影响IPT促神经再生的作用。 结论：原代培养的C57B1／6J成年小鼠神经干细胞表达由Kir6.1亚基组成的K-ATP通道，而不表达Kir6.2亚基。K-ATP通道开放剂IPT通过作用于Kir6.

Functional genomics has helped us identify a catalog of genetic and epigenetic alterations that may be exploited as potential therapeutic targets and biomarkers of response. New treatment combinations targeting ER and such oncogenic signaling pathways which block the crosstalk between these pathways have been proven effective in preclinical models. Results of recent clinical studies suggest that subsets of patients benefit from the combination of

inhibitor targeting certain oncogenic signaling pathway with endocrine selleck screening library therapy. Especially, inhibition of the m TOR signaling pathway, a key component implicated in mediating multiple signaling cascades, offers a promising approach to restore sensitivity to endocrine therapy in breast cancer. We systematically reviewed important publications cited in Pub Med, recent abstracts from ASCO annual meetings Alisertib研究购买 and San Antonio Breast Cancer

Symposium, and relevant trials registered at Clinical Trials.gov. We present the molecular mechanisms contributing to endocrine resistance, in particular focusing on the biological rationale for the clinical development of novel targeted agents in endocrine resistant breast cancer. We summarize clinical trials utilizing novel strategies to overcome therapeutic

resistance, highlighting the need to better identify the appropriate patients 有 whose diseases are most likely to benefit from these specific strategies.
By using a combined method of density functional theory(DFT), molecular mechanics(MM2) and statistics for two-dimensional(2D), as well as the comparative molecular field analysis(Co MFA) and comparative molecular similarity index analysis(Co MSIA) methods for three-dimensional(3D), theoretical studies on 2D/3D quantitative structure-activity relationships(QSAR) of 22 novel compounds of [1,2,4]triazolo[1,5-a] pyridinylpyridines acting as PI3 K inhibitors against the human colon carcinoma cell line(HCT-116) have been performed. Both the 2D- and 3D-QSAR models established from the random 18 compounds in training set show significant statistical quality and satisfactory predictive ability(R2 = 0.821, q2 = 0.773 for 2D-QSAR, R2 = 0.966, q2 = 0.668 for Co MFA, R2 = 0.979, q2 = 0.

20±1.387%vs13.02±1.052%、9.50±1.483%)(P0.05)；6.各组PCNA蛋白表达变化基本与其mRNA表达水平相一致。 结论：1.雌激素对真皮成纤维细胞有强促有丝分裂作用,促进细胞增殖,在(10-8、10-9、10-10、10-11、10-12mol/L)浓度范围内,以10-10mol/L浓度组效应最强；2.有强趋化作用,促进细胞迁移,在(10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)浓度范围内,以10-8mol/L浓度组最强；3.而雌激素β受体阻断剂ICI-182780能有效减弱雌激素的上述两种效应；4.雌激素能促进成纤维细胞分泌TGFβ1蛋白；5.雌激素β受体(Estrogen

Recepter β,ERβ)及ERK/MAPK信号通路参与雌激素调控的成纤维细胞增殖过程。 第二部分雌激素延缓大鼠皮肤老化作用机制的实验研究 目的：观察苯甲酸雌二醇对去卵巢大鼠皮肤中相关因素的影响,探讨雌激素抗皮肤老化作用机制。 方法：将40只Wistar雌性大鼠随机分成四组：空白组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)和模型+苯甲酸雌二醇肌注组(D组),每组各10只。通过手术摘除双侧卵巢建立大鼠自然老化模型(C组和D组),A组不做任何处理,B组只摘取双侧卵巢周围少许脂肪组织；术后一周内连续行阴道细胞学涂片,验证造模是否成功；术后一周各组大鼠开始肌注给药(A、B、C三组生理盐水,D组苯甲酸雌二醇)；给药八周后处死动物,取血检测各组大鼠血清中的雌二醇(E2)浓度,并剪取各组大鼠背部相同部位皮肤制成组织匀浆后检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、羟脯氨酸(HYP)含量及丙二醛(MDA)含量。 ABT263 通常 结果：与A组相比,C组血清E2水平(pg/ml)(38.51±3.58vs49.31±3.52)及HYP含量(mg/g湿重)(3.26±0.259vs4.57±0.355)均显著下降(P＜0.01),进一步说明大鼠去卵巢皮肤自然老化模型成功建立；与C组相比,D组血清E2水平(pg/ml)(50.69±3.61vs38.51±3.58)(P0.05),但D组SOD活性显著降低(U/g蛋白)(116.38±7.84vs130.01±6.49)(P
帕金森病(Parkinson’s

disease,PD)是一种常见于中老年人的神经系统退行性疾病,其主要病理特征为黑质(Substantia Nigra,SN)致密部多巴胺(dopamine,DA)能神经元的进行性变性死亡和路易氏小体(Lewy body,LB)的形成,引起黑质纹状体通路中DA水平的降低,最终导致整个基底神经节环路功能的改变。患者大多表现为运动迟缓、肌肉僵直、震颤和步态不稳等。PD发病机制复杂,一般认为可能与氧化应激、线粒体损伤、神经免疫炎症和神经兴奋性毒性有关。 人参皂苷Rg3(ginsenoside

Alisertib核磁共振 Rg3,以下简称Rg3)是中国传统中药人参的有效成分,Rg3能预防和治疗癌症、改善心脏血管功能、抗血小板凝集、保护脑神经细胞和提高机体免疫力。本课题组前期研究表明,Rg3能减轻鱼藤酮纳米脂质载体(R-NLC)诱导的PD模型大鼠行为运动障碍,并能有效抑制黑质DA神经元凋亡。进一步研究发现,这一作用与Rg3减弱氧化应激反应、上调Bcl-2和Bax的比值以及抑制‘caspase通路激活有关。 作为上述工作的继续,本实验采用鱼藤酮诱导PC12细胞损伤模型,用R-NLC制备PD大鼠模型,从体内、体外两条途径,进一步确证人参皂苷Rg3对鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元损伤的保护作用,着重探讨p38MAPK-iNOS-NO通路在其中的作用,以进一步探讨Rg3保护DA能神经元的分子生物学机制。主要结果如下： 1.人参皂苷Rg3对鱼藤酮诱导的PD模型DA能神经元的保护作用 方法：PCl2细胞分组：(1)对照组：0.1%DMSO;(2)模型组：1μM鱼藤酮；(3)1μM鱼藤酮+0.3125μRg3；(4)1μM鱼藤酮+0.625μM Rg3;(5)1μM鱼藤酮+1.25μM Rg3；(6)1μM鱼藤酮+2.5μM Rg3；(7)1μM鱼藤酮+5μM Rg3。Rg3溶液在鱼藤酮前4小时加入,用MTT法测定24h各组细胞OD值,计算细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡率。 动物分组：(1)对照组：sc空白NLC+ig0.5%CMC-Na；(2)模型组：sc R-NLC+ig0.5%CMC-Na；(3)阳性药物组：sc R-NLC+ig司来吉兰(11mg/kg)；(4)Rg3低剂量组：sc R-NLC+igRg3(3mg/kg)；(5)Rg3中剂量组：sc R-NLC+igRg3(6mg/kg)；(6)Rg3高剂量组：sc R-NLC+igRg3(12mg/kg).大鼠皮下注射(sc)R-NLC,首剂量0.5mg/kg,第二次0.8mg/kg,此后每次1mg/kg,全程2天一次,共28天。其它药物提前3天灌胃给药,每天一次,共31天。末次注射给药后24h,分离大鼠黑质和纹状体。以评分法考察大鼠行为学表现、HE染色观察黑质细胞形态,高效液相-电化学法测定纹状体DA含量。 结果：(1)对PC12细胞损伤的影响：模型组OD值为0.340±0.007,细胞存活率为69.5%,0.3125、0.625、1.25、2.5、5μMRg3组OD值分别为0.354±0.011(P<0.05),0.388±0.018(P<0.01),0.423±0.009(P<0.01),0.441±0.007(P<0.01)和0.416±0.007(P<0.01)。1.25,2.5μMRg3预处理后,细胞凋亡率下降为47.9%和28.1%(P<0.

05);加入CCL21作用后,正常对照者和RA患者的淋巴细胞表达p-JNK和p-p38MAPK均比CCL21作用前明显增加,且RA患者与正常对照者相比增加更多;而加入抗CCR7抗体后,p-JNK和p-p38MAPK的表达均明显下降(P
目的:研究匹格列酮对高糖培养下人肾小球系膜细胞P38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路及转化生长因子(TGF-β)的影响,进一步探讨匹格列酮抗糖尿病肾病的作用机制。方法:实验分组:正常对照组、甘露醇组、高糖组、高糖+SB203580组、高糖+匹格列酮组,观察匹格列酮对高糖培养下的人肾小球系膜细胞p38MAPK信号通路和TGF-β蛋白表达的影响。结果:与高糖组相比,匹格列酮降低系膜细胞p38MAPK信号通路和TGF-β蛋白表达水平。结论:匹格列酮抗糖尿病肾病的作用可能与其抑制p38MAPK信号通路激活和减少TGF-β的表达密切相关。
胰岛素抵抗(insulin resistance)是2型糖尿病的重要发病机理之一,运动能显著改善胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性,目前认为,运动的这些效应可能与运动改善了靶器官上胰岛素的受体后信号转导过程有关。综述了近年来有关运动对骨骼肌胰岛素受体及受体后各相关信号传导蛋白的影响。探讨运动防治2型糖尿病的机制。
针对眼表上皮疾病的基础及临床方面进行了系统研究,包括角膜上皮干细胞的生理,眼表免疫,眼表上皮细胞黏蛋白表达及功能,眼表鳞状上皮化生的发病机制,干眼的诊断与治疗,角膜组织工程,新生血管性眼病的发生机制与治疗等,并在这些方向取得了一系列研究成果.
间充质干细胞因具有多向分化,来源广泛、取材容易和便于自体移植等特点,是一种理想的组织工程干细胞。国内外有关其用于治疗的研究已取得了一定的进展,但是其具体的作用机制仍不是很清楚。近来有关其信号通路的研究较多,本文就其中有关间充质干细胞迁移的相关通路,如PI-3K/AKT信号通路、MAPK/ERK1/2信号通路、Wnt3a信号通路、Jak/STAT信号通路、RhoA-Rho

点击此处 kinase信号通路、SMAD信号通路,进行综述,以便更全面的理解间充质干细胞迁移的机制。
心肌缺血再灌注损伤与众多凋亡基因密切相关。Fas/FasL系统在心肌缺血再灌注损伤中起关键作用,是引起细胞凋亡的主要途径之一,是直接启动细胞凋亡信号传导的系统之一。Fas/FasL系统与心肌缺血再灌注细胞凋亡及其信号传导机制是目前国内外研究的热点,现对该问题做一综述。
目的探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)色素上皮细胞衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达影响以及腺相关病毒介导血管抑素(rAAV-AS)基因的干预作用。方法将培养的大鼠GMC株分为6组,高糖作为刺激因素,rAAV-AS作为干预因素。分别设低糖组、高糖组、高糖加腺相关病毒(rAAV)组及高糖加rAAV-AS治疗组。用免疫细胞化学及ELISA法测定各组系膜细胞PEDF以及VEGF蛋白表达。结果高糖可下调GMC中PEDF蛋白的表达,上调GMC中VEGF蛋白的表达。rAAV-AS可逆转高糖导致GMC的VEGF蛋白表达的增加及PEDF蛋白表达的降低。结论

selleck公司

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selleck rAAV-AS可以一定程度改善高糖诱导的VEGF和PEDF表达失衡而发挥对糖尿病肾病(DN)的保护作用。
目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人原代脂肪细胞与单核/巨噬细胞系THP-1共培养体系中脂联素和瘦素表达的影响。方法建立脂肪细胞与单核/巨噬细胞共培养体系,将细胞分为六组:对照组(A组),脂肪细胞单独培养;共培养组(B组),脂肪细胞和THP-1细胞共培养;共培养TNF-α组(C组),脂肪细胞和THP-1共培养,TNF-α10

ng/ml干预24 h;共培养SP、PD、SB组(D、E、F组),分别用丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路阻断剂SP600125、PD98059、SB203580预处理1 h后,TNF-α10 ng/ml干预24 h。收集细胞培养的上清液,ELISA法检测脂联素和瘦素的表达。结果与A组相比,其余各组脂联素表达均减少(P<0.05);D、E、F组脂联素表达较C组增加(P0.05)。结论 TNF-α诱导共培养体系中MAPK信号通路激活;脂肪细胞与单核/巨噬细胞之间相互作用,影响下游炎症因子的表达。
芥子气在第一次世界大战作为化学战剂使用,造成大量的人员死伤,是外国军队装备主要的毒剂之一。芥子气中毒机理虽早有研究,但迄今尚未完全阐明〔1〕。目前对芥子气损伤机制主要集中在DNA烃化和DNA链断裂、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)激活、谷胱甘肽耗竭、炎症反应、蛋白水解酶
目的:探讨低肌糖原含量促进运动诱导的骨骼肌白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)基因转录的增加与核转录因子κB(Nuclear 或者 factor kappa B,NF-κB)及p38丝裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路激活的关系。方法:空白对照组(n=8)大鼠不运动,其余80只大鼠分为正常肌糖原组和低肌糖原组两大组,每组40只,先进行2 h跑台运动(消耗肌糖原),运动后24 h内采取不同膳食干预,低肌糖原组大鼠运动后6 h喂食低糖饲料,正常肌糖原组运动后即刻喂食标准饲料,这样运动24 h后低肌糖原组大鼠肌糖原含量与空白对照组相比显著降低(P0.05)。然后两个大组进行定量负荷运动,分别于运动前、运动30 min即刻、运动2 h即刻、运动2 h后恢复3 h和恢复6 h宰杀大鼠取材,测定血清IL-6蛋白含量、肌糖原含量、骨骼肌NF-κB及p38MAPK蛋白含量和骨骼肌IL-6 mRNA水平。结果:与运动前相比,低肌糖原组和正常肌糖原组大鼠运动2h即刻骨骼肌IL-6 mRNA水平、骨骼肌核磷酸化NF-κB蛋白含量、骨骼肌核磷酸化p38MAPK蛋白含量均显著上升(P<0.05)。结论:低肌糖原含量促进运动引起的骨骼肌IL-6基因转录增加可能是通过激活NF-κB和p38MAPK信号通路实现的。
目的:观察姜黄素对肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)mRNA基因表达水平的影响。方法:将高浓度葡萄糖液及不同浓度的姜黄素液与肾小球系膜细胞共孵育,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测各组细胞PPAR-γ mRNA表达强度。结果:单纯高浓度葡萄糖组肾系膜细胞PPAR-γ mRNA表达量(0.394±0.026)显著低于正常对照组(0.995±0.

21±8.51岁。所有患者及健康志愿者均清晨空腹抽取抗凝静脉血7ml，用于分离PBMCs检测。抽取不抗凝静脉血5ml，分离血清备用。 2治疗方法 所有慢性丙型肝炎患者均给予干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗，根据白细胞及中性粒细胞减少情况，给予升白药物治疗。肝功能异常患者给予保肝降酶、退黄等治疗。

3外周血单个核细胞中TIPE2、FOXP3、CTLA-4基因检测 Ficoll密度梯度离心法常规分离PBMCs，Trizol一步法提取PBMCs中的总RNA，利用紫外分光光度计测量RNA，吸光度（A）260/（A）280nm的值在1.8-2.0时用于实验，利用M-MLV逆转录酶合成制备cDNA，应用Primer5.0设计软件设计合成特异性引物，RT-PCR检测TIPE2、FOXP3、CTLA-4mRNA的表达。 4血清检测 留取慢性丙型肝炎患者不抗凝静脉血5ml，分离血清，全自动生化仪酶法检测肝功能，ELISA法测抗-HCV，实时荧光定量PCR探针法检测HCV-RNA。 结果： 1慢性丙型肝炎患者PBMCs中TIPE2基因的表达及与抗病毒治疗的关系 结果显示慢性丙型肝炎患者PBMCs中TIPE2mRNA的表达水平较健康对照组显著降低（0.50±0.19vs0.71±0.17，P＜0.01）；其中21例慢性丙型肝炎患者在抗病毒治疗前后分别检测，结果显示PBMCs中TIPE2mRNA水平治疗后较治疗前明显升高（0.48±0.12vs0.59±0.12，P＜0.01）。 EPZ-6438 价格 2慢性丙型肝炎患者PBMCs中FOXP3基因的表达及与抗病毒治疗的关系 慢性丙型肝炎患者PBMCs中FOXP3mRNA的表达水平较健康对照组明显升高（0.77±0.38vs0.40±0.09，P＜0.01）；21例慢性丙型肝炎患者在抗病毒治疗前后分别检测，结果显示PBMCs中FOXP3mRNA水平治疗后较治疗前明显下降（0.85±0.35vs0.50±0.06，P＜0.01）。 3慢性丙型肝炎患者PBMCs中CTLA-4mRNA基因的表达及与抗病毒治疗的关系 慢性丙型肝炎患者PBMCs中CTLA-4mRNA的表达水平较健康对照组显著升高（0.67±0.19vs0.44±0.13，P＜0.01），21例慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗前后分别检测，结果显示PBMCs中CTLA-4mRNA水平治疗后较治疗前明显下降（0.70±0.19vs0.55±0.14，P＜0.01）。

4TIPE2基因的表达与慢性丙型肝炎临床指标的相关性 分析慢性丙型肝炎患者临床资料，依据慢性丙型肝炎患者血清中HCV-RNA、 ALT、 AST、 TBil水平，将其分为HCV-RNA低水平组（HCV-RNA≤1×105IU/ml）和HCV-RNA高水平组（HCV-RNA＞1×105IU/ml）；ALT正常组（ALT≤40U/L）和异常组（ALT＞40U/L）；AST正常组（AST≤40U/L）和异常组（AST＞40U/L）以及TBil正常组（TBiL≤20μmol/L）和异常组（TBil＞20μmol/L），统计分析显示，慢丙肝患者PBMCs中TIPE2mRNA的表达水平HCV-RNA在低水平组显著高于高水平组（0.63±0.17vs0.37±0.10，P<0.01），在ALT、AST、TBil正常组显著高于异常组（ALT，0.61±0.17vs0.37±0.10，P<0.01；AST，0.61±0.17vs0.36±0.10，P<0.01；TBil，0.59±0.18vs0.36±0.10，P
目的：随着人民生活水平的提高、生活方式的改变以及人口老龄化进程的加速，我国糖尿病（Diabetes 时间 Mellitus, DM）的患病率正在逐年增高，2007-2008年全国糖尿病患病率调查结果表明，我国20岁以上成人糖尿病患病率已达9.7%，据此推算，我国糖尿病总患病人数达9200万以上，已成为世界第一糖尿病大国。糖尿病成为继肿瘤、心血管疾病之后的第三大严重威胁人类健康的慢性非传染性疾病。糖尿病的构成以2型糖尿病（type2diabetes 通常 mellitus, T2DM）为主，占90%以上。糖尿病大血管病变是指主动脉、冠状动脉、脑基底动脉、肾动脉及周围动脉等发生病变，以动脉粥样硬化（atherosclerosis,

AS）为主要病理基础，它与单纯的AS相比病变范围大、程度重、发生早。大血管病变是危害最大的糖尿病慢性并发症，是我国2型糖尿病患者主要的致残、致死原因。约80%的2型糖尿病患者死于大血管并发症，如心肌梗死、脑卒中等。研究显示，AS的病理改变与丝裂素活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）的过度激活有关，p38MAPK通路属于MAPK家族，与内皮细胞损伤关系密切，是参与炎症反应的重要的细胞内通路，由此推测，磷酸化p38MAPK参与了2型糖尿病大血管病变的发病过程。阿托伐他汀能够有效降低血浆胆固醇（total cholesterol, TC）水平，减少低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL）的生成，除调脂作用外，阿托伐他汀还具有抗炎、改善血管内皮功能、稳定斑块的作用。本课题通过高脂、高糖饲养wistar大鼠，建立具有2型糖尿病动脉粥样硬化特点的动物模型，观察wistar糖尿病大鼠胸主动脉磷酸化p38MAPK表达水平的变化以及阿托伐他汀干预对磷酸化p38MAPK表达水平的影响，探讨p38MAPK与糖尿病大血管动脉粥样硬化的关系及阿托伐他汀的干预作用。 方法：选用4周龄健康雄性wistar大鼠25只，适应性饲养1周后，按照随机数字表将大鼠随机分为正常对照组（NC，n=6）和实验组（EX，n=19），正常对照组采用标准饲料喂养，实验组采用高脂高糖饲料喂养（20%的蔗糖、10%的熟猪油、2.5%的胆固醇、1%的胆酸、66.5%的标准饲料）。喂养4周后，实验组大鼠隔夜空腹腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin, STZ,30mg/kg），正常对照组仅注射等容积的柠檬酸缓冲液。于实验的第6周测大鼠空腹血糖（fasting blood glucose, FBG），选择血糖≥7.

05)。不稳定型心绞痛合并2型糖尿病患者上述指标高于单纯2型糖尿病患者及单纯不稳定型心绞痛患者(P<0.05)。单核细胞TLR4mRNA和蛋白与FBG、FIN、HOMA-IR、HbA1c、TNF-α、IL-10正相关(P
内皮祖细胞(EPC)是一类能循环、增殖并分化为血管内皮细胞,但尚未表达成熟血管内皮细胞表型特征的前体细胞。研究发现,EPC不仅参与人胚胎血管生成,同时也参与出生后血管新生和内皮损伤后的修复过程。干细胞因子(SCF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF),HMG-coA还原酶抑制剂、粒系巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)等都能白骨髓动员EPC,并促进其增殖、分化、粘附和迁移能力.氧化性低密度脂蛋白是冠心病独立危险因素,其生物学作用主要是影响内皮细胞功能,并进一步导致动脉粥样硬化。研究证明EPC对维持内皮结构和功能的完整性具有重要作用,并且参与了机体多种生理、病理性血管重建过程,在新形成的血管中,EPC来源的内皮细胞约占总内皮细胞的25%。EPC促进血管生成和内皮再生是因为EPC能够从骨髓动员到外周循环中,并归巢到血管损伤和生成的部位。EPC归巢需要多步骤协调作用,包括趋化、粘附、跨内皮迁移及最终分化为内皮细胞。最近,临床试验表明冠状动脉疾病患者培养的EPC数量及迁移能力明显下降。氧化型低密度脂蛋白(oxidized

所以 low density lipoprotein,oxLDL)为心血管疾病的重要独立危险因素,而且冠状动脉疾病及糖尿病患者血浆oxLDL生成明显增加。以前的研究表明oxLDL能够诱导内皮细胞凋亡、增加内皮细胞粘附分子的表达、抑制内皮细胞迁移而抑制血管新生。基于以上研究背景,我们推测。oxLDL可能为影响EPC数量和功能的因素。本研究的目的是观察oxLDL是否影响外周血EPC的数量;是否改变了EPC的增殖功能、迁移功能及粘附能力;oxLDL对EPC的体外血管生成能力的影响程度;同时观察oxLDL是否影响EPC的P38信号表达,来影响EPC的数量、功能。本研究分为二个部分,主要研究方法和结果如下:

第一章氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞存活和功能的影响 目的: 研究氧化型低密度脂蛋白(oxidized BAY 73-4506购买 low density lipoprotein,oxLDL)对EPC存活及功能的影响 方法: 1.EPC的分离、培养:取健康成人空腹外周静脉血,用密度梯度离心法获取单个核细胞,培养7天,收集贴壁细胞。贴壁细胞随机分成5组:①对照组;②oxLDL各浓度组(共3组):在培养液中分别加入25,50,100,200μg/ml后培养24小时;③LDL组:含100μg/ml的条件培养液培养24h。 2.细胞染色与鉴定:分离获得的单个核细胞培养7d后形成了梭形的内皮样细胞。用acLDL-Dil和FITC-UEA-I对细胞染色后,通过荧光显微镜鉴定,FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,在荧光显微镜下(~*200)对每孔细胞进行计数 3.细胞表型检测:将2×10~5贴壁细胞分别与FITC标记的VEGFR-2,CD31和CD34单克隆杭体以及PE标记的KDR,在4℃孵育30 min后,用300μl PBS悬浮细胞后上机检测。 4.EPC粘附能力检测:收集贴壁细胞,悬浮在500μl培养液并计数,然后将等量EPC接种到包被有人纤维连接蛋白培养板,在37℃培养30

min,计数贴壁细胞。 5.EPC迁移能力检测:收集贴壁细胞并计数。将600μl培养液和VEGF(50 ng/mL)加入改良的Boyden室的下室,将2×10~4 EPC悬浮在100μl培养液注入上室,培养24 h,刮去滤膜上面的未移动细胞,计数迁移到低层的细胞。 已经 6.EPC增殖能力检测:采用promega公司的Non-Radioactive CellProliferation Assay试剂盒MTS/PMS比色法检测细胞增殖率,按操作程序执行,简化如下:将消化的各组EPC细胞溶于含0.5%BSA的EBM-2中(含50ng/ml的VEGF)其中细胞浓度是1×10~5/ml,取各组细胞液50μl加入96孔,设三孔对照,培养72小时,各孔加入配备的染液15μl,再培养4小时,加停止液,过夜。置酶标仪于波长570nm记录各孔值,三孔对照均值作为各组本次试验值, 7.体外血管生成能力检测:采用体外血管生成试剂盒检测EPC的血管生成能力.将ECM成胶。胰蛋白酶消化贴壁细胞获取EPC,并重新悬浮于培养液,调整细胞数为5×10~4/ml。将EPC接种于ECM胶上。37℃培养24h,在200倍倒置显微镜下观察小(血)管生成情况,随机选择6个显微镜视野(x200),计数小管数。 结果: 1.EPC的鉴定:分离获得的单个核细胞培养3天即可看到贴壁生长,7天后形成梭形的内皮样细胞。用acLDL-DiI和FITC-UEA-I对细胞染色后,通过荧光显微镜鉴定UEA-I和DiLDL双染色阳性细胞被认为是正在分化的EPC占贴壁细胞的90%。流式细胞仪检测贴壁细胞表面标志,结果显示:表达KDR(VECFR-2)(68.8±7.5)%,CD34(25.4±9.1%),CD31(71.2±7.2%)和CD144:(73.9±6.3)%,进一步明确为EPC。 2.oxLDL对外周血EPC数量的影响: 不同浓度的OxLDL干预EPC后24小时,结果显示:oxLDL显著减少EPC数量,并且EPC数量随着oxLDL的浓度的增加而减少。而LDL对EPC数量无影响。50μg/ml 100μg/ml,200μg/ml的oxLDL组导致EPC数量分别为46.3±4.85,34.2±3.59,22.7±2.38都较对照组EPC的70.7±7.41低,差异有显著性,P＜0.05。而oxLDL25μg/ml及LDL导致EPC数量为63.8±6.69,68.3±7.16,差异无显著性,P＞0.05 3.OxLDL对外周血EPC粘附能力的影响:oxLDL显著减少EPC的贴壁数,并且贴壁数随着其浓度的增加而减少,而LDL对EPC的贴壁无影响。50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml的oxLDL组导致EPC粘附数分别为21.7±2.28,16.3±1.71,10.2±1.07都较对照组EPC的30.2±3.17低,差异有显著性,P＜0.05。而oxLDL 25μg/ml及LDL导致EPC粘附数为25.8±2.71,28.3±2.97,差异无显著性,P＞0.

005);此外,p-AKT的阳性和肿瘤侵润深度不同的食管癌患者之间比较,有统计学上显著差异性(p = 0.008),并且p-AKT的阳性表达与预后差密切相关(p Selleck BAY 73-4506 = 0.001)。 结论:ESCC中Shh、Gli1阳性表达与淋巴结转移相关,而p-AKT阳性表达则与肿瘤侵润深度相关,Shh、Gli1和p-AKT的阳性表达均与较差的预后相联系。在ESCC治疗策略上联合抑制Shh和PI3K/AKT通路可能更加有效。
研究背景 前列腺癌在美国是男性最常见恶性肿瘤之一,肿瘤死亡率位居第二。近年来,我国前列腺癌的检出率已呈明显上升趋势。目前,晚期雄激素非依赖型前列腺癌(AIPC)的治疗仍是一个难题,尚无理想的治疗方法。因此,研究和探索新的治疗策略,具有十分重要的临床意义。 研究表明,Hedgehog(Hh)信号通路的激活与前列腺癌密切相关。人前列腺癌组织表达Hh配体及其下游靶基因Gli。Hh信号通路抑制剂cyclopamine(环杷明)能抑制前列腺癌肿瘤细胞增殖、改变其侵袭能力、抑制移植肿瘤的生长并引起消退。但cyclopamine因含量少,合成困难,副作用大,限制了其临床应用。最近研究发现维生素D也是一种Hh信号通路抑制剂,以很高的亲和力结合Smo,抑制Gli活性,且作用强于cyclopamine。

前列腺癌的多药耐药(MDR)是导致其化疗失败的主要原因,肿瘤细胞MDR的发生与细胞膜上过量表达的ABC转运蛋白有关,包括P-型糖蛋白(PGP)、多药耐药蛋白(MRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)等,它们可以将化疗药物泵出细胞外从而导致肿瘤细胞产生耐药性。研究表明,Hh通路抑制剂是一种有效的ABC转运蛋白抑制剂,特别是对PGP、BCRP具有很强的抑制作用。 然而,维生素D可引起高血钙的副作用影响了其在抗肿瘤领域的临床应用。EB1089是一种维生素D类似物,具有更强的调节肿瘤细胞生长、分化的作用,而对血钙的影响较小。本研究旨在探讨EB1089是否作为一种Hh通路抑制剂,通过Hh信号通路途径抑制雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长,逆转其MDR。 方法与结果 首先采用MTT法和流式细胞技术检测EB1089对DU145细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,并与cyclopamine作比较,同时在光镜和电镜下观察细胞形态学和超微结构变化。结果显示,EB1089可以抑制DU145细胞的增殖,差异有统计学意义,呈时间和剂量依赖关系,且抑制作用强于cyclopamine。1、10、50、100nmol/L

已经 EB1089作用DU145细胞48h后,G0/G1期细胞逐渐增多,而S期细胞逐渐减少,细胞凋亡率逐步增高。EB1089作用后,镜下可见DU145细胞典型的凋亡形态学改变：细胞体积缩小,细胞核固缩、裂解,核碎片及凋亡小体形成。 其次,分别用1、10、50、100nmol/L浓度的EB1089作用DU145细胞48h后,采用Real time-PCR和Western blot方法分别检测DU145细胞Glil、cyclinD1、BCL-2、Bax mRNA和蛋白的表达变化。结果显示,EB1089作用48h后,DU145细胞Glil、cyclinD1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达均下降,Bax mRNA和蛋白表达均上调,并呈剂量依赖关系。 最后,MTT法检测EB1089和多西紫杉醇二者合用对DU145细胞增殖的作用,以及EB1089对耐多西紫杉醇DU145细胞(DU145-DR)化学敏感性的影响；并采用Real time-PCR和Western blot方法分别检测EB1089作用后DU145-DR细胞PGP/MDR1、MRP、BCRP mRNA和蛋白的表达变化,结果显示,两药联合对DU145细胞增殖的抑制作用显著高于两药单独作用；DU145-DR细胞经EB1089作用后对多西紫杉醇的敏感性增加,逆转倍数为2.87,相对逆转效率为70.8%；EB1089作用后,DU145-DR细胞PGP/MDR1、BCRP的表达水平显著下调。 结论 EB1089可以抑制DU145细胞增殖,抑制作用于强于cyclopamine,EB1089可以阻滞DU145细胞于G1期,诱导DU145细胞凋亡,其作用机制可能是作为一种有效的Hh信号通路抑制剂,通过抑制Hh信号通路,下调Glil,进而调节cyclinD1、Bcl-2和Bax的表达来完成。EB http://www.selleckchem.cn/products/BIBF1120.html 1089可以提高耐多西紫杉醇DU145细胞的化学敏感性,有效逆转其耐药性,其逆转机制可能主要通过下调PGP/MDR1、BCRP的表达来实现,EB1089与多西紫杉醇合用抑制DU145细胞增殖呈协同效应。
目的合成vismodegib(GDC-0449)。方法以2-氯-5-硝基苯胺、2-氨基吡啶和2-氯-4-甲磺酰基苯甲酸为起始原料,通过重氮化反应、硝基还原反应、吡啶-苯环碳-碳negishi偶联反应以及酰胺化反应得到目标产物。结果合成了vismodegib并经核磁共振氢谱和质谱确证结构;偶联反应收率61.5%,高于文献报道收率(60%)。结论本文优化了vismodegib的合成路线,同时改进了反应条件、简化了后处理,收率较高。
据《2012年中国肿瘤登记年报》数据显示,我国肺癌发病率70.4/10万,死亡率45.57/10万,占恶性肿瘤发病率和死亡率的首位,且有逐年上升趋势。小细胞肺癌虽占肺癌15%~20%,但由于肺癌患者基数大,小细胞肺癌(SCLC)患者人群也相当庞大,发病率11~14/10万,相当于我国食管癌的年总发病率,严重危害我国人民的健康。近十年,伴随靶向药物的临床应用,晚期非小细胞肺癌
目的表皮生长因子受体(Epithelial

growth factor receptor,EGFR)是酪氨酸激酶EGFR家族的一员,它可以促进细胞的增殖与分化等。在多种实体肿瘤如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌、头颈部肿瘤、肾癌中存在EGFR基因的扩增或EGFR的高表达。靶向EGFR的小分子抑制剂目前在临床上应用广泛,但肿瘤耐药是其临床应用的主要障碍。Sonic hedgehog(SHH)信号通路主要调节了胚胎时期的细胞增殖、分化、组织发育及器官形成,其信号通路成员的突变或过表达往往会导致SHH信号通路的异常激活,从而导致肿瘤的发生及发展。本研究旨在对Sonic hedgehog信号通路…
h、Gli1、p-AKT和p-ERK的表达与临床病理特征及预后之间的关系。 方法:采用电话或信函随访的方式,了解食管癌患者术后生存的情况,使用统计学方法研究Shh、Gli1、p-AKT和p-ERK免疫组化表达在食管鳞癌中的分布特征,并和食管鳞癌临床特征诸如患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置、淋巴结转移、肿瘤侵润深度、癌分化程度、肿瘤TNM分期及术后生存期对比分析。 结果:Shh阳性表达在淋巴结转移阴性和淋巴结转移阳性的食管癌患者之间比较,有统计学上显著差异性(p = 0.027),且Shh的阳性表达与预后差密切相关(p = 0.017);Gli1阳性表达在淋巴结转移阴性和淋巴结转移阳性的食管癌患者之间比较,有统计学上显著差异性(p = 0.

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一.外科手术是本病的主要治疗方法.虽然外科手术已取得了一定进展,但对于胃癌复发明显增加的患者来说总体生存率改善甚微.尽管新药物的开发已显著提高胃癌化疗的效果,但病灶不能切除或转移性胃癌的患者预后仍较差.因此,有必要找出一些有效针对胃癌的新方法.现已证明自噬在胃癌的转化和进展扮演双重角色:自噬的激活和诱导均可导致胃癌的发生.最近,一些自噬分子靶向药物治疗胃癌进行了研究.本文综述了两种调控细胞自噬方法来互补治疗胃癌:抑制剂和诱导剂,并讨论他们如何调控自噬靶向治疗胃癌.
目的检测瘢痕癌中PI3K/AKT信号通路中PI3K,AKT及其下游靶基因Bcl-2的表达,分析该通路靶向治疗靶点及靶向治疗的可行性。方法研究对象为瘢痕癌组织,以正常皮肤表皮为对照。免疫组织化学(SP法)技术检测PI3K,AKT,Bcl-2蛋白的表达;原位杂交技术检测PI3K

mRNA,AKT mRNA的表达。结合图像分析,分别计算被检组织中所检各项指标的平均光密度和阳性面积,所有数据运用SPSS16.0软件进行统计学分析。结果 PI3K蛋白及其mRNA在正常皮肤表皮呈阴性表达,在瘢痕癌组织中呈阳性表达。瘢痕癌组表达水平、表达强度与正常皮肤组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。AKT蛋白及其mRNA在正常皮肤表皮呈阴性表达,在瘢痕癌组织呈强阳性表达。瘢痕癌组表达水平、表达强度与正常皮肤组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论 PI3K,AKT可能是瘢痕癌的致癌位点,实施靶向治疗的可行性存在。Bcl-2可能具有致癌位点的多样性,是否是瘢痕癌的致癌位点有待进一步探讨。
PI3K是一种脂质激酶,控制着细胞生长、增殖、迁移、存活和血管生成,以及通过激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、AKT和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)促进肿瘤发展。哺乳动物mTOR的作用靶点是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它在细胞中广泛地表达,是一种治疗癌症的靶向目标。本文将主要论述癌症细胞系PI3K-mTOR信号通路的改变,包括乳腺癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌、肝癌等的作用机制。PI3K-mTOR是肿瘤治疗的有前途的靶向目标。多靶点抑制是肿瘤治疗最有效的方法,通过讨论临床试验中研究的PI3K-mTOR抑制剂药物,为将来临床抗肿瘤药物的研发提供新途径。
目的:观察纳米金(GNP)人耐药肝癌细胞株耐药性的逆转作用。方法:采用氯金酸柠檬酸三钠还原法制备并鉴定;分别用GNP与阿霉素(ADM)组单独或联合作用于ADM耐药的肝癌细胞株Hep

点击此处 G2/ADM,以未处理的Hep G2/ADM细胞为对照,用MTT法检、流式细胞术检测细胞的增殖与凋亡情况;紫外分光光度计检测Hep G2/ADM细胞经ADM单独作用以及GNP与ADM联合作用后细胞内ADM浓度。结果:与对照细胞比较,ADM单独作用及GNP与ADM联合作用后,Hep 所以 G2/ADM的增殖均明显抑制、凋亡率明显升高,但后者的作用明显强于前者(均P0.05);GNP+ADM作用后,Hep G2/ADM细胞内的ADM含量较ADM单独作用后的ADM含量明显增加[(2.92±0.13)μg/L vs.(1.68±0.74)μg/L,P
目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase,catalytic subunit delta,PIK 3CD)基因沉默对胃癌HGC-27细胞体外增殖和迁移的影响及其可能的作用机制。方法:首先采用实时荧光定量PCR法检测人胃癌HGC-27细胞中PIK

3CD基因的表达水平;然后将MSCV-PIK3CD-sh RNA重组质粒转染到HGC-27细胞中,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法鉴定PIK 3CD基因沉默效果;采用CCK-8试剂盒和Transwell小室法分别检测PIK 3CD基因沉默对胃癌HGC-27细胞增殖和迁移的影响;蛋白质印迹法检测PIK3CD基因沉默后其下游相关的Akt信号通路分子的表达情况。结果:PIK3CD在胃癌HGC-27细胞中高表达。MSCV-PIK3CD-sh RNA转染入PIK3CD基因高表达的胃癌HGC-27细胞后,PIK3CD表达被明显下调(P<0.05),细胞增殖和细胞迁移能力明显降低(P<0.05)。结论:PIK3CD可能通过激活Akt信号转导通路,促进胃癌HGC-27细胞的体外增殖和迁移。
目的总结自噬及其在胃癌中的研究进展。方法检索并筛选近年来国内外发表的有关自噬与胃癌关系的文献并分别对自噬的特点、分子标志、调控因素及其在胃癌中的意义和作用进行综述。结果自噬既可促进细胞的死亡,也可延长肿瘤形成中癌细胞的存活。调控自噬的药物(包括中药)在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景,但基于自噬调控的抗肿瘤治疗效果仍取决于细胞内自噬的实际水平。结论目前对胃癌自噬现象的了解仍然知之甚少,阐明自噬现象的分子机理并通过合理调控自噬来杀伤癌细胞仍然需要更为深入的实验研究。
晚期胃癌患者能否进行二线治疗一度备受争议。近年来,越来越多的研究结果表明,对体力状况较好的晚期胃癌患者,二线治疗能够显著降低其死亡风险。所用的化疗药物主要为伊立替康或紫杉类药物。多靶点的酪氨酸激酶受体抑制剂舒尼替尼、血管内皮生长因子受体2的单克隆抗体雷莫芦单抗等靶向药物也开始崭露头角。对于晚期胃癌患者,还需要根据患者的身体状况和预后指标个体化选择治疗方案。本文通过对近几年所涉及的胃癌二线治疗方案进行总结,希望能为临床晚期胃癌的二线治疗提供参考。
The http://www.selleckchem.cn/products/BAY-73-4506.html phosphatidylinositol 3 kinase(PI3K) pathway is frequently altered in cancer, including ovarian cancer(OC). Unfortunately, despite a sound biological rationale and encouraging activity in preclinical models, trials of first-generation inhibitors of mammalian target of rapamycin(m TOR) in OC have demonstrated negative results. The lack of patient selection as well as resistance to selective m TOR complex-1(m TORC1) inhibitors could explain the disappointing results thus far. Nonetheless, a number of novel agents are being investigated, including dual m TORC1/m TORC2, Akt, and PI3 K inhibitors.

实时定量PCR (real-time PCR)检测 定量称取冻存组织,Trizol法提取总RNA,经过逆转录后以18S为内参检测SAA1的表达,以确定SAA1高表达慢病毒的转染效果。

8.免疫荧光染色 重组SAA1蛋白刺激平滑肌细胞后,免疫荧光法检测胶原I、胶原III、MMP1和MMP8的表达。 9.统计学分析所有数值均以均数±标准差表示。对数据进行正态分布检验,正态分布的计数资料应用Student t检验,多组采用方差分析(ANOVA),非正态分布的资料行Mann-Whitney检验。设P0.05)。表明SAA1高表达慢病毒的局部转染,没有影响小鼠体内整体的脂质代谢。 2. plenti6.3-SAA1-IRES-EGFP慢病毒转染对血清SAA1及其他炎症因子表达的影响 Control组、lenti-null组、1ow-lenti-SAA1组的血清SAA1表达几乎没有变化,high-lenti-SAA1组的血清SAA1表达略高于前三组,但尚未达到统计学差异(P>0.05)；这四个组的炎症因子TNF-α、IL-6在血清中的分泌表达也未达到统计学差异(P>0.05)。表明慢病毒的局部转染,没有引起小鼠体内显著的炎症反应。 所以 3. plenti6.3-SAA1-IRES-EGFP;慢病毒转染后SAA1在颈动脉斑块内表达的检测 SAA1的免疫组化结果显示, control组和lenti-null组的阳性染色面积无差异(P>0.05), low-lenti-SAA1组和high-lenti-SAA1组的SAA1阳性染色区域显著高于lenti-null组及control组(P0.05), 点击此处 low-lenti-SAA1组和high-lenti-SAA1组的SAA1表达量显著高于lenti-null组及control组(P<0.05)；同时,high-lenti-SAA1组与low-lenti-SAA1组相比,脂质含量也显著增加(P0.05); low-lenti-SAA1组巨噬细胞的比例显著增加(P0.05)。这一结果表明,两个浓度梯度的SAA1高表达慢病毒转染均能显著增加颈动脉斑块内巨噬细胞的聚集。

6.SAA1高表达慢病毒转染对颈动脉斑块内平滑肌细胞的影响 对小鼠颈动脉斑块冰冻切片进行平滑肌细胞染色,四组之间的平滑肌细胞聚集未见显著改变,尽管两个浓度梯度的SAA1高表达慢病毒转染有轻微地增加颈动脉斑块内平滑肌细胞聚集的趋势,但未达到统计学差异。这一结果表明,SAA1高表达慢病毒转染不能改变斑块内平滑肌细胞的聚集。 7.SAA1高表达慢病毒转染对颈动脉斑块内胶原表达的影响 通过对小鼠颈动脉斑块冰冻切片进行masson染色,发现与control组相比,lenti-null组胶原未见显著改变(P>0.05); low-lenti-SAA1组胶原的比例显著增加(P0.05); high-lenti-SAA1组与low-lenti-SAA1组相比,胶原的比例显著减少,达到统计学差异(P0.05)；low-lenti-SAA1组易损指数显著减低(P0.05)。这一结果表明,低浓度的SAA1高表达慢病毒转染能显著降低斑块的易损性,但高浓度SAA1高表达慢病毒转染则显著增加斑块的易损性。 Akt抑制剂 9.SAA1诱导胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达 对小鼠颈动脉冰冻切片进行胶原Ⅰ的免疫组化染色发现,与control组相比,lenti-null组胶原Ⅰ的百分比未见显著改变(P>0.05); low-lenti-SAA1组胶原Ⅰ显著提高(P0.05); high-lenti-SAA1组与low-lenti-SAA1组相比,胶原Ⅰ显著减少达到统计学差异(P0.05);

low-lenti-SAA1组胶原Ⅲ显著提高(P<0.05)；high-lenti-SAA1组胶原Ⅲ显著减少(P0.05); p-ERK1/2的表达均随时间的延长发生改变,刺激可使p-ERK1/2显著上调。然后分别应用JNK、ERK1/2以及p38MAPK的特异性抑制剂预处理平滑肌细胞,这三种抑制剂均未能显著抑制SAA1诱导的胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达上调。上述结果充分说明了JNK、p38MAPK两条信号通路在平滑肌细胞内几乎未被SAA1激活,因此不参与下游的胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达的调控；而ERK1/2信号通路虽然能被SAA1激活,但却没有参与SAA1对胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达的调控。 11. Smad2/3信号通路介导SAA1诱导的胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达上调 经过不同时间的SAA1刺激后,p-Smad2和p-Smad3的表达均发生显著改变(P0.05)；接着经过TGF-β1的siRNA及其特异性抑制剂SB431542干预后,SAA1诱导的胶原I和胶原III表达上调仍没有改变。这些结果充分证明SAA1诱导胶原I和胶原Ⅲ表达上调的过程不依赖于TGF-β1。 13.SAA1通过增加MMP-2、MMP-8及MMP-9表达促进胶原降解 对小鼠颈动脉斑块冰冻切片进行免疫组化染色,MMP1在四组未见统计学差异(P>0.05)。MMP8结果表明,lenti-null组、low-lenti-SAA1组与control组相比,MMP8占斑块面积的百分比未见显著改变(P>0.05); high-lenti-SAA1组MMP8占斑块面积的百分比显著升高(P0.05);1μg/ml的浓度也无法显著增加MMP8的表达,但10μg/ml的浓度则显著增强MMP8的表达。Western blot结果显示,SAA1刺激后,MMP1的表达无显著改变(P>0.

Y27632调控小鼠胚胎干细胞自我更新的miRNA芯片数据分析 目的：更全面地了解YES细胞体系与常规ES细胞的差异,并从中提取更多的转录后调控分子信息,以期发现新的全能性相关分子事件。 结果：将本研究发现的Y-ES细胞与ES细胞的差异表达miRNA与文献报道的ES细胞与epiS细胞的miRNA差异表达谱进行比对发现,两组差异表达谱重叠较少,在27条差异表达miRNA中仅有5条与之相同,提示Y-ES细胞处于不同于原始态全能性和始发态全能性的中间状态。对Y-ES细胞中上调的miRNA进行功能分析发现,8条常规分子通路可能受到潜在调控,其中包括粘着斑信号,Wnt信号通路和ErbB信号通路等。继而,对Y-ES细胞,ES细胞和EB的差异表达miRNA进行的分类比对分析发现,6条miRNA在Y-ES细胞和ES细胞维持高表达而在分化的EB样本中显著下调,另外16条miRNA在Y-ES细胞和ES细胞中低表达而在EB中高表达。这些miRNA作为全能性和分化相关的靶点,用定量RT-PCR进行表达验证,确定了全能性样本中高表达的5条miRNA及分化样本高表达的3条miRNA具有超过两倍的差异。对两组miRNA进行功能分析,分别发现13条和5条常规分子信号通路可能受到这些miRNA调控的信号通路,其中粘着斑(Focaladhesion)和ErbB信号通路具有较大相关性和研究价值。采用蛋白相互作用数据库分别对这两条通路与全能性核心转录因子网络进行相互作用预测,选取预测的关节节点进行蛋白表达验证,结果发现Y27632抑制了β-GSK3和β-ERK水平,维持了β-catenin的表达,并上调了c-Myc表达,提示这些信号信号在Y27632维持ES细胞自我更新过程中具有重要作用。

也许 结论：Y-ES细胞可能处于与ES细胞及epiS细胞均不同的全能性状态。Y27632通过上调c-Myc作用参与ES细胞全能性调控网络；β-GSK3, p-ERK和β-catenin也可能参与了Y27632维持ES细胞自我更新的作用。
本研究利用microarray和RNA-seq等手段，对从国内外不同实验室来源的猪iPS细胞株进行了测定分析，获得了多维度的基因表达数据,并通过系统生物学整合分析深入探讨了猪iPS细胞多能性维持的分子机理。 利用基因芯片初步鉴定重编程完成情况，同时与已报道建系猪iPS基因表达谱比较，探讨猪iPS细胞多能性维持的调控网络。结果表明完全重编程的iPS细胞比部分重编程的iPS细胞高表达EPCAM，该基因可作为诱导猪多能性细胞的标记物。通过比较JAK-STAT,

NOTCH, TGFB1, WNT和VEGF通路相关基因在猪、人和小鼠多能性细胞中的表达情况，解析了猪多能性和自我更新维持的特性。na http://www.selleckchem.cn/products/BIBF1120.html ve状态特异的标记基因KLF2/4/5和TBX3在猪iPS中没有上调，但primed状态的标记基因OTX2和FABP7在猪iPS中上调。同时， DLK1-DIO3相关基因在猪iPS中异常表达，这能够解释目前较少有嵌合猪产生的报道。这些结果表明目前诱导和培养体系下得到的猪iPS接近于人，而区分于小鼠多能性维持状态。 利用通过RNA-seq比较了猪iPS细胞和成体细胞的基因表达谱，同时分析了不同生长因子依赖的猪iPS细胞基因表达谱的差异，这些差异基因可能为鉴定猪iPS细胞多能性维持的关键转录因子提供参考。对分析出的差异基因进行功能富集分析，从而揭示与猪多能性维持相关的重要细胞信号通路和代谢活动。分析结果表明猪iPS上调基因富集与“核糖体”，“染色质重塑”以及“细胞周期”等通路。我们的分析表明RNA剪接对于调控猪细胞的多能性具有关键作用，推算出了猪iPS细胞和成体细胞中出现的可变剪切体。我们以多能性维持核心转录因子SALL4为例说明了其可变剪切的模式，并通过RT-PCT和定量PCR进行了验证。本文最后分析了猪iPS中上调基因在猪早期胚胎发育过程中动态表达的情况。由此，建立了猪多能性维持的基因表达图谱，以上分析对于建立Na

ve状态的猪iPS细胞系具有参考意义。
胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）是从早期囊胚内细胞团分离而出的多能性细胞。这些细胞能够体外培养无限增殖，维持自我更新，并且在特定条件下可以分化成为机体几乎所有类型的细胞。因此，ES细胞被认为是研究早期胚胎发育最重要的模型。对ES细胞的多能性维持和定向分化的研究能够为胚胎发育，再生医学和器官移植等临床医学研究提供重要的理论指导。 可能 在ES细胞中，多能性和定向分化的平衡被严格调控并处于一个相对稳定的状态。而这种平衡的维持，既需要转录因子及其构成的信号调控网络的调控，也有着来自表观遗传方面的调节，而microRNA（miRNA）作为一种重要的表观调控机制在ES细胞的多能性维持和分化调节中发挥着重要的作用。 研究发现，强烈的外部刺激，例如瞬间的低pH值胁迫，低氧胁迫等，均有利于诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPS细胞）的形成。5-氨基咪唑-4-甲酰胺-呋喃核糖苷（5-Aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleotide，AICAR）是一种膜通透性的AMP-激活的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）的激活剂。它可以作为AMP的类似物，在不影响ATP，ADP和AMP水平的条件下激活能量代谢调控的关键蛋白激酶AMPK，从而抑制合成代谢，使细胞处于能量胁迫状态，影响ES细胞的多能性维持，但是其在ES细胞干性维持中的作用尚不清楚。本研究对AICAR处理及未处理的J1小鼠ES细胞进行研究，旨在揭示AICAR在ES细胞干性维持中的作用。主要的研究内容及结果如下： 1.