建立小鼠细粒棘球蚴感染模型，实验组用原头蚴感染BALB/c小鼠，对照组小鼠腹腔注射同体积的PBS；分别于第1、3、5、7、9、12天处死后，用流式细胞仪检测脾细胞中T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+T细胞比值及CD4+CD25+T细胞的含量及NK细胞的活性受体NKG2D的表达；qRT-PCR法检测Foxp3mRNA和TGF-β1mRNA的相对表达量；Yac-1作为靶细胞与小鼠脾细胞共培养，用LDH法检测小鼠NK细胞对Yac-1的裂解率，观察脾细胞的杀伤活性。 2.建立小鼠细粒棘球蚴感染模型，并用抑制剂特异性阻断TGF-β1受体，于第9天处死后用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+T细胞比值及CD4+CD25+T细胞的含量及NK细胞的活性受体NKG2D的表达；用LDH法检测脾细胞的杀伤活性；Western

Bolting检测细粒棘球蚴对TGF-β/Smad的信号通路的影响。 结果 1.在细粒棘球蚴感染早期，CD4+CD25+Foxp3+T比值增高：与对照组相比小鼠CD4+/CD8+T细胞比值逐渐下降；随着感染时间的延长，CD4+CD25+T细胞数量呈逐渐增高；Foxp3在基因水平上的表达呈增高的趋势；与对照组相比，除感染后第1天无统计学差异外，其他的均有统计学差异（P<0.05），并随着感染时间的延长而增高；qRT-PCR法检测到TGF-β1在mRNA水平的表达量也高于对照组（P<0.05）；随着时间的延长NK细胞的活性受体NKG2D的表达量呈下降的趋势，与对照组比较，感染后1、3、9、12天NKG2D的表达量都有统计学意义（P<0.05）。随着时间的延长NK细胞数量呈下降的趋势，与感染前比较，感染后第1、3、9、12天NK数量差异都有统计学意义（P
随着机体的老化,心脏也同时发生和老化相关的病理变化,进而引起相关疾病的发生。目前,和老化相关的机制学说有数十种,而其中,以晚期糖基化终产物(AGEs)为基础的糖基化学说,备受关注。在心脏老化的过程中,心肌成纤维细胞和心肌细胞也逐渐老化,同时心肌胶原含量逐渐增加,在心肌间质及血管周围异常聚积,发生心肌纤维化。心肌纤维化不仅是冠心病、高血压和心力衰竭等疾病心室重构发生、发展的重要机制之一,更是心肌老化的重要特征。心肌的纤维化可引起心肌结构紊乱,心肌顺应性降低,僵硬度增加,并促使心律失常,顽固性心衰的发病率升高。因此,目前对心肌纤维化,尤其是AGEs诱导的老化过程中心肌纤维化相关机制的研究,显得格外重要。

Angiogenesis化学 他汀类药物是临床上应用广泛的降脂药,具有强大的抗炎作用,已经有研究证实,他汀对心衰患者可能有益。匹伐他汀是新一代他汀类药物,是第一个全合成的HMG-CoA还原酶抑制剂,它对AGEs诱导的心肌纤维化的研究,目前还没有文献报道,其可能的作用机制,也还没有明确。 本研究以培养的新生SD大鼠心肌成纤维细胞(CFs)为研究对象,采用Western Blot和β-半乳糖苷酶染色等实验方法,观察了AGEs诱导的心肌成纤维细胞老化和纤维化的可能分子机制；同时观察HMG-CoA还原酶抑制剂匹伐他汀(Pit)对AGEs诱导的心肌成纤维细胞纤维化的影响及其潜在机制。为阐明心肌纤维化的发生机制,防治心肌纤维化提供实验依据。实验内容包括以下两个部分： 第一部分晚期糖基化终产物对心肌成纤维细胞老化及纤维化的影响 目的：探讨晚期糖基化终产物(AGEs)诱导心肌成纤维细胞老化及纤维化的相关机制。 方法：用AGEs(200μg/ml)及抗-RAGE抗体(2μg/ml)、TGF-β/smad通路抑制剂(SB431542,10μM)干预乳鼠心肌成纤维细胞72h。观察老化相关指标β-半乳糖苷酶的活性及p16的表达；Western NVP-BKM120研究购买 blot检测TGF-β, p-smad2/3, MMP-2的水平。 结果： 1.AGEs干预72小时后,AGEs组细胞老化指标p-半乳糖苷酶的活性及p16的表达水平较对照组明显升高(p
目的：观察槲皮素在环孢素（CsA）诱导肾小管上皮细胞转分化（EMT）中的作用，探讨槲皮素对肾小管EMT相关TGF-β1/Smads信号分子蛋白的影响。

方法：1.将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞株（NRK-52E）分为正常对照组及不同药物（CsA、TGF-β1阻断剂、槲皮素）处理组，CCK8检测法观察细胞的增殖抑制情况。2.将NRK-52E细胞培养分为6组：正常对照组（A组，含胎牛血清的培养液）、环孢素处理组(B组，加入含CsA培养液)、槲皮素对照组（C组，加入含槲皮素培养液）、阻断剂组（D组，培养液中先加入TGF-β1阻断剂，24h后再加入CsA）、槲皮素干预1组（E组，培养液先加入CsA，24h后再加入槲皮素）、槲皮素干预2组（F组，培养液先加入含CsA，24h后再加入TGF-β1阻断剂和槲皮素），各组细胞培养24h后，采用RT-PCR法、免疫组化法或Western-blot法检测各组细胞成纤维特异蛋白（FSP-1）、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、Smad2和Smad7mRNA和蛋白表达。 结果：1．CsA处理细胞后其活力明显降低，不同浓度的阻断剂或槲皮素后处理24h后其细胞存活率均增高（P0.05）；B、E、F组mRNA和蛋白表达均出现不同程度上调（P＜0.05），其中B组上调尤明显；D组mRNA和蛋白表达明显低于B、E、F组，但高于A、C组（P＜0.05）；F组mRNA及蛋白表达高于E组（P＜0.05）。 selleck 3．α-SMA:免疫着染显示主要表达于胞浆；C组mRNA和蛋白表达与A组无统计学差异（P>0.05）；B、E、F组mRNA和蛋白表达均出现不同程度上调（P＜0.05），其中B组显著上调；D组mRNA和蛋白表达明显低于B、E、F组，但高于A、C组（P＜0.05）；F组mRNA与E组无统计学差异（P>0.05），但蛋白表达高于E组（P＜0.05）。 4．TGF-β1：免疫着染显示主要表达于胞浆；C组mRNA和蛋白表达与A组无统计学差异（P>0.05）；B、E、F组mRNA和蛋白表达均不同程度上调（P＜0.05），其中B组上调尤明显；D组mRNA与蛋白表达均明显低于B、E、F组（P＜0.05），与C组无明显差异（P>0.05）；F组mRNA高于E组（P＜0.05），但蛋白表达无统计学意义（P>0.05）。 5．Smad2：免疫着染显示主要表达于胞浆；C组mRNA和蛋白表达与A组无统计学差异；B、E、F三组mRNA和蛋白水平均有不同程度表达上调（P0.05）；F组mRNA表达高于E组（P＜0.05），蛋白表达无统计学意义（P>0.05）。 6．Smad7：免疫着染显示主要表达于胞浆；C组mRNA和蛋白表达与A组无统计学差异（P>0.05）；B、D组mRNA和蛋白水平均有不同程度表达下调（P<0.05），其中B组下调尤显著；D组mRNA和蛋白水平较A、C组表达下调（P<0.

59万。肺癌最主要的病理类型包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌,其中非小细胞肺癌占肺癌总数的80%~85%。非小细胞肺癌的主要
Since the discovery that non-small cell lung cancer(NSCLC) is driven by epidermal growth factor receptor(EGFR) mutations, the EGFR tyrosine kinase inhibitors(EGFR-TKIs, e.g., ge fi tinib and elrotinib) have been effectively used for clinical treatment. However, patients eventually develop drug resistance. Resistance to EGFR-TKIs is inevitable due to various mechanisms, such as the secondary mutation(T790M), activation of alternative pathways(c-Met,

HGF, AXL), aberrance of the downstream pathways(K-RAS mutations, loss of PTEN), impairment of the EGFR-TKIs-mediated apoptosis pathway(BCL2-like 11/BIM deletion polymorphism), histologic transformation, ATP binding 和 cassette(ABC) transporter effusion, etc. Here we review and summarize the known resistant MLN2238 价格 mechanisms to EGFR-TKIs and provide potential targets for development of new therapeutic strategies.
表皮生长因子受体家族,又称HER/ERBB家族,由四个成员组成:HER1/EGFR/ERBB1、HER2/NEU/ERBB2、HER3/ERBB3和HER4/ERBB4,在肿瘤的发生发展中具有重要作用。以EGFR家族为靶点的治疗已经成为当前的研究热点,尤以HER1、HER2的研究最为深入,相应的靶向治疗药物已应用于临床。但随着时间的推移,EGFR抑制剂耐药现象逐渐出现。目前研究发现,针对HER3的靶向治疗策略可能逆转这种耐药现象。全文综述HER3在肿瘤发生发展中的角色,EGFR抑制剂耐药机制以及HER3抗体逆转EGFR抑制剂耐药的研究进展,以期为优化EGFR家族靶向治疗提供新的思路。
1病历报告患者,女,51岁。因发现左乳腺肿物5个月于2012年8月20日入院,入院后查乳腺彩超示:左乳实性团块7.5cm×7.0cm×5.5cm,左腋下多发低回声结节,最大2.0cm×1.0cm(图1A)。于2012年8月21日行左乳腺肿物及左腋下淋巴结穿刺术,穿刺病理:(左侧)乳腺侵润性导管癌,Ⅱ级,未见脉管内
癌症对人类健康造成严重威胁。肿瘤的发生发展与多种因素密切相关,除了年龄、种族及地理等因素外,临床研究中还发现乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肝癌、前列腺癌及结肠癌等多种肿瘤在男性与女性中的发生率存在显著性差异,认为性激素可能会影响激素靶向性癌症的发生与发展,其中雌激素及其信号通路近年来成为广受关注的热点。雌激素受体(Estrogen

receptor,ER)包括ERα和ERβ,于1977年首次在子宫内膜细胞中被发现。
磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3 PD98059订单 kinase,PI3K)是细胞内重要的信号分子,它具有调节细胞增殖、分化、代谢、凋亡等功能。PI3K的基因易发生突变和扩增,从而导致PI3K被激活,与肿瘤的形成和发展密切相关。IA型的PI3K及其下游的信号分子组成的通路参与调节肿瘤细胞的增殖、存活、黏附、迁移等活动。综述了IA型PI3K——PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ与肿瘤发生、发展的关系,列举了20个具有代表性的IA型PI3K抑制剂,并讨论了它们的分子抑制机制。
目的:体外观察白桦脂酸对天然表达缝隙连接蛋白32(Cx32)的BRL-3A细胞的细胞缝隙连接(GJ)功能及Cx32蛋白表达水平的影响.方法:SRB法检测不同质量浓度白桦脂酸对BRL-3A细胞的毒性;细胞接种荧光示踪法观察不同质量浓度白桦脂酸对GJ功能的影响;Western blot方法检测白桦脂酸影响GJ功能的质量浓度对Cx32蛋白表达水平的影响.结果:白桦脂酸在0~1μg/m L质量浓度对BRL-3A细胞无毒性作用;白桦脂酸(0.01~1μg/m L)质量浓度依赖性地降低GJ功能,但对Cx32表达无影响.结论:白桦脂酸在0.01~1μg/m L质量浓度范围内,降低BRL-3A细胞的GJ功能;这种作用与Cx32蛋白的表达水平无关.
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)蛋白家族介导的PI3K-Akt-mTOR信号传导通路涉及人体众多细胞功能的调节,是近年来抗肿瘤药物研究的重要靶标。Ⅰ型PI3K具有PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ4种关键亚型,这4种亚型各自介导不同的生命活动,因此设计亚型选择性抗肿瘤药物能够增加治疗的选择性,减少毒副作用。本文对于近期PI3K关键亚型抑制剂,特别是PI3Kα和PI3Kδ抑制剂,以及它们在PI3K-Akt-mTOR信号传导通路中的作用进行综述。
2015年1月20日奥巴马首次提出”精准医疗计划”,致力于治愈癌症和糖尿病等疾病,意味着精准医学时代的来临。所谓”精准医学”是随着基因组测序技术快速进步以及生物信息与大数据科学的交叉应用而发展起来的新型医疗模式。其本质是通过基因组、蛋白质组等组学技术和医学前沿技术,对于大样本人群与特定疾病类型进行生物标记物的分析与鉴定、验证与应用,从而精确找到疾病的原因和治疗的靶点,并对一种疾病不同状态和过程进行精
Acute myeloid leukemia(AML) is characterized by the accumulation of circulating immature blasts that exhibit uncontrolled growth, lack the ability to undergo normal differentiation, and have decreased sensitivity to apoptosis.

4163±0.0503，E_2组吸光值为0.6940±0.0143，与对照组相比有显著意义（P0.05）。（4）流式细胞仪检测细胞周期：E_2组S期所占比例为（33.15±0.212）%与对照组（11.55±0.212）%相比有统计学意义（P<0.05），表明E_2可以刺激EPCs增殖；PD98,059组S期比例（16.25±6.434）%与E_2组相比有统计学意义（P<0.05），表明其可以阻断E_2引起的EPCs增殖；SP600125组S期比例（12.55±1.202）%与E_2组相比有统计学意义（P0.05），表明其不能减弱E_2生物学效应。另外E_2组G1期细胞比例为（34.45±0.495）%与对照组（62.90±4.384）%相比P<0.05有统计学意义，PD98,059组G1期细胞比例为（57.40±7.640）%与E_2组相比P<0.05有统计学意义，SP600125组G1期细胞比例为（53.95±1.344）%与E_2组相比P0.05没有统计学意义，上述结果与各组S期比较结果一致。（5）Traswell迁移实验：对照组下层细胞数为22.80±8.643；E-82在浓度为1×10~(-8)mol/L时下层细胞数为65.20±12.617，与对照组比较有显著性增加（P0.05）。结论：（1）雌激素可以促进内皮祖细胞的增殖和迁移。（2）雌激素促进内皮祖细胞的增殖和迁移可能与ERK、JNK亚通路有关，阻断这两条通路可抑制此种作用；在正常细胞模型中阻断p38通路不能减弱雌激素促进内皮祖细胞增殖和迁移的作用。
研究背景

而且 冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)已经成为威胁人类健康的第三位杀手,也是严重影响人们生活质量的最常见的心血管疾病之一。研究表明冠心病是慢性炎症反应,动脉粥样斑块内有大量的单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞和T淋巴细胞等炎症细胞的浸润,斑块内炎症反应非常活跃；而活动性炎症反应可促使稳定性粥样斑块转变为不稳定性斑块,这是冠状动脉内急性血栓形成的诱因。由此可见,抑制炎症细胞活性,阻断炎症反应通路已成为研究冠心病免疫治疗的热点和难点。众所周知,T淋巴细胞的激活是炎症反应的中心环节,而近年来发现的负性刺激信号(PD-1/PD-L1)对调节T淋巴细胞活性起重要作用。

程序性死亡因子配体1(programmed cell death ligand1, PD-L1、B7-H1或CD274)是由290个氨基酸构成的Ⅰ型跨膜蛋白。早在1999年Dong等研究指出PD-L1是B7家族分子的第三位成员,它的受体既不是CD28蛋白,也不是CTLA-4蛋白(cytotoxic T-lymphocyte Antigen4, CTLA-4)和ICOS蛋白(inducible co-stimulator, ICOS),其受体为程序性死亡因子1(programmed cell death1receptor, PD-1或CD279)。由于最初在肿瘤细胞中发现PD-L1有高表达,人们因此推测PD-L1可能与肿瘤细胞浸润有关；但随着研究深入,发现除肿瘤细胞以外,PD-Ll在多种炎症细胞和组织细胞上均有表达,如T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞、Kupffer细胞、星形细胞、树突状细胞、血管内皮细胞、骨髓源性肥大细胞、胎盘合体滋养层细胞等等；PD-L1的功能除与肿瘤细胞浸润以外,还与多种疾病发生有密切的关系,如移植免疫反应、自身免疫性疾病、微生物感染(病毒感染)。近年来研究还发现PD-L1/PD-1与动脉粥样斑块形成有关。Gotsman等研究冠状动脉斑块时,发现用荧光免疫技术可以探测到PD-L1可表达于多处动脉粥样斑块内。Lee等发现冠心病患者外周血T淋巴细胞PD-1表型及树突状细胞PD-L1表型均较健康人的明显降低,而冠心病患者树突状细胞激活初始T淋巴细胞能力明显增强。虽然现在对PD-L1的功能有了一定了解,然而到现在促使细胞表达PD-L1蛋白的分子机制还没有完全清晰。不同研究对象及使用不同刺激物,得出结果不完全相同,归纳起来影响PD-L1表达的细胞信号通路可能为JAK/STAT信号通路、PI3K/Akt信号通路、MEK/Erk信号通路.NPM/ALK通路,以及与IRF-1和STAT-3转录因子有关。众所周知,p38MAPK信号通路是MAPK通路的重要分支,它通过使转录因子磷酸化而改变基因的表达,参与多种细胞内信息传递过程,能对广泛的细胞外信号发生反应,介导细胞生长、发育、分化及死亡全过程。然而关于PD-L1蛋白表达与p38MAPK信号通路的关系的研究资料甚少。

PD173074分子量 什么 鉴于以上证据,本课题以体外培养单核细胞源树突状细胞作为研究对象,利用炎症因子(LPS)刺激树突状细胞模拟病原微生物入侵的模型,观察树突状细胞PD-L1表型的变化；再以p38蛋白特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK通路,探讨树突状细胞表达PD-L1与p38MAPK信号通路的关系,阐明LPS诱导树突状细胞表达PD-L1蛋白的分子机制,完善负性协同刺激信号(PD-1/PD-L)调控T淋巴细胞活性的机理,为动脉粥样硬化的免疫治疗的提供理论基础。 第一部分脂多糖诱导单核细胞源树突状细胞表达PD-L1 目的观察炎症因子(LPS)对树突状细胞CD80、CD86和PD-L1表型的影响,以明确LPS能够促进树突状细胞成熟,增强PD-Ll表达的作用。 对象和方法 1、对象体外培养健康人外周血单核细胞来源的树突状细胞 2、方法 2、1单核细胞的分离和培养 采用密度离心法分离健康人外周血单个核细胞,加入含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μ g/ml链霉素的RPMI-1640培养基,调整细胞密度为5×106/ml,接种于六孔细胞培养板中,置入饱和湿度、5%CO237℃的细胞孵育箱中培养2小时。取出六孔细胞培养板,吸弃悬浮细胞,即得贴壁的单核细胞。 2、2树突状细胞的诱导和培养 贴壁的单核细胞用无Ca2+、Mg2+的PBS轻柔洗2次后,在每个孔加入含rhGM-CSF25ng/ml、rhIL-425ng/ml、100U/ml青霉素和100μ g/ml链霉素的树突状细胞完全培养基约3ml,置于5%CO237℃的孵育箱中继续培养,分别于第3、5天半量换液,补充细胞因子,维持rhGM-CSF和rhIL-4均为25ng/ml。于第7天收获树突状细胞。 2、3实验分组(每组设2个复孔,共实验4次)LPS用二甲基亚砜(DMSO)溶解。 根据使用是否使用脂多糖,将实验分为两组：LPS组(LPS)和对照组(NORMAL)。LPS组：树突状细胞给予LPS(1.0μ g/ml)处理后继续培养24小时；对照组：树突状细胞给予DMSO(0.1%V/V)处理后继续培养24小时。 2、4流式细胞术检测细胞表型 收集各组树突状细胞,调整细胞浓度为5×105/ml,分别加入相关表型抗体,孵育,清洗2次,用流式细胞仪检测相关表型荧光强度,用Cellquest分析检测结果。 3、统计学方法： 所有数据采用SPSS13.0软件处理,计量数据以均数±标准差(x±S)表示,统计学分析采用两独立样本t检验,P<0.

体重(g)、血糖(mmol/L)和HbA1c(%):成模10周时,DM组和DT组大鼠体重分别为266.77±55.47和279.50±43.56,增长幅度小于NC组的356.22±50.73(P<0.001);NC组大鼠血糖(5.72±1.22)、HbA1c(3.30±0.10)保持在正常范围内,DM组和DT组血糖分别为25.37±3.56和23.54±8.70,HbA1c分别为5.92±0.72和6.12±0.07,均显著高于NC组(P0.05)。 {Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|buy Anti-infection Compound Library|Anti-infection Compound Library半抑制浓度|Anti-infection Compound Library价格|Anti-infection Compound Library花费|Anti-infection Compound Library溶解度|Anti-infection Compound Library购买|Anti-infection Compound Library制造商|Anti-infection Compound Library查找购买|Anti-infection Compound Library订单|Anti-infection Compound Library mouse|Anti-infection Compound Library chemical structure|Anti-infection Compound Library分子量|Anti-infection Compound Library molecular weight|Anti-infection Compound Library数据表|Anti-infection Compound Library supplier|Anti-infection Compound Library体外|Anti-infection Compound Library细胞系|Anti-infection Compound Library concentration|Anti-infection Compound Library nmr|Anti-infection Compound Library体内|Anti-infection Compound Library clinical trial|Anti-infection Compound Library cell assay|Anti-infection Compound Library screening|Anti-infection Compound Library high throughput|buy Antiinfection Compound Library|Antiinfection Compound Library半抑制浓度|Antiinfection Compound Library价格|Antiinfection Compound Library花费|Antiinfection Compound Library溶解度|Antiinfection Compound Library购买|Antiinfection Compound Library制造商|Antiinfection Compound Library查找购买|Antiinfection Compound Library订单|Antiinfection Compound Library chemical structure|Antiinfection Compound Library数据表|Antiinfection Compound Library supplier|Antiinfection Compound Library体外|Antiinfection Compound Library细胞系|Antiinfection Compound Library concentration|Antiinfection Compound Library clinical trial|Antiinfection Compound Library cell assay|Antiinfection Compound Library screening|Antiinfection Compound Library high throughput|Anti-infection Compound high throughput screening| 2.肾功能及肾重/体重比:糖尿病大鼠的肾功能受累,成模10周时,DM组与DT组大鼠尿MA/Cre(mg/mmol)分别为17.35±3.51和15.54±3.57,较NC组(3.79±1.02)明显升高(P<0.05);DM组与DT组相对肾重(%)分别为6.09±0.91和5.93±0.69,较NC组(4.03±0.50)明显升高(P0.05)。各组血肌酐、肌酐清除率值无明显的统计学意义(P>0.05)。

3.肾组织病理变化:PAS及PASM染色显示,DM组大鼠肾小球系膜基质明显增多,系膜细胞增生,基底膜增厚,少数表现为结节性肾小球硬化改变,符合糖尿病肾病病变特征。而治疗组上述病理改变均有不同程度减轻。 4. RT-PCR:DM组IGF-1 mRNA表达量(0.52±0.17)较NC组(0.38±0.11)明显上调(P0.05)。DM和DT组的Akt1 mRNA表达量分别为1.02±0.58和0.89±0.34,较NC组(0.56±0.19)明显增多(P<0.05),DT组的表达量低于DM组(P<0.001),DT组大鼠p-Akt水平(0.65±0.06)较DM组降低(P<0.001);DM组及DT组Akt1的表达量分别为15.49±2.33和9.20±1.27,与NC组(3.01±1.13)比较显著增加(P<0.001),DT组较DM组显著减少(P
目的

也许 探讨糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在曲古抑菌素A (trichostatin A ,TSA)诱导的肺腺癌A549细胞生长抑制、周期阻滞和抑制肿瘤细胞浸润转移中的作用及其可能机制。 方法 常规传代培养A549细胞,分组予以不同浓度的TSA干预和GSK-3β酶抑制剂预处理后进行相关实验;MTT比色法检测TSA对A549细胞增殖的影响,并用GSK-3β特异性小分子抑制剂SB216763抑制GSK-3β活性后,观察上述浓度的TSA对A549细胞生长的作用效果;流式细胞仪分析用酶抑制剂干预前后TSA作用A549细胞的周期变化;Transwell小室法检测抑制GSK-3β活性前后TSA对A549细胞的侵袭力的影响;Western Blot法检测不同浓度的TSA对A549细胞中GSK-3β、磷酸化的GSK-3β(pGSK-3β)蛋白和粘附分子E-cadherin蛋白表达水平及用酶抑制剂预处理后TSA作用A549细胞24h上述蛋白水平的变化;免疫细胞化学法检测予酶抑制剂前后各组细胞中细胞周期素依赖性激酶抑制剂p27的蛋白水平。

结果 1、MTT法结果显示TSA抑制A549细胞的增殖,此作用呈剂量依赖性(P<0.05);用酶抑制剂SB216763预处理后明显减弱了TSA对A549细胞的生长抑制作用和细胞周期阻滞(P<0.05);用酶抑制剂SB216763预处理后A549细胞侵袭力较单用TSA组增加(P0.05);12.5ug/L的TSA并不影响A549细胞中pGSK-3β和p27蛋白表达情况(P>0.05),从25ug/L组起,pGSK-3β蛋白水平降低,E-cadherin蛋白和p27蛋白表达增加(P<0.05);酶抑制剂SB216763使活性受抑制形式的GSK-3β(pGSK-3β)表达增加,而下调E-cadherin和p27的蛋白水平(P
蛋白磷酸酯酶-2A(PP2A)是多功能的蛋白质丝氨酸/苏氨酸磷酸酯酶。PP2A由一个催化亚基C和结构亚基A组成的核心酶,和另一个调节亚基B所组成。PP2A翻译后催化亚基的修饰调节影响PP2A活性的调节。PP2A催化亚基Tyr307位点经蛋白酪氨酸激酶(如src)磷酸化后活性下降;催化亚基Leu309位点可以被PP2A特异性甲基转移酶(PPMT1)/甲酯酶(PME-1)甲基化/去甲基化修饰调节,甲基化后可增强PP2A活性。PP2A与糖原合酶激酶-3(GSK-3)是微管相关蛋白Tau磷酸化修饰调节最为重要的蛋白磷酸酯酶和磷酸激酶,它们的调节失衡可造成Tau过度磷酸化,导致AD样改变。在阿尔茨海默病患者脑中PP2A活性下降,其具体机制还不明确。我们课题组已经发现,GSK-3可上调蛋白磷酸酯酶抑制因子-2 没有 (I2PP2A)的表达水平而下调PP2A活性,GSK-3与I2PP2A相关系数R=0.9158,GSK-3活性与PP2A活性成负相关系数R=0.9166,而I2PP2A与PP2A负相关系数R=0.

需要细胞内信号分子的参与,MAPK级联效应是细胞内重要的信号转导系统。近年来,关于MAPK信号转导通路对慢性疼痛的信号转导通路和细胞内信号分子的研究取得了一定的进展[3,4]。因此,本研究从影响DRG可塑性变化的角度探讨MAPK信号转导通路影响吗啡耐受的原因和机制,以探求解决临床吗啡耐受问题的方法。

第一部分：大鼠“炎性痛-慢性吗啡耐受”模型及给予MAPK通道抑制剂模型的建立 目的：建立关节炎大鼠慢性吗啡耐受模型及复合MAPK通道抑制剂模型,探讨MAPK信号转导通路对关节炎大鼠慢性吗啡耐受形成的影响。 方法：鞘内置管成功的成年雄性大鼠45只,随机分为9组(n=5)：A组：CFA后肢致炎后鞘内给予10μl生理盐水,1日2次,连续7d；B组：鞘内给予吗啡10μg/kg(10μl),1日2次,连续7d；C组：CFA后肢致炎后鞘内单次给予吗啡10μg/kg 这个 (10μl);D组：CFA后肢致炎后鞘内给予吗啡10μg/kg(10μl),1日2次,连续7d；E组：A组方法基础上每日首次给药前30min给予10μ125%DMSO;F组：D组方法基础上每日首次给药前30min给予10μ125%DMSO;G组：D组方法基础上每日首次给药前30min给予10μg ERK1/2抑制剂PD98059；H组：D组方法基础上每日首次给药前30min给予10μg p38 MAPK抑制剂SB203580；I组：D组方法基础上每日首次给药前30min给予50μgJNK抑制剂SP600125。每日检测大鼠机械缩爪阈值及热板缩爪潜伏期。 结果：B、D、F、G、H、I组均出现吗啡耐受现象,G、H、I组痛觉过敏程度小于D组。 结论：通过给关节炎大鼠鞘内反复给予吗啡,能够引起炎性痛大鼠的吗啡镇痛耐受。此三种MAPK抑制剂能够抑制炎性痛大鼠吗啡耐受的形成。 第二部分：炎性痛吗啡耐受大鼠背根神经节辣椒素受体蛋白表达分析及MAPK抑制剂作用 目的：观察炎性痛-吗啡耐受大鼠DRG处TRPV1及p-TRPV1表达变化和MAPK信号转导通路对其表达的影响,探讨吗啡耐受的可能机制及MAPK信号转导通路对吗啡耐受形成的影响。

方法：模型的建立、分组及行为学测试方法同第一部分。给药7d后取L4～L6DRG,利用Werstern blot方法测定大鼠DRG处TRPV1及p-TRPV1蛋白表达。 结果：B、D、F、G、H、I组均出现吗啡耐受现象。与其他7组相比,D组及F组TRPV1及p-TRPV1蛋白表达量最高。 结论：吗啡耐受的形成与TRPV1及p-TRPV1在DRG的蛋白表达有关；此三种MAPK信号传导通路参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成。
血管平滑肌细胞(vascular smoooth BVD-523半抑制浓度 muscle cell, VSMC)位于动脉血管中膜,是血管中层唯一的细胞成分。VSMC的异常增殖,导致其由中膜迁移到内膜下间隙,是冠状动脉硬化、经皮穿刺腔内冠状动脉成形术再狭窄以及高血压血管肥厚等疾病的病理基础。因此找到VSMC异常增殖的机制,抑制VSMC异常增殖是治疗这些血管肥厚性疾病的重要途径。

而且 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)是近年来发现的一种新的抑癌基因,是具有双重磷酸酶活性的肿瘤抑制因子,在中枢神经系统、心脏、肝脏、肾脏、胃肠道、肺脏及皮肤等全身多器官均有表达,且参与多种生理过程,尤其是对肿瘤细胞的生长、增殖、分化、凋亡、粘附和迁移均具有重要影响。近年来,对PTEN的研究逐渐从肿瘤领域延伸到其他领域中,随着研究的深入人们发现PTEN在心肌肥大,高血压,动脉粥样硬化,支气管哮喘哮等疾病中也发挥重要的作用。本课题应用血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移,从细胞和分子水平深入探讨AngⅡ是否影响平滑肌细胞中抑癌基因PTEN的活性和表达以及其下游信号通路,发挥促血管平滑肌细胞异常增生和迁移的作用。并且初步探讨血管平滑肌细胞增殖中PTEN的表达如何被调控。 一、血管紧张素Ⅱ促进平滑肌细胞增殖和迁移,抑制凋亡 应用MTT法,CCK-8法及划痕实验,证实AngⅡ可以促进平滑肌细胞的增殖与迁移,并且确定了AngⅡ的最佳浓度和作用时间。经MTT法检测细胞活力,发现1μmol/L以及10μmol/L两个浓度的AngⅡ作用12小时和24小时后均能显著促进平滑肌细胞增殖,而0.1μmol/L AngⅡ作用不及另两个浓度。1μmol/L AngⅡ增殖促进率为12小时13.6%(p<0.001),24小时13.9(p<0.01)和9.8%(p
背景 抵抗素(Resistin, Re)是一种于2001年新发现的具有对抗胰岛素作用的蛋白质。研究发现抵抗素与代谢综合征(metabolic syndrome, MS)中多种炎症因子的产生分泌、动脉粥样硬化的发生发展及血栓性疾病的发生有着密切的联系。血小板在血栓形成过程中起着不可替代的作用,影响着血栓性疾病的发展进程,如急性心肌梗死、下肢深静脉血栓栓塞及卒中。目前尚无研究报道抵抗素对血小板功能的调节。本实验的目的是探讨抵抗素能否改变血小板功能及其可能涉及的信号传导通路。 方法 随机抽取8名健康志愿者的静脉血3ml,制取富血小板血浆(PRP)。1)血小板活化:富血小板血浆与不同浓度的抵抗素(25, 50, 100, 200ng/ml),单独或联合凝血酶(0.

05)。STAT3mRNA表达活性也受到显著抑制(p<0.05),但STAT1mRNA并未出现显著抑制效应。T-2毒素诱导IL-6基因表达在12h出现了显著的抑制p
背景：人参皂苷Rh2是中国传统中药人参中的主要活性成分，具有优异的免疫调节、抗炎、抗疲劳、抗肿瘤等药理作用。然而因其难溶于水,限制了体外实验中可应用的最大浓度，人参皂苷Rh2的生物活性在实际应用和生产研究中受到严重的制约。为了提高Rh2的水溶性和生物活性，本室制备了人参皂苷Rh2的硫酸化修饰产物Rh2-B1和Rh2-B2。两种衍生物的水溶性都获得大幅提高。在本论文中，我们研究了Rh2-B1对细胞毒性T细胞系CTLL-2细胞的作用，细胞毒性T细胞因其能够保护机体免受病毒感染而成为近年来研究的热点，此外，我们还探讨了Rh2影响CTLL-2细胞增殖和发挥免疫功能的分子机制。

目标：我们的目标是调查Rh2-B1对干扰素-（γInterferon-γ, IFN-γ）的分泌和细胞增殖的影响，并研究其可能的机制。 Z-VAD-FMK数据表 材料与方法：酶联免疫吸附实验（Enzyme Linked ImmunosorbentAssay,ELISA）被用于检测IFN-γ在全血培养上清和CTLL-2细胞培养上清液中的浓度。噻唑蓝染色法（MTT Cell Proliferation Assay，MTT）被用来检测CTLL-2细胞的增殖情况。蛋白免疫印迹试验（Western blot）被用来评价CTLL-2细胞中信号转导通路相关蛋白表达量及其活化程度的变化。 结果：我们的研究证明，Rh2-B1能够显著提高Balb/c小鼠全血培养上清中IFN-γ的水平。在此之后，我们评估了Rh2-B1对CTLL-2这种细胞毒性T细胞的增殖、IFN-γ的分泌情况的影响，并研究了其作用机制。Rh2-B1刺激了CTLL-2细胞的增殖和IFN-γ的分泌，还能够介导丝裂原活化蛋白激酶p38（p38mitogen-activated selleck

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selleck怎么样 protein kinase，p38MAPK）和胞外信号调节激酶（extracellular regulated proteinkinases，ERK）的表达和活化，但对淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase,Lck or p56Lck）和信号转导及转录激活因子（Signal transducers and activators oftranscription5，STAT5）的表达呈现抑制作用。这种作用能够被特异性的p38MAPK抑制剂SB203580和特异性ERK抑制剂U0126阻断。 结论：Rh2-B1能够通过激活p38MAPK和ERK依赖的信号通路进而刺激细胞毒性T细胞的增殖和IFN-γ的分泌。这可能成为一种新的病毒感染治疗潜在药物。
凋亡对于胚胎发育具有至关重要的作用，细胞增殖和凋亡的共同作用才雕塑出了面部复杂精细的结构。各种原因导致的凋亡改变，会干扰两侧腭突和原始腭的融合，从而引起腭裂的发生。研究证明骨形成蛋白（bone

morphogenetic protein (BMP))通过调节凋亡，能够导致上颌骨和腭骨的缺损，进而引起腭裂的发生；而其上游基因GATA-6作为与胚胎发育密切相关的转录调节因子，能引起多个胚层来源的器官发育异常。GATA-6等位基因完全被敲除的杂合子动物无法存活，而胚胎干细胞小体（embryonic stem cell–derived embryoid 或者 bodies (EBs))能够准确模拟胚胎发育早期的情况，因此是研究GATA-6与腭裂等胚胎发育异常导致的先天性畸形相关性的理想模型。 GATA蛋白家族，作为一组锌指翻译因子，对于细胞分化和胚胎器官发育具有非常重要的作用。在小鼠体内敲除GATA-6会阻碍内胚层的分化，并且引起外胚层的凋亡。之前的实验观察到，敲除GATA-6的EB内出现大量的凋亡，并且其内胚层的分化会受到影响。本实验发现，将正常的内胚层细胞的移植到突变的胚胎干细胞小体能够完全阻止细胞凋亡，并恢复外胚层极化和成腔。laminin能够诱导基底膜细胞在突变胚胎干细胞小体上组装；而laminin

γ1被敲除的内胚层细胞移植到突变胚胎干细胞小体上，由于不分泌三聚体层粘连蛋白，就不会形成基底膜，只能部分抑制凋亡。这些现象说明内胚层细胞来源的基底膜和非基底膜因素都对于GATA-6依赖的细胞存活具有重要的作用。 我们的微阵列分析显示在EB分化的过程中，BMP-2、IGF-2、TGF-β和VEGF-A的表达增加，而BMP-4，FGF-4，PDGF-A，PDGF-C和VEGF-C的表达减少。为了确定这些生长因子的表达在GATA-6被敲除的胚胎干细胞内是否发生了改变，我们采用了逆转录PCR（RT-PCR）和免疫印迹的方法对2天的EB进行分析，发现GATA-6被敲除后，BMP-4和IGF-2的mRNA表达明显减少，而FGF-4的mRNA表达不变。重要的是，BMP-2的mRNA在2天正常的EB内已经能检测到，然而在GATA-6被敲除的EB内则检测不到。为了证明各种生长因子对EB凋亡的影响，我们在1天的GATA-6-/-的EB内，使用分别使用浓度为0.1μg/ml的BMP-2, FGF-4, EGF, IGF-2,PDGF和TGF-β1分别作用24小时，并且与对照组相比，然后使用全量免疫染色，通过检测cleaved caspase-3对凋亡进行分析。结果显示凋亡广泛的出现在GATA-6-/-的EB的周围细胞内，而BMP-2的加入明显抑制了caspase-3的激活， FGF-4, EGF和PDGF则没有效果。将BMP-2的浓度增加到0.

长期葡萄糖剥夺导致细胞内ATP水平明显下降。加入丙酮酸类似物甲基丙酮酸后可以恢复细胞内ATP的水平,并且抑制了长期葡萄糖剥夺诱导的特异性增加的AKT T308位点的磷酸化。 2.细胞的自噬作用对特异性AKT ABT-888浓度 T308位点磷酸化的增加没有影响。 3.选择性增加的AKT激活了一组特异性底物。长期葡萄糖剥夺可以诱导多种促进细胞存活的信号上调,抑制与存活相关性较低的信号通路。 4.细胞凋亡随着葡萄糖剥夺的时间延长而增加,但是当葡萄糖剥夺延长到一定时间后反而下降。 5.联合使用葡萄糖剥夺和GRP78勺抑制剂可以明显抑制肿瘤细胞形成集落的能力。 结论：选择性增加的磷酸化的AKT激活了一组特异性,促进细胞存活的底物。而且GRP78是在长期葡萄糖缺乏时AKT的磷酸化和细胞存活所必须的。在代谢应激的同时,使用AKT抑制剂或者GRP78抑制可以起到协同杀死对单独使用其中一种处理不敏感的肿瘤细胞。AKT通路和AMPK通路的组成部分在长期葡萄糖应激时都被高度激活。这表明在面临严重的代谢应激时,细胞里的信号通路网络会重新适应和平衡来有效激活细胞的存活机制。
缺血性脑血管病是临床常见病、多发病之一，具有高发病率、高致死率、高致残率、高复发率、恢复缓慢的特点，严重影响患者的生活质量，给患者家庭和社会带来沉重的负担，且近年来逐渐有年轻化的趋势。在脑缺血发生时,未接受溶栓治疗者脑组织中的动脉栓子自发向远端推移出现血管再通有可能引发缺血部位过度再灌注；而接受溶栓治疗的患者血管再通虽可达到部分有效再灌注，但由于缺血脑组织微血管结构完整性与功能出现损伤,血脑屏障破坏、自身调节衰竭,而可能发生瀑布式神经损伤级联反应,导致缺血再灌注损伤。研究证实脑缺血再灌注损伤是导致患者病情加重的主要原因，因此，脑缺血后如何减轻神经细胞再灌注损伤及死亡是临床面临的重要课题。

近年来随着现代免疫学和分子生物学的迅速发展，对于脑缺血再灌注损伤病理生理机制研究已取得了重大进步，目前普遍认为其病理生理机制主要包括氧化应激、炎症反应、细胞凋亡、兴奋性氨基酸毒性、细胞内钙超载、自由基损伤等，这几种因素并不是孤立存在的，彼此之间相互作用、相互影响，构成了一个复杂的调控网络，造成一系列病理级联反应，直接或者间接导致神经细胞凋亡/死亡，导致神经功能缺失。在脑缺血后复杂的病理损伤机制中，炎症反应、氧化应激、细胞凋亡是目前神经科学研究的热点，是脑缺血再灌注损伤的主要原因，抗氧化应激、减轻炎症损伤、抗细胞凋亡成为治疗缺血性脑血管病的主要途径之一。 尽管已经有多种药物经过实验研究，证明具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用，但多数未能在临床得到广泛应用，使理论和实践大大脱节。出现这种现象最主要的原因是动物与人类生理机制及耐受性等方面的差异以及脑缺血后级联反应的复杂性，单一使用阻断某一病理环节的药物可能难以奏效。所以在目前的临床治疗中，理想的神经保护剂应该具备针对缺血再灌注损伤多个损伤环节发挥保护作用的特性。 阿利吉仑(Aliskiren)是近年来合成的第一个口服、非肽类、直接肾素抑制剂，相对分子量为609.8。近年来，动物和临床实验发现，阿利吉仑具有广泛的生理作用，不仅能够有效降低高血压、抑制心肌纤维化和保护靶器官，还具有抑制动脉粥样硬化进展，抗炎等作用。但是阿利吉仑是否可以起到脑保护作用，其作用机制如何均有待探索。 那个 临床上缺血性脑血管疾病多为局灶性，部分患者由于溶栓治疗或栓子自发向远端推移出现血管再通出现再灌注现象，因此，制备局灶性脑梗死并且可实现再灌注的动物模型更为接近临床实际情况。本研究选用雄性C57/BL小鼠为研究对象，采用改良Longa线栓法建立脑缺血再灌注模型，在大脑中动脉阻塞所致的脑缺血再灌注模型上观察脑缺血后HMGB1，TLR4，NF-κB，ERK1/2，HO-1，PI3K，AKT，Bcl-2和Bax的表达，确定缺血后与炎症反应、氧化损伤及凋亡的关系，并选用阿利吉仑进行干预，评价干预前后梗死体积、脑含水量、神经功能缺损评分，以及阿利吉仑对HMGB1，TLR4，NF-κB，ERK1/2，PI3K，AKT，Bcl-2和Bax信号通路的作用，初步探讨其在缺血再灌注损伤后的脑保护作用机制，并应用ERK特异性拮抗剂PD98059和PI3K特异性拮抗剂LY294002进行干预，观察上述各因子的变化，以及评价神经功能缺失、脑水肿和梗死体积情况。本研究分三部分，现将各部分内容概述如下。

Birinapant订购 第一部分阿利吉仑对局灶性脑缺血再灌注损伤小鼠的抗炎作用及其相关机制研究 目的：观察脑缺血再灌注损伤后HMGB1/TLR4/NF-κB的变化，研究阿利吉仑对脑缺血再灌注损伤所致的炎症反应的作用，探讨阿利吉仑抗炎相关作用机制。 方法：选用成年雄性C57/BL小鼠为研究对象，应用改良线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注模型。随机将C57/BL小鼠分为4组：假手术组（Sham），溶剂对照组（Verhicle），阿利吉仑低剂量组（L-AS），阿利吉仑高剂量组（H-AS）。Sham组：假手术前连续5天以灌胃方式给予等量生理盐水，每日一次；Vehicle组：术前连续5天以灌胃方式给予等量生理盐水，每日一次；小剂量阿利吉仑干预组(L-AS)：术前连续5天以灌胃方式给予阿利吉仑10mg/Kg，每日一次；大剂量阿利吉仑干预组(H-AS)：术前连续5天以灌胃方式给予阿利吉仑25mg/Kg，每日一次。各组取材前进行神经功能评分，干湿重法测定脑组织含水量，TTC染色评价脑梗死体积，分别用免疫组化，Western-blot和RT-qPCR的方法检测缺血脑组织中HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白和mRNA水平的变化。 结果： 1Sham组中未见小鼠神经功能缺损，神经功能缺失评分为0分；Vehicle组在24h和72h神经功能缺损评分均较严重，L-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可降低神经功能缺损，但差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低神经功能缺损，差异有统计学意义（P＜0.05）； 2与Vehicle组相比，L-AS组在24h和72h可降低脑含水量，但是差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低脑含水量，差异有统计学意义（P＜0.05）； 3与Vehicle组相比，L-AS组在24h和72h可减小脑梗死体积，，但是差异无统计学意义（P＞0.

5小时鞘内分别注射P2X7受体拮抗剂oxATP和BBG,均可阻断脊髓LTP的产生；强直刺激前7天鞘内注射的P2X7受体的小干扰RNA片段,也阻断脊髓LTP的产生；离体脊髓切片上预先应用BBG灌流1小时,可阻断强直刺激李骚束所诱发的脊髓兴奋性突触后场电位的LTP,而不影响基础反应。以上表明,P2X7受体在脊髓场电位的LTP产生中具有至关重要的作用。 强直刺激前0.5小时鞘内分别注射oxATP和BBG及强直刺激前7天鞘内注射P2X7受体小干扰RNA片段,在强直刺激后3、5和7天均可部分缓解强直刺激所诱发的双侧触诱发痛;强直刺激前0.5小时鞘内注射BBG可明显抑制强直刺激后2小时Fos的表达上调。表明拮抗P2X7受体功能可显著抑制脊髓痛敏神经元的活动过度增强。免疫组化结果表明,P2X7受体与小胶质细胞标志物OX-42共标,而与星形胶质细胞标志物GFAP及神经元标志物NeuN无共标；强直刺激坐骨神经激活脊髓小胶质细胞和明显上调P2X7受体的表达,且均可被强直刺激前0.5小时鞘内注射P2X7受体拮抗剂BBG所抑制。以上表明脊髓LTP的阻断是小胶质细胞P2X7受体的特异性的作用。强直刺激坐骨神经可诱发脊髓p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated

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免疫组化结果表明,小胶质细胞和星形胶质细胞分别在强直刺激后第3天和第7天被激活；Western blot结果表明,强直刺激可导致P2X7下游分子IL-18及其受体的表达增加。以上过程均可被强直刺激前1小时至强直刺激后7天每天1次连续注射小胶质细胞抑制剂美满霉素抑制。免疫双标结果显示,IL-18绝大部分与小胶质细胞标志物Iba-1共标,少量与星形胶质细胞标志物GFAP共标,而与神经元标志物NeuN无共标,而IL-18受体仅与星形胶质细胞标志物GFAP共标。以上结果表明,小胶质细胞和星形胶质细胞之间的相互作用参与病理性痛的维持,此过程很可能是由IL-18信号通路介导。 综上所述,本研究表明,小胶质细胞上的P2X7受体在强直刺激坐骨神经诱发的脊髓场电位的LTP及持续性痛的产生中具有至关重要的作用,而此作用是通过IL-1β信号通路实现的；小胶质细胞可能通过P2X7受体下游信号分子IL-18激活星形胶质细胞,参与病理性痛的维持。
吗啡是一种阿片类受体激动剂,在临床实践过程中常用于急慢性疼痛的治疗,特别是对神经病理性疼痛和癌痛的治疗。然而,患者长期反复使用吗啡将会产生对吗啡镇痛作用的耐受和依赖,其具体表现为镇痛作用下降、作用持续时间缩短、疼痛过敏及停药后疼痛加剧等,需要增加吗啡剂量才能达到耐受前的镇痛效果。由于吗啡存在上述弊端,使其临床应用受到了一定的限制。

获悉更多 近些年来,学者们对吗啡耐受的机制从细胞和分子水平进行了大量研究,为临床上更加有效应用吗啡治疗疼痛提供了重要理论依据。然而,到目前为止吗啡的镇痛和耐受机制尚不完全清楚。有研究发现中枢神经系统的P2X4受体和小胶质细胞在神经病理性疼痛中充当重要作用,p38MAPK信号通道也参与其作用过程,肿瘤坏死因子和白介素1β等细胞因子以及神经递质脑源性神经生长因子对神经病理性疼痛和吗啡耐受的形成也有一定的作用。而且,最近有文献报道,吗啡能够通过P2X4受体途径对小胶质细胞的迁徙产生影响。 由于神经病理性疼痛和吗啡耐受在发生和发展上有许多共同机制,因此本研究推断P2X4R/p38MAPK可能也参与吗啡耐受的形成,并发挥重要作用。为论证上述假说,本实验拟进行一下两方面的研究：(1)吗啡耐受对脊髓和背根神经节P2X4受体表达和小胶质细胞激活的影响；(2)探讨嘌呤受体拮抗剂TNP-ATP(P1-4受体拮抗剂)和PPADS(P1,2,3,5,7受体拮抗剂)对吗啡耐受的作用及其作用机制。本研究有助于进一步揭示吗啡耐受机制,特别是P2X4受体在吗啡耐受机制中的作用,并为研制开发新型的镇痛药提供理论依据。 更多 目的 观察慢性吗啡耐受对大鼠痛阈的影响 方法 12只成年雄性SD大鼠,质量250-300g,鞘内置管成功后,随机分为2组(n=6),NS组：大鼠经鞘内置管并注入生理盐水；MOR组：大鼠并经鞘内置管注入吗啡10μg,每天两次。鞘内置管3d后,开始鞘内输注生理盐水或吗啡,鞘内注射5d后建立大鼠慢性吗啡耐受模型。 结果 与NS组比较,MOR组鞘内注射吗啡后大鼠第1天痛敏阈值明显上升,而第3,5,7天痛敏阈值逐渐下降,并在鞘内注射吗啡第7日降至最低点。 结论 连续7天鞘内注射吗啡能够导致大鼠发生慢性吗啡耐受。 目的 1.观察慢性吗啡耐受对大鼠脊髓背角小胶质细胞激活的影响 2.

2±1.54个/孔VS61.5±2.12个／孔,P<0.01]；凋亡率增加[18.3±0.82%VS21.32±0.56%,P<0.01]和[27.14±1.58%VS42.45±4.42%,P<0.01]；凋亡率显著增加[37.85±3.18%VS52.27±4.36%,P
研究背景及意义 银配合物已经被研究证明具有抗菌、抗肿瘤特性。单质子化的脱氢脱甲基斑螯酸银配聚物(Ag-SP-DNC)是我们合作课题组在前期的实验研究中新合成的银配聚物。在这项研究中,我们得到的实验结果表明Ag-SP-DNC是通过活性氧(ROS)介导的线粒体依赖性细胞凋亡通路导致肺癌细胞发生凋亡。Ag-SP-DNC对人非小细胞肺癌细胞A549有生长抑制作用,将细胞周期抑制于G2/M期,导致细胞发生凋亡。Ag-SP-DNC引起细胞发生凋亡是与细胞内活性氧(ROS)的水平密切相关。进一步研究证明Ag-SP-DNC可破坏细胞线粒体膜电位,诱导caspase-3活化促使凋亡诱导因子AIF、EndoG从线粒体转移到细胞核诱导细胞发生凋亡。这个研究的意义在于为开发银化合物为新的抗肿瘤药物提供实验依据。

Dabrafenib 方法 1.常规复苏、培养人非小细胞肺癌细胞株A549细胞至对数生长期备用。 2.MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测细胞生存率。 3.SRB(磺酰罗丹明B)法检测细胞存活率。 4.PI单染流式细胞术检测细胞周期情况。 5. DTNB[二硫代二硝基苯甲酸]法检测细胞内GSH水平。 6.倒置显微镜下观察A549细胞形态学变化。 查找协议 7. TRITC—鬼笔环肽标记扫描共聚焦显微镜观察细胞微丝骨架。 8. Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪分析细胞凋亡率。 9.JC-1标记流式细胞仪分析细胞线粒体膜电位。 10.荧光探针DCFH-DA进行细胞内活性氧水平检测 11.caspase-3(Asp175) antibody (Alexa fluor488conjugate)标记流式细胞术检测细胞内caspase-3活化水平。 12.Fluo-3/AM标记流式细胞术检测细胞内游离Ca2+水平。 13. Western blot检测细胞内AIF, EndoG, Bcl-2, P53等凋亡相关蛋白表达。 14.实验结果采用SPSS16.0软件进行Student’s T test, P<0.05表示有显著差异,P
恶性肿瘤正成为威胁人类生命健康的头号疾病。目前临床上应用的直接作用于细胞有丝分裂、DNA合成和修复等过程的传统细胞毒类药物存在选择性低、毒性大等缺点。因此,以与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号通路的关键酶作为药物筛选靶点,寻找选择性作用于特定靶点的新型抗癌药物已成为当今抗肿瘤药物研发的重要方向。这些小分子抑制剂与传统的肿瘤治疗药物相比往往具有更好的疗效和较小的毒副作用。磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide3-kinase,

PI3K)是细胞生命活动中的关键信号分子。PI3K介导的信号通路是细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,控制着细胞生长、增殖、存活、分化、调亡、转移、代谢、转录和翻译等多种细胞生物学过程。大量研究表明PI3K/Akt信号通路与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。以该信号通路中关键酶为靶点的抗肿瘤药物研究成为肿瘤预防和肿瘤靶向治疗的热点之一。 BENC-511是本研究室发现的3-硝基-2H-苯并吡喃类抗肿瘤衍生物,在体内外均表现出良好的抗肿瘤活性。BENC-511的药理学特点主要表现为：1)通过作用于PI3K/Akt信号通路,抑制肿瘤细胞中Akt的磷酸化及下游蛋白mTOR/p70S6K、4E-BP-1的表达；2)通过诱导肿瘤细胞凋亡相关蛋白PARP的裂解,活化caspase-3,诱导肿瘤细胞的凋亡；3)在体外,BENC-511对包含血液瘤、固体瘤等10余种肿瘤细胞的生长均有较强的抑制作用；4)在多发性骨髓瘤(OPM2,

RPMI-8226)异种移植模型中,小鼠口服给药50mg/kg/d,连续给药20天,与对照组相比,BENC-511对肿瘤生长的抑制率高达75%以上,而对小鼠肝脏酶、血液生化指标等没有影响,未观察到任何毒副作用。因此,BENC-511是一个靶向作用于PI3K/Akt通路、具有良好抗肿瘤活性和较低毒性的好的苗头化合物。 为了寻找抗肿瘤活性和选择性更好的3-硝基-2H-苯并吡喃类化合物,我们以BENC-511为先导化合物,以计算机辅助药物设计方法为指导,结合PI3K激酶以及下游信号通路关键酶的三维结构对其进行结构修饰,确定6位为主要的结构修饰位点。我们以氨基取代6位的溴,然后在伯氨基上引入不同的酰基侧链,设计了一系列酰胺衍生物。以3-乙氧基水杨醛为起始原料,经硝化,醛基、酚羟基保护,钯-碳催化氢化还原,氨基Boc保护,醛基脱保护以及环合反应得到6-叔丁氧甲酰氨基-3-硝基-8-乙氧基-2H-苯并吡喃关键中间体。在酸性条件下脱掉氨基的Boc保护基,与不同取代的羧酸,在EDCI/HOBt的经典条件下,缩合得到目标化合物。 获悉更多 本研究共合成BENC-511类似物24个,并对其抗肿瘤活性做了初步研究。体外细胞(K562, DU145和Hela)活性筛选试验结果显示,这一系列化合物对白血病K562细胞和前列腺癌DU145细胞均表现出较好的抑制活性,对子宫颈癌Hela细胞抑制活性较弱。其中,化合物KGS-19、KGS-22和KGS-24具有良好的抗肿瘤活性,对K562细胞的IC50值分别为0.53、0.43和0.44μM,对DU145细胞的IC50值分别为1.20、1.99和2.84μM,对Hela细胞的IC50值分别为4.66、2.36和1.70μM；进一步的抗肿瘤作用机制研究正在进行。
目的：分析Her-2表达与中早期胃癌临床病理特征及预后的相关性，为曲妥珠单抗在中早期胃癌术后患者的临床应用提供依据。 方法：收集2008年1月至2013年1月我院I~III期胃癌术后患者临床资料，Her-2的检测采用免疫组织化学法。采用门诊复查或电话随访的方式进行生存期随访，随访工作结束于2013年10月。总生存时间为手术日至患者死亡或随访截止日期。将数据分成两组，Her-2表达阳性组和Her-2表达阴性组。应用SPSS17.

01)水平均低于老年对照组,小剂量组的TC(P＜0.05)、LDL-C(P＜0.01)水平低于与老年对照组,两个他汀组的HDL-C水平与老年对照组无差异(P＞0.05),大剂量组降低TC和LDL-C的作用较小剂量组更显著(P＜0.05);他汀组的脂褐素、β-半乳糖苷酶、MDA含量较老年对照组均显著降低,CAT、NOS、SOD活性均显著增高(P＜0.01)。3.老年大鼠心肌IL-1β、TNF-α和MMP-9的mRNA和蛋白表达水平均较青年大鼠显著增加(P＜0.01);他汀组的IL-1β、TNF-α和MMP-9的mRNA和蛋白表达水平均较老年大鼠显著降低(P＜0.01);大剂量组的作用更显著。4.老年大鼠心肌PPARα、PPARβ/δ和PPARγ三个亚型在mRNA和蛋白水平的表达均较青年组明显降低(P＜0.01);他汀组心肌PPARα、PPARβ/δ和PPARγ三个亚型在mRNA和蛋白水平的表达均较老年大鼠显著增高(P＜0.01)。5.分离培养的老年大鼠心肌细胞的研究中发现,溶剂对照组与空白对照组IL-1β、TNF-α和MMP-9的mRNA和蛋白表达水平均无显著差异(P＞0.05);阿托伐他汀组IL-1β、TNF-α和MMP-9的mRNA和蛋白表达水平均显著低于空白对照组(P＜0.01);PPARs拮抗剂加他汀组IL-1β、TNF-α和MMP-9的mRNA和蛋白表达水平均高于阿托伐他汀组(P＜0.05)。

结论:1.老年大鼠的老化指标如血压、血脂水平,心肌肥厚程度、心肌胶原比例,心肌细胞凋亡数,衰老特异性β-半乳糖苷酶、MDA含量,CAT、NOS、SOD活性等均较青年大鼠有显著改变,阿托伐他汀干预可逆转上述改变。2.老年大鼠心肌炎性因子IL-1β、TNF-α和MMP-9的表达显著增强,阿托伐他汀可抑制上述炎性因子在心肌的表达。3.老年大鼠心肌PPARα、PPARβ/δ和PPARγ三个亚型的表达水平均显著降低,阿托伐他汀干预可上调老年大鼠心肌PPARs三个亚型的表达水平。4.阿托伐他汀抑制老年大鼠心脏炎性因子IL-1β、TNF-α和MMP-9表达的作用机制至少部分与其激活PPARs途径有关。
Egr-1与骨桥蛋白在大鼠血管平滑肌细胞中的相关性及其机制的研究 点击此处 前言 动脉粥样硬化性疾病、血管重建术后再狭窄(restenosis,RS)、高血压等血管重塑相关性疾病已经愈来愈严重地威胁着人类的健康。目前认为,血管中膜平滑肌细胞(smooth

muscle cell,SMC)向内膜下迁移与增殖是血管重塑的主要病理基础之一。 研究表明,某些转录因子(transcription factors,TF)可以调节多个血管平滑肌细胞(vascular PLX 4720 smooth muscle cell,VSMC)增殖相关基因的表达,从不同层面调控VSMC的迁移与增殖。同时,人们也逐渐注意到细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在血管重塑过程中的重要地位。研究发现,ECM在各种外界刺激的作用下,可以作为细胞外信号,经跨膜信号传递系统到达核内,激活一系列调控VSMC增殖的TF,从而推动VSMC的分裂、迁移及增殖。TF与ECM在血管重塑的过程中密不可分,因此将二者有机地联系在一起,并对其相互作用关系进行深入探讨,将有助于全面了解血管重塑的细胞与分子机制。 早期生长反应因子-1(eally growth response factor-1,Egr-1)作为一种锌指结构TF,参与多种基因的调控,与细胞增殖关系密切。大量研究表明,Egr-1在介导VSMC迁移、增殖过程中发挥着重要的作用,成为目前血管重塑机制研究中的焦点。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)作为ECM中一种重要的功能性蛋白,被认为是血管损伤重塑过程中重要的始动因素,应用抗OPN抗体可以抑制VSMC的表型转化、迁移和增殖。尽管Egr-1和OPN在介导VSMC迁移、增殖过程中均起着重要的作用,但二者之间的关系尚不清楚。 本课题拟在以往研究的基础上,对培养的大鼠主动脉VSMCs分别稳定转染Egr-1、OPN基因,并检测转染前后OPN与Egr-1的表达变化,从而分析二者的相关性。并应用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)方法检测Egr-1与OPN启动子的结合情况,同时通过向OPN稳定转染细胞株中加入细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular

signal-regulated kinase,ERK)的磷酸化抑制剂,检测抑制ERK磷酸化后,OPN上调Egr-1的水平变化,从而对Egr-1与OPN相关性的内在机制进行深入探讨,并为抑制VSMC的迁移、增殖,控制血管壁的不适当重塑提供理论及实验基础。 材料与方法 更多 1、大鼠VSMC的培养 大鼠A10主动脉VSMC细胞株购自ATCC细胞库,用含10%胎牛血清(fetalbovine serum,FBS)的DMEM培养基,在37℃、5%CO_2、饱和湿度的培养箱中培养,用0.25%的胰酶消化、传代。 2、质粒的提纯、扩增及稳定转染 委托TaKaRa公司对pCMV-Egr-1/NEO、pCMV(-)/NEO质粒及pET-28-rOPN/NEO、pET-28(-)/NEO质粒进行提纯、扩增及鉴定,其中pET-28-rOPN/NEO和pET-28(-)/NEO质粒被连于CMV启动子上,以便在VSMC中表达。 待培养的VSMCs生长到80%汇合度时,以100μg/ml～1mg/ml的新霉素(neomycin418,G418)浓度进行最低G418浓度筛选。当培养的VSMCs在6孔板内达到80%汇合度时,应用FuGENE6分别向VSMCs内转染pCMV-Egr-1/NEO、pCMV(-)/NEO质粒及pCMV-ET-28-rOPN/NEO、pCMV-ET-28(-)/NEO质粒。细胞转染24小时(hour,h)后,加入400μg/ml G418的培养液进行培养。2周后,采用有限稀释法将细胞传至96孔板中进行单克隆化培养(于含200μg/ml G418的条件培养液中),待长满后进行扩大培养,并检测细胞中Egr-1、OPNmRNA的表达。 3、应用ERK磷酸化抑制剂阻断ERK信号传导通路 当OPN稳定转染的VSMCs生长至80%汇合度时,向细胞培养液中加入10μMERK磷酸化抑制剂PD98059,继续培养24h后,进行Western blot检测。 4、反转录多聚酶链反应(reverse transcriptase polymerase chainreaction,RT-PCR)检测Egr-1、OPNmRNA 用Trizol Reagent提取VSMCs的总RNA。用RNA PCR Kit Ver.3.