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2010年我国癌症发病率为235.23/10万,新发病例309.3万例,死亡率为148.81/10万,死亡病例195.7万例。我国恶性肿瘤发病第1位的是肺癌,发病率为46.08/10万,占所有恶性肿瘤19.59%,新发病例约61万,恶性肿瘤死亡第1位的也是肺癌,占所有恶性肿瘤死亡的24.87%,年死亡约49万,死亡率为37.00/10万~([1])。与其他癌症相比,由于缺乏早期发现的有效手段,大部分肺癌患者发现时已经失去了手术的机会,全身治疗是主要的治疗手段,但是治疗效果不理想。20世纪70年代以后,化学药物成为晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NS…
在过去的十几年时间里,随着我们对肺癌,特别是非小细胞肺癌(non small celllung cancer,NSCLC)的生物学基础的深入研究,相应的治疗策略也发生了翻天覆地的变化(图1)。仅从病理学类型来区分肺癌已经远远小能满足”精准癌诊断”的需求。肺癌携带高比例的体细胞突变,染色体间和染色体内的重排和基因拷贝数的改变。目前,基因水平的肺癌诊断已经成为临床实践的常规,也应是规范诊断的必须要求。
随着肿瘤基础研究和基因分子生物学技术的不断发展,以特定基因变异为治疗靶点的药物陆续涌现,掀开了恶性肿瘤个体化治疗的新篇章。从第一个非小细胞肺癌(non-small

这个 cell lung cancer,NSCLC)靶向治疗药物吉非替尼的出现,近年来用于NSCLC治疗的靶向药物如埃克替尼、克唑替尼和色瑞替尼等给患者带来了更好的生存获益和更小的治疗不良反应~([1~3]),但同时也有相当一批患者无法从靶向治疗中获益,因此筛选合适的目标治疗人群在临床决策时就显得尤为重要。
AIM: To investigate the roles and interactions of mut T homolog(MTH)-1 and hypoxia-inducible factor(HIF)-1α

in human colorectal cancer(CRC).METHODS: The expression and distribution of HIF-1α and MTH-1 proteins were detected Alisertib研究购买 in human CRC tissues by immunohistochemistry and quantitative realtime polymerase chain reaction(q RT-PCR). SW480 and HT-29 cells were exposed to normoxia or hypoxia. Protein and m RNA levels of HIF-1α and MTH-1 were analyzed by western blotting and q RT-PCR, respectively. In order to determine the effect of HIF-1α on the expression of MTH-1 and the amount of 8-oxodeoxyguanosine triphosphate(d

GTP) in SW480 and HT-29 cells, HIF-1α was silenced with small interfering RNA(si RNA). Growth studies were conducted on cells with HIF-1α inhibition using 查找协议 a xenograft tumor model. Finally, MTH-1 protein was detected by western blotting in vivo.RESULTS: High MTH-1 m RNA expression was detected in 64.2% of cases(54/84), and this was significantly correlated with tumor stage(P = 0.023) and size(P = 0.043). HIF-1α protein expression was correlated significantly with MTH-1 expression(R = 0.640; P < 0.01) in human CRC tissues. Hypoxic stress induced m RNA and protein expression of MTH-1 in SW480 and HT-29 cells. Inhibition of HIF-1α by si RNA decreased the expression of MTH-1 and led to the accumulation of 8-oxo-d GTP in SW480 and HT-29 cells. In the in vivo xenograft tumor model, expression of MTH-1 was decreased in the HIF-1α si RNA group, and the tumor volume was much smaller than that in the mock si RNA group.CONCLUSION: MTH-1 expression in CRC cells was upregulated via HIF-1α in response to hypoxic stress, emphasizing the crucial role of HIF-1α-induced MTH-1 in tumor growth.

构建Pthlh不同长度报道基因，利用双荧光素酶基因报告系统研究突变X对Pthlh转录活性的影响。 实验结果： 一、PTH1-34可治疗FGFR3功能增强的软骨发育不良 1. PTH处理可使TDII小鼠存活，但存活的TDII小鼠仍然存在骨骼发育障碍：个体短小、骨骼短缩弯曲、生长板结构紊乱、颅底软骨连接提前闭合、骨小梁减少等； 2. PTH处理促进ACH小鼠大体生长，缓解其头颅圆钝，促进其次级骨化中心出现，以及改善其成年期骨量减少； 那个 3. PTH可促进培养骨组织生长，并主要通过促进软骨生长发挥作用； 4. PTH可促进ACH小鼠肢芽Micromass软骨小结形成及基质分泌； 5. PTH对ACH软骨的影响可能通过降低FGFR3的表达及活性，促进PTHrP表达来完成。 二、FGFR3参与终板/椎间盘稳态维持 1. ACH小鼠终板自发性退变—-骨化较WT小鼠延迟； 2.全身及软骨内敲除FGFR3小鼠脊柱侧弯、骨量减少、椎体生长板及终板结构紊乱，椎体/椎间盘发退变较野生小鼠提前：骨赘生成； 3.成年期软骨细胞敲除FGFR3后小鼠椎间盘终板出现退变的早期表现：软骨基质丢失，终板出现类似异位成骨的骨样组织，成骨标记OC、软骨基质降解酶MMP13表达增加。

三、突变X基因抑制软骨发育及Pthlh转录活性 1.突变X基因抑制软骨增殖、基质分泌及降低软骨分化相关基因Col2、Col10、Aggrecan、PTHrP及FGFR3表达； 2.突变X可能通过pthlh基因启动子上的AP1结合位点抑制其转录活性。 结论： 一、PTH1-34可治疗FGFR3功能增强所致软骨发育不全及致死性发育不良 二、FGFR3对终板/椎间盘退变有一定的保护作用 三、突变X基因可能通过抑制软骨增殖分化、Pthlh转录活性及促进FGFR3表达导致软骨发育障碍
TLR2(Toll like receptor2)作为固有免疫受体家族的重要成员,参与机体免疫系统抵御体内及体外危险因素的攻击。近期研究表明TLR2还参与包括癌症、自身免疫及心脑血管等多种疾病的发生和进展。本研究发现TLR2在急性粒细胞性白血病细胞高表达。因此靶向TLR2进行药物开发对多种疾病具有很好的治疗前景。本研究主要通过构建TLR2特异性配基细胞筛选模型,从噬菌体展示肽库中筛选出与TLR2特异性结合的多肽。以多肽为载体偶联不同治疗性物质,靶向治疗急性粒细胞白血病和肿瘤。具体内容主要分为以下三部分：

1.TLR2特异性配基细胞筛选模型的构建、验证及TLR2配基多肽的筛选。 为了构建TLR2特异性配基细胞筛选模型,我们将TLR2及其辅助型受体CD14、 TLR1和TLR6的表达质粒与TLR2信号通路NF-κB启动子荧光素酶报告基因质粒共转染至人胚肾HEK293细胞,经过筛选得到稳定表达细胞株。利用这一筛选系统从噬菌体展示7肽库中通过生物淘洗-快速差异筛选配基方法(BRASIL)筛选出与TLR2特异性结合的肽段Pep2和C8,经ELISA、流式细胞术和细胞免疫荧光方法鉴定以上肽段均能特异性结合TLR2。通过荧光素酶活性实验验证肽段C8作为TLR2配基激活TLR2/TLR1信号通路；激光共聚焦实验验证肽段Pep2作为靶向TLR2的细胞穿膜肽经受体内化进入细胞。综上所述,通过以上实验证明我们成功构建了TLR2特异性配基的细胞筛选模型,并且筛选到靶向结合TLR2的多肽。

无 2.以靶向TLR2细胞穿膜肽Pep2为载体治疗急性粒细胞性白血病和淋巴瘤 细胞穿膜肽作为新的靶向药物传输载体在多种癌症治疗中具有高效低毒的优点。本研究发现TLR2在急性粒细胞性白血病(AML)和多种淋巴瘤细胞中高表达。为了验证靶向结合TLR2的细胞穿膜肽Pep2是否可以作为新的药物传输载体用于治疗AML,我们将该肽段偶联上一段促进细胞凋亡的多肽D(KLAKLAK)2,组成新的嵌合肽Pep2-D(KLAKLAK)2。实验结果表明Pep2-D(KLAKLAK)2可以靶向促进高表达TLR2(TLR2high)的AML细胞发生凋亡,而对低表达TLR2(TLR2low)的慢性粒细胞性白血病(CML)细胞则没有作用。Pep2-D(KLAKLAK)2抗白血病效应进一步在白血病临床骨髓样本和小鼠模型中得到验证。白血病小鼠骨髓切片TUNEL染色表明此嵌合多肽以TLR2依赖性方式促进AML细胞凋亡。综上所述,本研究证明TLR2可以作为治疗AML和淋巴瘤的潜在靶点,而嵌合多肽Pep2-D(KLAKLAK)2是一个有开发价值的候选药物。 selleck好不好 3.以细胞穿膜肽Pep2为载体靶向抑制TRB3的功能抑制肿瘤发生与进展 肿瘤细胞的过度增殖、侵袭和转移涉及一系列相关基因的表达和功能异常。TRB3(Tribbles Homologue3)在多种肿瘤细胞及肿瘤组织中高表达。为了探究TRB3与肿瘤发生和进展的关系,本研究发现抑制肿瘤细胞内TRB3的高表达能抑制肿瘤细胞的自噬活性。本研究深入探讨了TRB3调节自噬的分子机制,发现TRB3主要与自噬通路的“货车蛋白”P62相互作用,进而干扰P62与泛素化蛋白以及自噬标志蛋白LC3的结合,造成自噬活性被抑制,从而促进肿瘤的发生和进展。本研究进一步发现干扰肿瘤细胞内TRB3的表达显著降低肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移能力,提高荷瘤动物生存率。这些结果提示TRB3是治疗肿瘤的一个潜在靶点。利用这一机制,本研究从P62蛋白结构域中筛选出一段靶向结合TRB3的具有α螺旋结构的肽段,以细胞穿膜肽Pep2作为载体将其带入肿瘤细胞。结果显示该嵌合肽能干扰TRB3与P62的结合,激活肿瘤细胞自噬活性,在体内和体外起到抑制肿瘤生长和转移的作用。综上所述,我们的研究证明TRB3能作为连接自噬和肿瘤的桥梁,靶向阻断P62/TRB3之间相互作用可以明显抑制肿瘤发展。
多囊肾病(polycystic kidney disease,PKD)是指双侧肾脏发生多个囊肿且进行性长大而导致肾脏结构和功能损害的一种单基因遗传性疾病。根据遗传方式的不同多囊肾可以分为两种：常染色体显性遗传性多囊肾病和常染色体隐性遗传性多囊肾病。在北美大约有500,000受累ADPKD的发病率为1/500-1000,ARPKD的发病率为1/40000。B6C3Fe ala-bpck是一种常染色体隐性遗传性多囊肾(ARPKD)的动物模型。缺失的TMEM67基因与人类的MKS3以及Wistar大鼠多囊肾模型具有同源性。 目的： 在确定此模型作为ARPKD研究的可行性后,构建含目的基因TMEM67全长的载体pFlag-CMV-TMEM67.

21和194.67±8.08。II组8 min缺血打击后,从4d开始海马CA1区出现明显的DND,7d时HG为Ⅱ~Ⅲ级、ND为17.33±11.37。与sham组相比,HG明显升高(P<0.01),ND显著降低(P<0.01)。CIP+II组各时间点海马CA1区无明显DND,7d时HG为0～Ⅰ级,ND为190.67±4.16。与II组相比,HG明显降低(P<0.01),ND显著升高(P<0.05),而平均光密度没有明显变化。30min时免疫阳性细胞表达开始增多基本和即刻取材时间点持平,胞核着色也开始加深至3h、1d、2d时神经元着色明显加深(p<0.05)。II组的总面积与sham组比较无明显差异。CIP+II组的阳性标记物总面积比II组明显增高(p<0.05),胞核深染,平均光密度也明显升高(p<0.05),但阳性标记物的总面积和即刻取材时间点比较明显降低(p<0.05)。4d、7d时免疫阳性细胞表达明显减少,细胞轮廓不清,胞核着色明显变浅,与即刻取材时间点比较,免疫阳性细胞的总染色面积和平均光密度均明显降低(p
目的: 1.了解在H_2O_2氧化应激的HaCaT细胞模型中,p38于细胞凋亡中的作用以及褪黑素抗氧化和抑制凋亡的效果。

SB431542 2.探讨大面积深Ⅱ度烫伤大鼠早期应用褪黑素对烫伤皮肤残留毛囊细胞的保护作用。 3.研究大面积深Ⅱ度烫伤大鼠早期应用褪黑素对机体的抗氧化和抗炎作用。 方法: 1.HaCaT细胞分成4组,对照组、氧化组、抑制剂组、褪黑素组。除对照组外,其余3组均给予终浓度为730μmol的H_2O_2刺激12 h。抑制剂组在刺激前用p38抑制剂SB203580与细胞共培养1h;褪黑素组在刺激前用褪黑素与细胞共培养12 h。 2.(1)在刺激后12 h,检测细胞悬液MDA,GSH含量;(2)MTT法检测细胞活力;AO/EB(吖啶橙/溴化乙啶)和Hoechst33258荧光染色,caspase-3活性检测,流式细胞分析仪检测细胞凋亡情况。(3)首先用Western blot检测730μmol/L的H_2O_2刺激HaCaT细胞0(加入H_2O_2后即刻)、5、20、30、60、90min时p38蛋白含量,筛选出p38蛋白表达最强的时间点;然后在此时间点检测各组细胞p38蛋白含量。

3.雄性SD大鼠48只,分为假烫组、烫伤组、褪黑素组,每组16只大鼠。烫伤组和褪黑素组大鼠在背部造成30%TBSA深Ⅱ度烫伤创面,烫伤组和褪黑素组于伤后1 h补充平衡液抗休克治疗。并且褪黑素组于伤后1 min、8 h、16 h,以10 mg/kg的剂量给予腹腔注射褪黑素溶液。 4.每组其中6只于6、12、24 h采集烫伤区域皮肤检测丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH);利用原位缺口末端标记法(TUNEL)和半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)免疫组织化学方法检测烫伤皮肤组织残留毛囊细胞凋亡情况。 5.每组其余10只大鼠于12 h采集血清标本检测MDA、GSH等反应自由基水平的指标;用ELISA方法检测TNF-和IL-1β等炎症因子指标。于伤后12 许多 h采集烫伤皮肤组织,用TUNEL和caspase-3免疫组织化学检测残留毛囊细胞的凋亡情况。

结果: 1.(1)在刺激12 h后,氧化组的氧化损伤明显强于对照组;而褪黑素组氧化损伤轻于氧化组,但高于对照组。(2)在刺激12 h后,MTT法显示对照组、氧化组、抑制剂组和褪黑素组细胞生存率分别为(99.12±2.34)%、(80.56±4.65)%、(90.02±5.15)%、(89.10±4.22)%;AO/EB和Hoechst33258荧光染色方法均显示氧化组的细胞凋亡率明显高于抑制剂组和褪黑素组。流式细胞仪检测结果显示对照组、氧化组、抑制剂组和褪黑素组细胞凋亡比例分别为(4.20±1.25)%、(30.01±8.94)%、(15. Bcl-2 inhibitor clinical trial 56±3. 80)%、(12.66±4.22)%。(3)730μmol/L的H_2O_2刺激细胞5 min,p-p38表达开始增加,在30 min后达高峰,90 min时仍明显高于对照组。选择30 min作为刺激时间点,利用Western blot方法发现抑制剂组和褪黑素组的p-p38水平明显低于氧化组。 2.与假烫组比较,烫伤组各时间点的皮肤组织MDA显著升高,伤后12 h达2.83±0.43 nmol/mgprot高峰;GSH水平明显下降,伤后12 h水平最低为0.95±0.21 mg/gprot(P < 0.01)。在所有时间点,烫伤组细胞凋亡率都高于假烫组(P < 0.01)。TUNEL显示烫伤组伤后6 h残留毛囊凋亡细胞率增加到(20.2±3.4)%,在12 h细胞凋亡率最高达到(31.2±3.6)%。与烫伤组比较,褪黑素组MDA水平低于烫伤组,GSH水平高于烫伤组(P < 0.05);褪黑素组的残留毛囊细胞凋亡率低于烫伤组,褪黑素组在伤后6 h、12 h的细胞凋亡率分别(10.9±3.2)%、(19.1±3.7)%(P < 0.05)。caspase-3免疫组织化学显示了相似的凋亡趋势。 3.与假烫组比较,烫伤组伤后12 h血清MDA显著升高,GSH明显下降;TNF- ,IL-1β含量显著增加(P < 0.01)。与烫伤组比较,褪黑素组12 h血清MDA含量降低了34%;GSH增加了37%;TNF-下降了29%;IL-1β降低了35%(P < 0.05)。TUNEL显示烫伤组伤后12 h残留毛囊凋亡细胞率为(30.9±2.5)%,高于假烫组的(3.8±1.9)% (P < 0.01)。而褪黑素组毛囊凋亡细胞率降低为(20.2±2.

05)；而第三周LIF组与假手术组比较及与PD组比较差异具有显著统计学意义(P0.05)。 2免疫荧光方法清楚显示：除正常对照组外,其余第3周三组小鼠脑组织内均出现免疫荧光阳性的内源性神经干细胞激活表达,均主要分布在核团周围。 3半定量RT-PCR方法显示：正常组、假手术组、LIF组、PD组实验后第1周及第2周GP130mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);而第三周LIF组与假手术组比较及与PD组比较差异具有显著统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较差异也有统计学意义(P
髓样分化因子88(Myeloid Differentiation Factor88, MyD88)的经典作用是通过与TLR/IL-1R的TIR结构域相结合,引起NF-κB和丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinases, MAPKs)的活化,导致炎症因子的释放。近年的研究发现,MyD88在一些实质瘤的肿瘤细胞中表达增加,可能通过促炎症反应作用和非炎症作用促进肿瘤的进展。在本课题中,我们检测了MyD88在肝癌组织中的表达水平,分析了MyD88表达水平在肿瘤病人预后判断中的价值,利用体外实验和动物体内实验探讨了MyD88在肝癌细胞增殖和转移中的作用及其作用机制。

寻找更多 通过对110例肝癌标本的癌组织和临近的癌旁组织免疫组织化学染色发现,MyD88在肝癌中的表达量增加：通过分析MyD88和临床指标之间的关系,证实MyD88的表达量和肝癌病人的临床病理分期、复发呈正相关；通过分析MyD88和肝癌病人预后之间的关系,证实MyD88表达量高的病人,预后比较差,统计学分析证实MyD88是一个独立的影响病人预后的因素。 为了研究MyD88对肝癌细胞增殖的影响,我们进行了平板克隆和裸鼠体内成瘤实验,实验证实MyD88可以促进细胞克隆数目的增加和裸鼠移植瘤的生长。为了研究MyD88对肝癌细胞凋亡的影响,我们进行了流式细胞术和TUNEL凋亡检测实验,流式检测证实MyD88可以抑制肝癌细胞的凋亡,这一实验结果在裸鼠移植瘤和肝癌标本中得到了进一步的验证。转移是恶性肿瘤的一种重要的生物学特征,也是肿瘤病人死亡的重要原因。为了研究MyD88对肝癌细胞转移的影响,我们进行了细胞迁移、侵袭实验和裸鼠体内成瘤实验,细胞迁移和侵袭实验证实MyD88可以增加肝癌细胞的迁移和侵袭能力,裸鼠体内成瘤实验证实MyD88可以促进裸鼠肺部转移灶的形成。综上所述,MyD88可以通过影响肝癌细胞的增殖、凋亡和转移水平来促进肝癌的进展。 为了研究MyD88在肝癌生长和转移中发挥作用的机制,我们进行了Real-time PCR、ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)、NF-κB荧光素酶活性分析、凝胶电泳迁徙率改变实验(EMSA)和Western Blotting实验,证实了MyD88除了可以通过依赖TLR/IL-1R信号通路调节肿瘤进展相关基因的表达和NF-κB的活性,也可以通过不依赖TLR/IL-1R信号通路调节肿瘤进展相关基因的表达和NF-κB的活性。为了研究MyD88不依赖TLR/IL-1R调节NF-κB活性的机制,我们进行了NF-κB荧光素酶活性分析实验,并给予了LY294002(PI3K/Akt抑制剂)、U0126(Erk1/2抑制剂)或者SB203580(p38抑制剂),实验表明MyD88可以通过PI3K/AKT和p38/ERK调节NF-κB的活性。同时,Western

Blotting实验证实MyD88可以通过不依赖TLR/IL-1R通路调节AKT和p38/ERK的活性。 总之,通过临床标本的分析,我们首次阐明了MyD88在肝癌中的高表达及其与病人预后不良之间的关系。通过体内外实验，我们阐明了MyD88可以通过影响肝癌细胞的增殖、凋亡和转移水平来促进肝癌的进展。通过对机制的探讨,我们阐明了MyD88可以不通过TLR/IL-1R信号通路调节NF-κB的活性以及肿瘤转移和发展相关基因的表达。我们的研究结果可望为肝癌病人预后判断以及肝癌的生物治疗提供了新靶点。
组织或器官纤维化是许多疾病致残、致死的主要原因,严重威胁着人们的健康与生命。目前针对纤维化病变的治疗手段极为有限,处于研究中的抗纤维化化合物很多,但进入临床的十分稀少。作用于多(?)点的吡非尼酮(PFD)的上市标志着抗纤维化药物的研究取得了很大挂展。因此,作用于多靶点纤维化药物的研究成为抗纤维化药物研究的重要发展方向。

查找更多 http://www.selleckchem.cn/products/CP-690550.html 吡非尼酮作用于纤维化过程不同环节中的多个靶点,是目前唯一以纤维化适应症上市的药物,课题组前期筛选到了吡非尼酮的ne-better药氟非尼酮(AKF-PD),已经完成临床前研究。由于强的首过作用,它们的作用强度均不够理想。鉴于该类化合物具有很好的临床应用前景,以此为基础的进一步研究具有重要意义。 本课题在前期研究的基础上,以保持吡非尼酮多靶点作用特点,(?)进代谢快的缺点为目标,设计了一系列新结构的化合物,以其获得(?)学和药动学方面性质优良的先导化合物,为开发新型抗纤维化药物提供候选化合物。并通过部分化合物的药效学研究,探讨高活性、多靶点作用的化合物结构特征,为抗纤维化药物的设计提供有价值的信息,为了解纤维化疾病的病理机制进行有益探索。 本课题以吡非尼酮为先导化合物,设计合成了苯基吡啶酮类化合(?)和苄基吡啶酮两个系列共52个吡啶酮类化合物。完成了目标化合物的结构确证,采用MTT法检测了目标化合物对NIH3T3细胞增殖的抑制活性。结果表明：设计的化合物活性均高于阳性对照药物氟非尼酮,选取4个化合物进行了大鼠体内活性测试和动物急性毒性实验,其中化合物3r与2j显示了很好的成药性 本课题初步归纳了设计合成的两系列吡啶酮类化合物抗纤维化活性的构效关系。结果表明：吡啶酮5-三氟甲基取代后活性明显升高；-苄基取代活性优于1-苯基取代；1位苯基取代基通过氨烷基链连接杂环后活性显著上升；苄基系列中杂环与苯环以氨丙基链连接为好,(?)位取代活性较高；而苯基系列苯环与杂环以氨乙基链连接为佳。在苯环上为非杂环取代的化合物中,侧链长短与活性关系不明显。 本课题在前期工作的基础上系统地合成了两个系列的吡啶酮类化合物,评价了目标化合物的抗纤维化活性,得到了2个成药性较好的化合物；本课题首次研究了吡啶酮类似物的抗纤维化活性构效关系,为进一步研究具有更高抗纤维化活性的新型多靶点化合物提供了重要信息和打下一了坚实基础。
目的：通过建立闭合性脑损伤动物模型,研究脑损伤后白细胞介素1β、丝裂原活化蛋白激酶p38及血管细胞间粘附分子-1在脑组织中的不同时相表达的特点及法医学意义。方法：将75只清洁级SD大鼠随机分成正常对照组、手术对照组及损伤后0.

05或p<0.01),但是肾重与体重比值略有降低(p<0.01)。与糖尿病组(diabetesgroup)相比,糖尿病治疗组(pp2group)的体重、摄食量略有升高(p<0.01),肾重、肾重与体重的比值以及24h尿量明显下降(p<0.05或p<0.01)。(2)与正常对照组(controlgroup)相比,糖尿病组(diabetesgroup)的血糖、血清肌酐、尿素氮、甘油三酯、低密度脂蛋白和24h尿白蛋白明显升高(p<0.01)。与糖尿病组(diabetesgroup)相比,糖尿病治疗组(pp2group)的血糖、血清肌酐、尿素氮和24h尿白蛋白均明显下降(p<0.05或p<0.05或p<0.05或p<0.01);p38mapk活性在高糖刺激12h开始升高,至少持续48h以上(p<0.05或p<0.05或p<0.01)。与hg组相比,sb203580(hg+sb203580组)能够明显降低pparγ、chop蛋白质表达(p<0.01)。(2)与ng组相比,高糖培养(hg组)hk-2细胞48h的egfr磷酸化水平(活性)明显升高(p<0.01)。与hg组相比,pp2(hg+pp2组)能够明显降低egfr磷酸化水平(活性)(p<0.01)。ng组和m组之间的egfr磷酸化水平(活性)无显著差异。(3)与ng组相比,高糖培养(hg组)hk-2细胞48h的egfr磷酸化水平(活性)明显升高(p<0.01)。与hg组相比,ag1478(hg+ag1478组)能够明显降低egfr磷酸化水平(活性)(p<0.01)。与HG组相比,AG1478(HG+AG1478组)能够明显降低GRP78和CHOP蛋白质表达(P<0.05或P<0.01)。与HG组相比,EGFR抑制剂AG1478明显改善高糖对细胞活性的抑制作用(P
Wip1(Wild

所以 type p53-induced protein phosphatases,野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1)隶属于苏氨酸/丝氨酸PP2C蛋白家族,在脑胶质细胞瘤、乳腺癌、膜腺神经内分泌肿瘤等多种恶性肿瘤中均有异常表达,是一种新发现的原癌基因。研究表明Wip1基因的表达依赖于p53蛋白的活化,而其Wip1蛋白的过表达能使活化的p53蛋白去磷酸化和减少p53基因选择性突变,从而发挥其原癌基因功能。乳腺癌、脑胶质细胞瘤等恶性肿瘤中Wip1的异常表达能影响患者预后并提高肿瘤对抗癌药物的耐受性。但目前关于Wip1与宫颈癌的相关研究较少,特别在宫颈癌的辐射敏感性方面还未有报道。基于现状,本研究以Wip1为切入点,首次探讨Wip1对宫颈癌He

La细胞生物学行为和辐射敏感性的影响,并阐明相关分子机制,以期为Wip1作为宫颈癌的放疗增敏靶点提供实验基础和理论支持,也为宫颈癌患者的个性化治疗提供新的治疗靶点。目的:阐述干预Wip1基因在增强宫颈癌细胞系He La细胞的辐射抗性过程中的作用及其机制,并探讨干预Wip1在宫颈癌治疗过程中的作用方法:(1)本研究采用的照射条件为:GC3000 Elan辐射器(MDS Nordion,加拿大),单次受照剂量2~3 Gyγ-射线。(2)应用Western bolt法检测不同宫颈癌细胞株中Wip1表达水平;(2)MTT法检测不同细胞株细胞增殖活性;(3)分别构建pc DNA3.1-Wip1和si RNA-Wip1重组质粒,将其转染入人宫颈癌细胞系He BI 2536分子重量 La细胞,构建空载体细胞、si

Wip1细胞和si Wip1+过表达Wip1细胞;(4)实时定量PCR法检测稳定转染细胞Wip1 m RNA表达量;(5)Western blot法检测稳定转染细胞Wip1蛋白表达量;(6)平板克隆形成实验检测He 许多 La细胞的放射敏感性;(7)流式细胞仪检测He La细胞凋亡水平;(8)彗星实验检测细胞在γ线照射后不同时间He La细胞的DNA片段分布,观察He La细胞的DNA损伤、修复情况;(9)Western blot法检测He La细胞p38,p-p38,p53和p-p53表达水平;(10)采用p38MAPK抑制剂SB203580预处理He La细胞,评价p38MAPK信号通路与He La辐射敏感性的关系;(11)应用Image J软件对蛋白电泳条带做灰度分析;(12)Student’s t-test用于分析数据,p0.05)。3、沉默Wip1表达上调He La的辐射敏感性si Wip1细胞于转染后48 h起增殖速度显著降低并呈下降趋势,其72 h、96h细胞数目显著低于空载体细胞和si Wip1+过表达Wip1细胞,差距有统计学意义(P0.05);克隆形成数目和半径结果与之类似;细胞凋亡水平与之相反。联合γ-射线辐射时,si Wip1细胞克隆数目和克隆半径显著低于空载体细胞和si Wip1+过表达Wip1细胞,差距有统计学意义(P0.05);细胞凋亡水平与之相反。4、沉默Wip1表达下调辐射条件下He La细胞的DNA损伤修复与空载体细胞和si Wip1+过表达Wip1细胞相比,si Wip1细胞DNA损伤程度较重,表现在彗星头部DNA百分比明显减少,而彗星尾部的小片段破损DNA百分比明显升高,差距有统计学意义(P0.05)。5、Wip1与p38MAPK信号通路中蛋白表达相对于空载体细胞和si Wip1+过表达Wip1细胞,si Wip1细胞p-p38、p53和p-p53的表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P0.05)。而三组细胞中p38表达水平没有显著差别(P>0.05)。当预处理SB203580时,si Wip1+SB20358细胞相对于si Wip1细胞p-p38、p53和p-p53的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P0.05),三组细胞p38水平没有显著差别(P>0.05)。6、SB203580逆转Wip1提高了细胞的辐射敏感性当预处理SB203580时,si Wip1+SB203580细胞和空载体细胞的克隆数目、克隆半径和凋亡水平相近,差异没有统计学意义(P>0.05);当联合γ-射线辐射时,si Wip1+SB203580细胞和空载体细胞的克隆数目、克隆半径和凋亡水平同样相近(P>0.05),表明SB203580逆转沉默Wip1能提高细胞的辐射敏感性。结论:1.Wip1在宫颈癌He La细胞的放疗敏感性中发挥重要的调节作用,沉默Wip1表达可以使γ-射线辐射后He La细胞细胞增殖、克隆形成和抗凋亡能力降低;2.Wip1能增强γ-射线辐射所引起的He La细胞DNA损伤的修复,从而增强其放疗耐受性;3.

05),且对其中的五个维度积分值的改善优于尼莫地平(P＜0.05),但其联合尼莫地平治疗对八个维度的积分均能明显改善(P＜0.05),并且均优于尼莫地平(P＜0.05)。降压胶囊及其联合尼莫地平治疗后均能明显降低患者尿微量白蛋白及β_2微球蛋白的水平(P＜0.05);联合用药后降低患者尿微量白蛋白作用又明显优于单纯中药或西药组。降压胶囊及其联合尼地平两组均能改善EISH患者血浆(清)NO、ET-1、TXB_2、6-Keto-PGF_(1α)、hs-CRP水平,均优于治疗前(P＜0.05,P＜0.01);联合治疗降低血浆TXB_2水平作用又优于单纯中药或单纯西药组(P＜0.05)。 (3)降压胶囊及其联合尼莫地平治疗8周后,均能明显降低SHR模型收缩期血压值(P＜0.05,P＜0.01),而治疗4周后,仅降压胶囊大剂量联合尼莫地平有明显的降压效应(P＜0.05)。降压胶囊(大剂量组)及其联合尼莫地平治疗后,能明显降低SHR左室重量及其左室重量指数(P＜0.05);同时,能明显降低SHR血浆ET、AngⅡ水平,且升高SHR血浆CGRP水平(P＜0.05),尤其降低ET及升高CGRP水平作用均优于西药尼莫地平(P＜0.05)。降压胶囊及其联合尼莫地平各剂量组均能够使SHR心肌AT1受体蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01);但降压胶囊联合尼莫地平治疗后,这种表达的降低更为显著,既优于单纯中药组又优于单纯西药组(P＜0.05,P＜0.01)。

结论降压胶囊对EISH有较好的临床疗效,改善细胞内皮功能、抗炎及降低心肌AT1受体蛋白及mRNA表达等可能是其部分作用机制。降压胶囊联合尼莫地平的病证结合治疗模式,对EISH的治疗有明显的协同效应,值得推广应用。
肝纤维化是指由多种慢性疾病引起的肝脏持续创伤修复反应而导致的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积。严重的肝纤维化导致肝硬化并引起肝功能衰竭,门静脉高压甚至需要肝脏移植治疗。长期以来广泛持续的肝纤维化被认为是不可逆转的,而越来越多的研究证据表明,肝纤维化甚至肝硬化都有逆转的可能。对肝纤维化细胞及分子机制的研究表明,多种细胞参与了肝纤维化的形成,其中激活的肝星状细胞(hepatic 那个 stellate cells,HSCs)被认为是促进ECM过度沉积的主要细胞,而多种细胞因子参与了肝星状细胞的激活,其中转化生长因子β_1(transforming growth factor,TGF-β_1)被认为是最关键的因素之一。其可激活HSCs和调节ECM的合成和降解平衡。以干扰HSCs中TGF-β_1及其细胞信号转导通路为靶点的抗肝纤维化治疗已成为当今研究的热点之一。而在肝纤维化及其胶原合成过程中,除TGF-β_1及其细胞信号转导通路外,尚有其他信号途径参与。前列腺素E_2(prostaglandin

E_2,PGE_2)、PGE受体-2(PGE receptor-2,EP_2)及环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)所构成的信号转导途径,即PGE_2-EP_2-cAMP通路在多种免疫性疾病中发挥重要作用,越来越多的研究表明PGE_2-EP_2-cAMP信号转导途径参与了肝纤维化的调节,通过调节其信号转导可能为肝纤维化的治疗提高新的靶点。尽管对抗肝纤维化药物的研究不断深入,而目前结果仍不令人满意。 黄芪(Radix Astragali)作为一种宝贵的中药具有悠久的应用历史,黄芪总皂苷为从荚膜黄芪(Astragalus

无 membranaceus)根中提取的有效部位,多年来大量的研究表明黄芪总皂苷具有抗炎、衰老、抗氧化、抗心肌损伤及免疫调节的作用且无明显的毒副作用。本课题组以往的研究表明,黄芪总皂苷可显著的抑制四氯化碳引起的肝脏损伤及肝纤维化的形成。黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,ASG-Ⅳ)是一种环波罗烷型三萜糖苷,从中草药荚膜黄芪中提取纯化而得,目前对AGS-Ⅳ对免疫性肝纤维化的影响尚不清楚。基于以往对黄芪在保护肝脏中的应用及本课题组对黄芪总皂苷抗肝纤维化作用的研究基础,本研究探讨了对单体AGS-Ⅳ抗猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化的体内作用,从病理学及血清学角度对其抗肝纤维化作用进行分析,并观察了AGS-Ⅳ对大鼠血清TGF-β_1水平及肝脏组织的影响。体外研究观察了AGS-Ⅳ对HSCs增殖、凋亡及胶原合成的影响及对TGF-β_1/Smads信号转导的调节。在肝纤维化的形成及TGF-β_1刺激的HSCs胶原合成中,PGE_2-EP_2-cAMP信号通路与TGF-β_1刺激HSCs胶原合成的有着怎样的关系呢?而AGS-Ⅳ是否会通过对PGE_2-EP_2-cAMP信号通路的影响而发挥其抗肝纤维化作用呢?为此,本实验通过对猪血清诱导大鼠肝纤维化形成过程中PGE_2水平及EP_2表达的改变进行观察,并使用选择性环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂降低PGE_2水平,分析EP_2表达的改变,深入的观察了PGE_2-EP_2-cAMP在猪血清诱导大鼠肝纤维化形成过程的作用;在体外观察了PGE_2-EP_2-cAMP对TGF-β_1刺激HSCs胶原合成中的影响,并从PGE_2-EP_2-cAMP信号通路角度研究了AGS-Ⅳ抗肝纤维化的机制。 目的 探讨AGS-Ⅳ抗猪血清诱导大鼠免疫性肝纤维化作用;探讨AGS-Ⅳ对体外培养HSCs增殖、凋亡及胶原合成的影响及对Smad3和Smad7蛋白表达的影响;探讨PGE_2-EP_2-cAMP信号通路在肝纤维化形成中的作用及AGS-Ⅳ对其影响。 selleck怎么样 方法 猪血清连续8周腹腔注射(0.5 ml,每周2次)诱导大鼠免疫性肝纤维化,同时给予AGS-Ⅳ(2.0,4.0 mg·kg~(-1))灌胃治疗。检测大鼠肝脏组织病理及血清学指标改变,ELISA法检测大鼠血清TGF-β_1水平,免疫组化法检测大鼠肝脏组织TGF-β_1表达。[~3H]标记胸腺嘧啶核苷酸([~3H]-thymidine,[~3H]-TdR)掺入法检测血小板源性生长因子(PDGF-BB)刺激的HSCs增殖,流式细胞仪分析HSCs凋亡。TGF-β_1刺激的HSCs胶原合成采用[~3H】标记脯氨酸([~3H]-proline,[~3H]-Pro)掺入法检测,westernblot法检测Smads蛋白表达。选择性COX-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)15mg·kg~(-1)灌胃,以检测POE_2及EP_2蛋白的变化及其在大鼠肝纤维化形成中的作用。检测PGE_2(5,500nM)和EP_2 agonist ONO-AE1-259-01(1,100nM)对TGF-β_1诱导HSCs胶原合成的影响及细胞内cAMP水平的改变;分析AGS-Ⅳ对HSCs中EP_2表达及胞内cAMP水平的影响。 结果 1.AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化的保护作用 AGS-Ⅳ两个剂量2.0 mg·kg~(-1)和4.

06±1.28 vs-12.43±1.33,p<-10.06)患者总生存率较差(p=0.003;HR=0.42,95%CI:0.22-0.87)。按肿瘤分化程度将48例胃癌患者肿瘤组织标本分为分化差、分化良好两组,各种不同分化的癌组织均显示不同程度的GnRHR和EGFR阳性免疫反应,GnRHR表达阳性23例(47.92%),EGFR表达阳性26例(54.16%),原位定量显示GnRHR的表达分化良好20例、分化差3例,随着组织分化程度增高而增高,EGFR的表达分化良好13例、分化差13例,随着组织分化程度增高而降低(P
研究背景及意义食管癌是世界常见消化道恶性肿瘤之一,其位于全球肿瘤发病率的第8位,死亡率的第6位,发病具有明显的地域性。我国是食管癌高发国家之一,食管癌的发病率及死亡率均居世界首位,每年死于食管癌的病人约有21万。食管癌的病理分型主要分为食管鳞癌及食管腺癌,其中食管鳞癌约占我国食管癌的90%。作为一种高度侵袭性恶性肿瘤,食管鳞癌易于发生转移,其转移方式主要为淋巴转移,而食管鳞癌的淋巴结转移同时也是影响患者预后的最重要因素。解剖学观点认为,由于食管的独特解剖特点,即在食管黏膜下层含有丰富的淋巴结管系统,因此食管鳞癌较易经此发生淋巴结转移。但随着对肿瘤研究的逐步深入,单纯的解剖学特点并不能完全解释食管鳞癌为何易于淋巴结转移。趋化作用是指细胞沿化学刺激因子浓度梯度的定向移动,其实现需要通过趋化因子与细胞表面的趋化因子受体结合,激活细胞内信号通路,调控下游基因表达而诱导细胞的定向迁移。趋化作用广泛的参与淋巴归巢及炎症反应等一系列生理活动。而近来的研究证实,趋化作用参与了肿瘤的靶器官定向转移过程：肿瘤细胞借助自身表面的趋化因子受体通过趋化作用定向转移至富集相应趋化因子的靶器官。CCR7作为趋化因子受体家族一员,主要表达于成熟淋巴细胞及树突状细胞,其相应的特异性配体CCL19/21广泛表达于次级淋巴系统,二者参与介导了淋巴细胞的归巢行为。目前研究发现CCR7异常表达于乳腺癌、前列腺癌、肺癌、食管鳞癌等多种肿瘤细胞,并且与肿瘤的淋巴结转移密切相关。以上提示了CCL19/21-CCR7在促进肿瘤淋巴结特异性转移方面可能发挥着重要作用。黏蛋白1(Mucin

和 1,MUC1)是一类相对高分子量的跨膜糖蛋白,其分子由核心肽与糖链组成,主要表达于上皮或内皮细胞,研究表明MUC1在上皮细胞更新分化、维持上皮完整性方面起着重要作用。MUC1作为一种异二聚体,包含MUC1-N和MUC1-C两个亚基,其中MUC1-N位于胞外,含有多段氨基酸重复序列,并伴有广泛的糖基化,其借助于MUC1-C跨膜亚基而附着于细胞。近来的研究发现MUC1在多种肿瘤中表达上调,参与肿瘤的发生发展过程,且多项基础研究证实MUC1作为一种原癌基因可以通过多种途径促进肿瘤细胞的恶性生物学行为。我们先前的研究工作证实CCR7及MUC1在食管鳞癌中均存在表达上调,并且与患者的淋巴结转移、复发及预后不良密切相关,提示CCR7及MUC1可能参与促进食管鳞癌淋巴结转移过程。尽管多项基础研究已经部分揭示了CCR7诱导肿瘤淋巴结转移的机制,但主要局限于CCR7本身的生物学作用及其所影响的下游信号通路；目前对CCR7所调控的在肿瘤侵袭性生物学行为中起关键作用的下游分子所知甚少,而MUC1在CCR7所介导的食管鳞癌淋巴结转移过程中的作用更是未见有相关报道。在本研究中,拟通过检测食管鳞癌组织中CCR7与MUC1的表达情况,分析二者在食管鳞癌中的相关性及其与淋巴结转移、区域淋巴结转移性复发及预后的关系；以此为基础体外验证MUC1在CCR7所诱导的食管鳞癌侵袭性生物学行为中的作用,从而判定MUC1是否为CCR7所诱导的食管鳞癌淋巴结转移过程中所调控的关键下游分子,并进一步探索其具体分子机制,以期为食管鳞癌的淋巴结转移分子机制提供新的补充,并为针对食管鳞癌淋巴结转移的靶向治疗提供理论基础。第一部分CCR7与MUC1在食管鳞癌中的表达及其临床病理意义目的：明确CCR7与MUC1在食管鳞癌组织中的表达情况,分析二者相关性及其临床病理意义。方法：对2006年1月～2009年1月间,山东大学附属省立医院胸外科经手术治疗的胸中段食管鳞癌临床资料完整的153例患者进行回顾性研究,所有患者均术前病理诊断为食管鳞癌,手术均完全切除肿瘤并进行胸腹二野淋巴结清扫,术后无严重并发症。通过免疫组化方法检测鳞癌组织标本中CCR7及MUC1的表达,染色结果根据染色面积及染色强度采用免疫积分法进行评判,结合临床资料,利用SPSS

很少 时间 19.0建立数据库。采用χ2检验判断CCR7/MUC1与临床病理特征的关系、Kaplan-meier法进行生存分析、Log-rank检验判断生存差异性、Spearman相关系数判定CCR7与MUC1在食管鳞癌组织中的相关性。结果：在153例食管鳞癌患者病理组织中,88例判定为CCR7表达阳性,97例判定为MUC1表达阳性,CCR7与MUC1的表达均与食管鳞癌患者的淋巴结转移呈正相关(P<0.01,<0.001)。而与年龄、性别、肿瘤大小、分化、浸润深度等无明显关系。生存分析显示CCR7与MUC1的表达均与患者术后3年内复发(P<0.01,P<0.001)及预后不良(P<0.01,P<0.01)相关。Spearman分析显示CCR7与MUC1在食管鳞癌组织中的表达呈正相关(P
胆管癌(Cholangiocarcinoma, CCA)起源于胆管上皮细胞,是肝胆系统中除肝癌以外最为常见的恶性肿瘤。根据解剖位置的不同胆管癌可分为肝内胆管癌(intrahepatic CCA, IHCC)..肝门部胆管癌(perihilar CCA,PHCC)及远端胆管癌(distal CCA, DCC).

P38 MAPK信号传导通路是MAPK通路的分支之一,介导了应激、炎性细胞因子、细菌产物等多种刺激引起的细胞反应,对细胞周期调控具有重要作用.但对不同的卵巢癌细胞系,或者不同的刺激,P38通路的作用不完全相同,甚至可能相反,提示对P38通路的功能仍需进一步的研究,他可能是肿瘤治疗的新靶点.本文就P38 MAPK信号传导通路与卵巢癌关系作一综述。
转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)受体Ⅲ,又称为β蛋白聚糖(betaglycan),是一种膜锚定蛋白。TGF-β受体Ⅲ是表达最为丰富的TGF-β受体,曾被认为是TGF-β超家族(包括TGF-β、激活素和抑制素等)的辅助受体。后来研究表明,它在介导和调节TGF-β的信号转导中具有非常重要的、不可替代的作用。它通过与TGF-β形成复合体来介导对靶细胞的作用。在没有TGF配体的情况下,TGF-β受体Ⅲ可以激活p38信号,表明这一受体可能与不依赖TGF-β的信号通路相互作用。TGFβ受体Ⅲ还可以结合并调节抑制素的信号转导。TGFβ受体Ⅲ与抑制素A结合,形成一个稳定的高亲和复合物。体外研究表明,TGFβ受体III还结合抑制素B和强化抑制素与Ⅱ型激活素受体的关系。有关报道显示TGFβ受体Ⅲ在卵巢癌中具有肿瘤抑制的作用。研究表明,在上皮源性卵巢癌中,TGFβ受体Ⅲ

而且 mRNA和蛋白质表达降低或丢失,丢失的程度与肿瘤分级相关。有很多因素可以影响并调节该受体的表达,如雌激素、卵泡刺激素(FSH)、TGF-β1等,深入开展相关机制的研究,对于癌症的治疗和预防将会起到一定的推动作用。
Angelicae Sinensis Radix (ASR) is the root of Angelica sinensis which is a fragrant and perennial herb native to China, Japan, and Korea. In traditional Chinese medicine (TCM), the plant is useful for replenishing and invigorating blood, relieving pain, and Afatinib solubility dmso moistening the intestines, resulting in its application for the treatment of menstrual

disorders, and as an emollient and laxative for chronic constipation of the aged and debilitated. An in-depth review of the literature brings to light a great number of chemical constituents that have been isolated from ASR as well as both preclinical (in vivo and in vitro) and clinical studies, which over the years, have sought

to investigate the medicinal relevance of some of these phytoconstituents and/or extract(s) prepared from ASR. The purpose of this review is therefore to present some major pharmacological and pharmacokinetic research findings on some selected phytoconstituents of ASR with emphasis on the current trends in terms of research techniques or design. This review would also provide a wealth of information for users/practitioners of TCM regarding the use of ASR or its products for maximum 也许 efficiency and minimal toxicity or side effects.
子痫前期是妊娠期特有疾病,目前其病因及发病机制尚未明确。本研究通过检测子痫前期患者胎盘组织中p38MAPK及COX-2的表达及其关系,探讨它们在子痫前期的病理生理过程中,特别是胎盘血管炎症反应中发挥的作用。1资料与方法1.1研究对象
目的探讨P38信号通路在星形胶质细胞氧糖剥夺,复氧后水通道蛋白4表达及细胞水肿形成中发挥的作用。方法原代培养的星形胶质细胞分为正常组,模型组和P38抑制剂组。模型组:细胞接受5 h氧糖剥夺/复氧处理;P38抑制剂组:细胞在5 h氧糖剥夺后的复氧过程中加入P38抑制剂(SB203580,10μmol/L)处理。在5 h氧糖剥夺/复氧后的不同时间点,用RT-PCR及Westem blotting法测定P38、磷酸化P38及水通道蛋白4(AQP4)的表达变化,光镜观察细胞形态变化,乳酸脱氢酶测定反应细胞损伤程度。结果与正常组相比,星形胶质细胞在5 h氧糖剥夺/复氧后,其磷酸化P38的水平明显上升,并在复氧lh时达到峰值(P<0.

05）。 （4）JAK2阻断下FasL诱导细胞凋亡率变化 对于悬浮培养的结直肠癌细胞CRC29，JAK2特异性抑制AZD1480和CEP33779阻断JAK2活化，2h后在培养体系中加入杀伤剂量（20ng/ml）的FasL，作用2天后检测CRC细胞凋亡。AZD1480和CEP33779两组中CRC29细胞凋亡率分别为33.52%、38.76%，AZD1480预先抑制JAK2活化后FasL诱导CRC29细胞凋亡增至41.20%、45.19%，CEP33779预先抑制JAK2活化后FasL诱导CRC29细胞凋亡增至62.34%、62.65%。 （5）JAK2抑制后与EMT相关的蛋白表达及转录因子水平发生变化 ①CRC29细胞系在悬浮培养条件下，与IL-6刺激的CRC29细胞系相比，受到JAK2抑制的CRC29细胞系Caveolin-1表达减低，E-cadherin表达升高，共聚焦显微镜下可见到实验组细胞－细胞连接处Caveolin-1荧光信号减弱，E-cadherin荧光信号明显增强。②CRC29细胞系在悬浮培养条件下，与IL-6刺激的CRC29细胞系相比，受到JAK2抑制的CRC29细胞系HIF-1、ZEB-1、FABP、Snail-1、等基因mRNA表达降低，其中ZEB-2、Snail-2和HIF-2变化最为明显，vimentin表达增加。

3.特异性阻断JAK2对CRC细胞CD95表型的影响 （1）FasL能够刺激CRC细胞分泌细胞因子变化 FasL作用24h后CRC细胞分泌IL-8、IL-15R alpha水平升高，而预先加入CEP33779抑制JAK2活化的CRC细胞分泌IL-8水平进一步升高。 为什么 （2）转染CD95-YFP细胞株对FasL及JAK2阻断的反应 对成功转染了CD95-YFP质粒并稳定表达CD95-YFP的结直肠癌细胞系CRC29，分别用FasL、CEP33779、CEP33779预处理1h而后FasL（CEP33779→FasL），作用1h后，给予固定，随后通过荧光显微镜观察细胞膜上带有黄色荧光信号的CD95的表型变化，即是否聚集成为活性形式，对照组以等浓度的DMSO作用于培养体系，结果发现在JAK2阻断1h后，细胞膜表面荧光强度明显高于对照组，而CEP33779→FasL处理组CRC细胞表面CD95表达明显耗减。

BLU9931价格 结论 1.对多个结直肠癌数据库的生存曲线荟萃分析得知，结直肠癌组织中CD95和JAK2高表达，患者的生存期较短。 2.结直肠癌数据库中CD95与JAK2在表达、功能相关通路等方面的相关性分析表明，CD95与JAK2在结直肠癌组织中的高度相关性，主要体现在肿瘤的免疫反应、炎症反应、JAK2/STAT3信号通路、上皮-间质转化（EMT）几个方面。 3.体外培养的结直肠癌细胞在增殖过程中，JAK2/STAT3处于较低水平的活化状态，特异性阻断JAK2/STAT3通路能够降低或完全抑制肿瘤细胞的克隆形成能力，提示JAK2在肿瘤细胞增殖方面具有关键作用；特异性阻断JAK2/STAT3通路在一定程度上抑制了肿瘤EMT，从而对肿瘤细胞的迁移可能产生一定的抑制作用；而JAK2/STAT3的过度活化则促进肿瘤细胞增殖。JAK2抑制不能诱导CRC细胞凋亡，而FasL可诱导肿瘤细胞凋亡增多。 4.通过转染CD95-YFP报告基因并使其稳定表达CD95的结直肠癌细胞系CRC29（CRC29CD95-YFP），抑制JAK2/STAT3通路有助于肿瘤细胞表面CD95单体寡聚化形成转变成活性形式，为介导细胞凋亡提供细胞表面结构条件，从而证明JAK2对CRC细胞膜上CD95具有一定的稳定作用。
猪传染性胃肠炎(Transmissible Epigenetics抑制剂 gastroenteritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis

virus,TGEV)感染引起的以仔猪严重腹泻、脱水、呕吐为主要临床特征的高度接触性传染病。该病最早于1946年在美国确认,目前已在多个国家广泛流行,给养猪业造成了严重的经济损失。早期的报道显示,TGEV作为一种肠道冠状病毒,能够诱导高水平的I型干扰素的产生,同时也引起肠道组织的炎性损伤,钠、钾离子严重失衡,进而导致仔猪严重腹泻脱水致死。这提示我们该病毒与宿主天然免疫应答密切相关,炎症反应在其致病性方面扮演着十分重要的角色。然而,目前对该病毒如何介导天然免疫应答引起宿主细胞的信号转导机制知之甚少。因此,本研究利用蛋白质组学技术分析了TGEV与宿主细胞蛋白之间的互作,并且对TGEV感染诱导炎症反应的细胞信号转导机制进行了研究。具体研究内容如下:1.TGEV感染PK-15细胞的蛋白质组学研究为了了解TGEV感染对宿主细胞蛋白表达的影响,利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation,i TRAQ)技术,配合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS),对TGEV感染PK-15细胞的蛋白表达情况进行了检测和分析。共鉴定出162个差异表达的蛋白,包括60个表达上调的蛋白和102个表达下调的蛋白。随后利用生物信息学技术对差异表达蛋白的亚细胞定位、生物学进程聚类进行了分析,并绘制了互作网络图,发现差异表达的蛋白与细胞周期、细胞的生长与分化及天然免疫反应等多种生物进程相关。并且上调倍数位居前列的9个蛋白均与I型干扰素信号通路(interferon signaling pathway),尤其是信号转导子和转录激活子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)以及8种重要的干扰素刺激基因(interferon stimulated genes,ISGs)密切相关。为了验证蛋白质组学结果的可靠性,进一步通过Western blot或Real-time RT-PCR方法对STAT1和8个ISG的表达进行了检测,结果与蛋白质组学结果一致。为了确定TGEV感染是否激活JAK-STAT1信号通路,对TGEV感染后STAT1的磷酸化情况和亚细胞定位进行了检测,结果 TGEV感染PK-15细胞后能够诱导STAT1的磷酸化和转位入核,说明TGEV感染能激活JAK-STAT1信号通路并诱导ISGs的产生。2.

正常对照组小鼠肺泡结构基本正常,肺组织结构完整,肺泡腔清晰,肺泡间隔无增厚。LPS组肉眼可见肺脏表面淤血、出血点和水肿明显,光镜下肺泡结构破坏严重,肺泡萎陷、肺泡间隔增厚,炎细胞浸润。LPS+PCA组组织损伤程度比LPS组显著减轻,且与PCA给药浓度有关,尤以PCA高浓度组较为明显肺间质和肺泡腔内渗出物及炎细胞浸润较LPS组明显减少;LPS+SB203580、LPS+Dex、LPS+PCA+SB203580组也可见组织损伤较LPS组减轻,大部分肺泡结构清晰,肺泡间隔略增厚。2.PCA可使小鼠BALF及血清中TNF-α含量与模型组相比出现明显下降,并随PCA剂量的增多而降低,PCA高剂量组差异显著(P0.05)。阻断剂SB203580组、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,BALF及血清中含量明显低于模型组(P<0.05)。3.PCA可使小鼠BALF及血清中IL-1β含量与模型组相比出现明显下降,并随PCA剂量的增多而降低,PCA高剂量组差异显著(P0.05)。阻断剂SB203580组(P<0.05)、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,BALF及血清中含量明显低于模型组(P<0.01)。4.PCA可使小鼠BALF中蛋白浓度与模型组相比出现明显下降,并随PCA剂量的增多而降低,PCA高剂量组差异显著(P0.05)。阻断剂SB203580组(P<0.05)、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,血清中含量明显低于模型组(P<0.01)。6.LPS模型组各组肺组织中p-ATF2蛋白的表达强度较对照组显著增高(P<0.01)；PCA治疗组中p-ATF2蛋白表达量较LPS模型组相比显著降低(P<0.01),并随浓度的增高而降低。阻断剂SB203580组、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,肺组织中p-ATF2含量明显低于模型组(P<0.01)7.LPS模型组各组肺组织中TLR4蛋白的表达强度较对照组显著增高(P<0.01)；PCA治疗组中TLR4蛋白表达量较LPS模型组相比显著降低(P<0.01),并随浓度的增高而降低。阻断剂SB203580组、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,肺组织中TLR4含量明显低于模型组(P<0.01)。结论1.PCA对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠有一定的保护作用。2.PCA对脂多糖所致急性肺损伤的保护作用与PCA浓度成正相关。3.PCA可通过减少炎症介质的产生而对受损小鼠发挥保护作用。4.PCA对急性肺损伤小鼠的保护作用与抑制P38MAPK信号通路有关。5.PCA对急性肺损伤小鼠的保护作用与抑制TLR4信号通路有关。6.当同时应用PCA及SB203580后PCA对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用减弱,进一步证明PCA对急性肺损伤小鼠的保护作用与其抑制P38MAPK信号通路有关。
[目的]研究高糖状态下,体外培养的小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1)的细胞增殖、分化、细胞外矿物质沉积的情况以及葡萄糖浓度对P38MAPK信号通路的影响,进一步探讨P38MAPK特异性抑制剂SB203580对高糖所导致的成骨细胞活性改变的影响,以阐明P38MAPK信号通路在高糖状态下成骨细胞活性中的作用。[方法]将培养的小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1)分为8组：1)正常对照组5.5mM葡萄糖；2)高糖组A：15.5mM葡萄糖；3)高糖组B：25.5mM葡萄糖；4)高糖组C：35.5mM葡萄糖；5)SB203580组A：5.5mM葡萄糖+10gM

更多 Selleckchem Lumacaftor SB203580；6)SB203580组B：15.5mM葡萄糖+10μMSB203580;7)SB203580组C：25.5mM葡萄糖+10μMSB203580；8)SB203580组D：35.5mM葡萄糖+10μM NLG919 SB203580。细胞接种后,待细胞生长至80%密度后,同步化24小时后,分别用以下各因素处理细胞并继续培养。1、甲基噻唑基四唑(MTT)法检测3、7、14d

MC3T3-El细胞增殖情况；2、碱性磷酸酶(ATP)试剂盒检测3d、7d细胞裂解液中ALP活性；3、茜素红染色观察细胞细胞矿化结节的大小和形态；4、荧光实时定量PCR检测核心结合因子1(core binding factor-1, Cbfal)和骨钙蛋白基因(osteocalcin, OCN)分别在培养3d、7d的表达。收集细胞,提取总RNA,逆转录cDNA,采用实时荧光定量PCR法检测各组成骨细胞中成骨相关基因的表达。5、Western blot检测P38MAPK和磷酸化P38MAPK在3d、7d的表达情况。[结果]1、与低浓度葡萄糖相比,高糖组(≥15.5mM)可抑制MC3T3-E1细胞的增殖。且经过SB203580干预后,细胞增殖水平继续下降,差异具有统计学意义。(P<0.05)。2、与低浓度葡萄糖相比,高糖组(≥15.5mM)可抑制MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、细胞矿化和成骨相关基因的表达。SB203580干预后,ALP活性、细胞矿化及成骨相关基因(Cbfal和OCN)表达水平较未干预组升高。3、与低浓度葡萄糖相比,高糖组(≥15.5mmM)对P38MAPK,总蛋白分泌无明显的作用,但能够促进P-P38MAPK的表达且成剂量相关关系,经过SB203580干预后,可明显抑制P38MAPK磷酸化。(P<0.