05),M组凋亡率显著低于S+M组(P
Objective Inactivated Sendai virus particle[hemagglutinating virus of Japan envelope(HVJ-E)]has a potential oncolytic effect due to its ability to induce apoptosis in tumor cells.However,the molecular mechanism of apoptosis induction in cancer cells mediated by HVJ-E has not been fully elucidated.This www.selleck.cn/products/blz945.html paper aims to investigate the underlying mechanism of apoptosis induction by HVJ-E in prostate cancer cells(PC3).Methods PC3 cells were treated with HVJ-E at various MOI,and then interferon-6(IFN-S) production,and the cell viability and

apoptosis were detected by ELISA,MTT-based assay and flow cytometry,respectively.Next,the roles of Jak-Stat,MAPK and Akt pathways played in HVJ-E-induced apoptosis in PC3 cells were analyzed by immunoblot assay.To further evaluate the cytotoxic effect of HVJ-E on PC3 cells,HVJ-E was intratumorally injected into prostate cancers on BALB/c-nude mice,and the tumor volume was monitored for 36 days.Results HVJ-E induced IFN-β production and activated Jak-Stat signaling pathway,which resulted

in the activation of caspase-8,caspase-3,and SCH772984小白鼠 PARP in PC3 prostate cancer cells post HVJ-E treatment.Furthermore,we observed for the first time that p38 and Jnk MAPKs in PC3 cells contributed to HVJ-E-induced apoptosis.In addition,intratumoral HVJ-E treatment displayed a direct inhibitory effect in an in vivo BALB/c nude mouse prostate cancer model.Conclusion Our findings have provided novel insights into the underlying mechanisms by which HVJ-E induces apoptosis in tumor

cells.
饮酒对中枢神经系统有重大影响,小胶质细胞是脑内原位免疫效应细胞,它在乙醇引起的神经毒性中有重要作用,可导致神经元死亡与退行性变;小胶质细胞有利于维持稳态而不是导致神经退行性变,小胶质细胞活化是乙醇引起损害的结果而不是损害的原因。本文对乙醇引起的神经元死亡和退行性变中小胶质细胞的反应及相应机制作一综述。
目的:探讨NDRG2在热疗诱导的热应激抗肝癌细胞侵袭中所发挥的作用和机制研究。方法:构建NDRG2过表达和干涉表达的HepG-2细胞稳转细胞株,通过Transwell和Western-blot方法检测了和细胞侵袭力和细胞内NDRG2、MMP-2和MMP-9的表达量变化;构建荷瘤鼠模型,通过HE染色及免疫组化方法检测并对比了热对肿瘤细胞向周围肌肉组织的侵袭抑制作用。结果:给予NDRG2过表达的HepG-2细胞45℃、30min热处理后,细胞内NDRG2的表达明显增高,同时伴随细胞侵袭力、MMP-2和MMP-9的表达明显降低(P
目的:研究血小板源性生长因子(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMC)G0S2基因mRNA表达的调控,并初步探讨其机制。方法:体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,逆转录实时定量聚合酶联反应(RT-QPCR)法测定PDGF-BBJVSMC中G0S2 购买LY2835219 mRNA表达影响的时效关系和量效关系;运用不同细胞信号通路阻断剂处理,研究PDGF-BB影响G0S2 mRNA表达的信号途径;转染含有G0S2基因启动子的荧光素酶报告基因质粒pGL3-G0S2-Promotor,检测PDGF-BB对G0S2基因启动子活性的影响。结果:PDGF-BB能够增加平滑肌细胞G0S2 mRNA表达,PDGF-BB诱导VSMC表达G0S2mRNA在12h后达峰值[20ng/ml增加(2.83±0.81)倍;10ng/ml增加(2.99±0.

05);在4h和6h时,C组和D组Pa02明显高于B组(P0.05)。 CRM1抑制剂 2.注射内毒素各组动物的血浆TNF-α浓度进行性升高,在1h后各时间点B组、C组和D组的血浆TNF-α浓度均显著高于A组(P0.05)。在4h和6h时,C组和D组血浆TNF-α浓度明显低于B组(P0.05)。 3.实验动物注射内毒素1h后,sICAM-1的浓度较对照组表达值显著升高(p0.05);在4h和6h时,C组和D组血浆sICAM-1浓度明显低于B组(P0.05)。 4.各实验组动物注射内毒素1h后,PMN中磷酸化p38 MAPK的含量较对照组显著升高(p0.05)。 5.对照组(A组)肺组织中NF-κB的活性较弱,内毒素组NF-κB的活性明显增加,是对照组的3.58±0.31倍;C组(为A组的1.56±0.21倍)和D(为A组的1.76±0.24倍)NF-κB的活性较B组明显降低(p0.05)。 6.对B组1、2、4、6小时p38 MAPK与TNF-α、sICAM-1的相关性分析表明,p38 MAPK与TNF-α、sICAM-1之间存在显著相关性(分别为:r=0.722,0.792,0.808,0.793, P
研究目的: 1.通过建立SD大鼠心肌缺血预处理模型,取血清测心肌酶谱并观察心肌的组织切片和超微结构,评估预处理心肌保护作用。 2.通过观察心肌缺血预处理过程中PTK活性的变化,旨在探讨心肌缺血预处理第一相对心肌细胞蛋白质的磷酸化的调控作用。 3.通过应用大鼠在体缺血/再灌注模型,探讨心肌缺血预处理第一相对一氧化氮合酶—一氧化氮系统的影响。

4.通过应用大鼠在体缺血/再灌注模型,探讨心肌缺血预处理第一相时第二信使系统的变化及其意义。 方法和结果:本研究共分四部分 第一部分:SD大鼠心肌缺血预处理模型的建立及评估方法:首先应用套管法制作在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型:用手术套管法造成左冠状动脉主干缺血及再灌注。实验中以左室前壁紫绀及同步心电图标S-T段抬高为结扎成功标志。实验动物随机分为缺血预处理组、缺血/再灌注组、假手术组。实验结束后,取血离心分离血清,检测心肌酶谱CK,CK-MB,LDH的活性。采用电子透射显微镜观察心肌超微结构的变化。

Microbiology抑制剂 结果: CK,CK-MB,LDH缺血预处理组较缺血/再灌注组显著降低,缺血预处理组与假手术组之间,CK、CK-MB显著差异,LDH未见明显差异。缺血预处理组:少数线粒体轻、中度固缩或肿胀,嵴排列尚整齐,偶见断裂;肌节清晰,可见小灶性肌丝溶解;内质网轻度扩张;仍可见糖原颗粒;肌纤维排列尚整齐。 第二部分:心肌缺血预处理对细胞蛋白质磷酸化的调控作用的实验研究 方法:应用套管法制作在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型。随机分为预处理组、缺血/再灌注组、假手术组、预处理程序组。预处理程序组根据预处理程序进一步分为第1,2,3次缺血组和第1,2,3次再灌注组。于实验程序结束取心肌匀浆后,离心制备胞浆,Lowry法测定蛋白含量,生化法测定PTK活性。 结果:缺血预处理组PTK活性明显高于缺血再灌注组,两者间存在显著性差异。PTK含量随缺血及再灌注呈周期性波动。5min缺血期相对于同一周期中的5min再灌注期显著差异。5min缺血预处理时明显增高,间隔再灌注时明显下降。 第三部分心肌缺血预处理对一氧化氮合酶-一氧化氮系统的影响 方法:取上清用于NO含量及NOS的活性测量。心肌石蜡包埋,SABC法内皮型NOS免疫组织化学分析。 结果: NO含量及NOS活性缺血预处理组高于缺血/再灌注组,差别显著。持续缺血前预处理程序中NO含量随缺血及再灌注呈周期性波动。NO在预处理程序中,5min缺血期相对于同一周期中的5min再灌注期存在显著性差异。5min缺血时明显增高,间隔再灌注明显下降。内皮型NOS在心肌缺血预处理组及缺血/再灌注组中均有表达。内皮型NOS含量在缺血预处理组明显高于缺血/再灌注组,灰度平均值两组也存在显著性差异。

第四部分:第二信使在缺血预处理第一相中介导作用的实验研究 方法:所有实验动物在实验程序结束后,胞浆应用放射免疫法测量cAMP,cGMP含量及cAMP/cGMP的变化。 结果:缺血预处理组cAMP,cGMP含量明显高于缺血/再灌注组,两者存在显著性差异。心肌缺血预处理程序中cAMP,cGMP含量随缺血及再灌注呈周期性波动。预处理程序中,cAMP,cGMP含量5min缺血期相对于同一周期中的5min再灌注期,差异显著。5min缺血预处理时明显增高,间隔再灌注程序中明显下降。 结论: 1.本实验应用大鼠左冠状动脉主干反复缺血/再灌注损伤建立心肌缺血预处理模型。 点击此处 2.心肌缺血预处理可维持细胞膜完整性,减少心肌酶漏出。短暂、多次缺血预处理能保护心肌细胞的超微结构,证实缺血预处理现象确有保护心肌、改善预后的作用。 3.蛋白酪氨酸激酶在心肌缺血预处理中可能使蛋白质磷酸化而起作用,可能是激发心肌缺血预处理,参与缺血预处理第一相心肌保护作用。 4.心肌缺血预处理第一相中一氧化氮可能是激发者和中介者,主要原因是一氧化氮合酶活性的改变。 5.第二信使可能中介心肌缺血预处理的心肌保护作用。cAMP,cGMP含量周期性波动可能激发心肌缺血预处理的心肌保护作用。
目的 观察中药复方制剂—复元胶囊(简称FYC)对兔膝骨关节炎(OA)模型关节软骨的组织形态学及MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、IL-1β、TGF-β2表达的影响;研究FYC含药血清对软骨细胞增殖和P38信号通路的干预作用,探讨FYC对骨关节炎软骨退变的防治作用及可能的作用机理。 方法 1.选用健康新西兰大白兔66只,用改良Hulth法制备兔膝骨关节炎模型,以FYC灌胃为干预治疗手段,观察各组股骨内髁关节软骨大体、光镜和电镜下的病理变化。采用免疫组化法检测退变膝关节软骨MMP-13、TIMP-2、IL-1β及TGF-β2的蛋白质水平,RT-PCR法检测MMP-13、TIMP-1、TIMP-2mRNA的表达。从骨关节炎软骨的破坏因素和保护因素,从mRNA转录水平到蛋白质表达水平,多层次、多角度观察FYC对骨关节炎软骨退变的影响。 2.选用健康21-28d龄SD大鼠,用酶消化法原代培养软骨细胞,给予不同浓度的FYC含药血清(0%、5%、10%、20%)刺激第3代软骨细胞,作用时间分别为24h、48h、72h,采用MTT法检测FYC含药血清对软骨细胞的增殖,根据OD值选择FYC含药血清的最佳作用浓度和最佳作用时间纳入后续试验。细胞化学免疫法检测Ⅱ型胶原表达以鉴定软骨细胞。采用Western blot法研究FYC含药血清对软骨细胞中p-p38和MMP-13表达的干预作用,从信号通路的途径,探讨FYC防治骨关节炎软骨退变的可能作用机制。 结果: 1.

角膜缝线法建立SD大鼠角膜新生血管模型建立大鼠右眼新生血管模型,在大鼠角膜缘内1mm等间距缝合3针,深及基质层。选取未缝线的正常角膜作为阴性对照组,并将缝线后大鼠随机分为缝线后第1日组,第3日组以及第7日组,每组8只。

2.显微镜下观察角膜缝线后每日在手术显微镜下观察,均放大16倍,注意角膜透明度、上皮完整性、缝线数量以及是否存在角膜感染。 所以 3.计算角膜新生血管面积计算角膜缝线后第1日、第3日以及第7日,分别在显微镜下测量角膜新生血管长度,并依据Robert公式计算角膜新生血管面积。 4. Western Blot检测缝线后角膜血管化进程中p38和磷酸化p38的表达缝线当日以及缝线后第1、3、7日,分别从各组随机选取5只大鼠,摘取角膜,收集角膜蛋白,采用Western Blot方法检测各组角膜p38以及磷酸化p38的表达,并检测目的蛋白IOD与内参GAPDH的IOD,二者比值作为目的蛋白的相对表达量。 5.免疫荧光检测p38和磷酸化p38在角膜上的表达按照分组分别在特定时间摘取角膜,采用免疫荧光的方法检测p38和磷酸化p38在角膜的表达以及定位。 6.统计学分析采用SPSS13.0软件分析,计量资料以均数±标准差表示。当方差齐性时,采用one-way ANOVA分析；方差不齐时采用Welch法校正。组间比较,当方差齐性时,采用LSD分析；当方差不齐性时,采用Dunnett T3进行分析。所有统计推断均采用双侧检验,检验水准α=0.05。 结果 1.显微镜下观察缝线后7d,角膜缘血管网充血,缝线处角膜水肿增厚,并随时间延长逐渐加重,缝线后3d,睫状充血明显,角膜缝线处角膜缘明显局限性充血,可见新生血管缓慢长入,每处约2-5支,缝线处角膜未见明显混浊,全角膜透明；缝线后7d,见大量新生血管长入透明角膜,新生血管呈密集网状,无法计数,部分新生血管长到缝线处,缝线处角膜轻度混浊并增厚。

2.角膜新生血管面积缝线后第1日,未发现新生血管；缝线后3、7d,角膜新生血管面积分别为4.1-1.22、7.26±0.72mm2；而正常角膜无新生血管。 还有 3.Western Blot结果 各组角膜p38的相对表达量为：正常角膜组0.5681±0.1074,缝线后第1日组为0.5512±0.0795,第3日组为0.5517±0.0908,第7日组为0.5641±0.1168；不同实验组间p38的表达量无显著性差异(F=0.037,P=0.990)。 各组角膜磷酸化p38的相对表达量为：正常角膜组0.2969±0.0475,缝线后第1日组0.6219±0.0609,第3日组0.2812±0.0602,第7日组为0.3149±0.0496；不同组之间磷酸化p38相对表达量有显著性差异(F=43.895,P=0.000)；以缝线后第1日最高,缝线后第3、7日次之；而正常角膜与缝线后第3、7日无显著性差异。 4.免疫荧光结果各组p38表达基本一致,主要分布在炎性浸润细胞,新生血管内皮细胞以及部分上皮细胞,主要定位于细胞浆；而磷酸化p38表达在炎性细胞、新生血管内皮细胞,主要定位于细胞核,在缝线后第1日高表达。

许多 结论 1.在大鼠角膜血管化进程中,p38表达基本恒定；而磷酸化p38在缝线后第1日,即出现高峰表达,而后迅速衰减,至缝线后第3、7日已基本恢复至正常。 2.大鼠角膜缝线后,早期即有p38信号通路的强激活,而后逐渐出现可观察到的角膜新生血管。 3.缝线后大鼠角膜新生血管化可能与p38信号传导通路激活相关。 4.p38信号传导通路的早期激活可能是缝线后角膜新生血管生长的始动因素之一。 第二部分结膜下注射50μmol/L p38信号传导通路抑制剂SB203580对大鼠角膜的毒性作用 目的 研究结膜下注射SB203580对大鼠角膜的毒性作用,探索结膜下注射SB203580的合适浓度,探讨结膜下注射SB203580用于阻断p38信号传导通路的可能性,为后续实验奠定基础。 方法 1.配置50μmol/L SB203580溶液取0.05mL预冷的二甲基亚砜加入1mgSB203580中,振荡,然后加入预冷的生理盐水53.00mL,充分振荡混匀。按每支1mL分装于无菌冻存管中,-20℃冻存备用。 2.实验分组SD大鼠适应性饲养1周,裂隙灯显微镜检查排除大鼠结膜、角膜疾病后,随机分为50μmol/L SB203580组和生理盐水组,每组10只。 3.结膜下注射均选右眼进行实验,在角膜缘外0.5～1.0mm,沿顺时针方向,在12,2,4,6,8,10,12点位注射,依次每日选取1个注射点,每日1次行结膜下注射,共7d。按照实验分组分别注射50μmol/L SB203580和生理盐水0.04mL。 4.实验观察以及角膜炎症指数评分在裂隙灯显微镜下观察注射点结膜充血情况、角膜透明情况以及上皮是否完整等。结膜下注射7d后,在裂隙灯下观察中央角膜水肿程度、周边角膜水肿程度以及睫状充血程度行角膜炎症指数评分。 5.组织学及透射电镜观察结膜下注射7d后,摘取角膜,沿中心线剖切一分为二。一半用40g/L多聚甲醛固定,常规制作石蜡切片,苏木精-伊红染色观察组织学改变；另一半迅速用预冷的25g/L戊二醛固定,常规丙酮梯度脱水、渗透、包埋,超薄切片,醋酸铀及柠檬酸铅双重染色,透射电镜观察。 6.统计学分析采用SPSS13.0软件分析,计量资料以均数±标准差表示,组间比较采用T检验,所有统计推断均采用双侧检验,检验水准a=0.05。 结果 1.动物观察裂隙灯显微镜下观察发现SB203580注射部位结膜呈可逆性贫血状改变,注射次日即消失；在注射过程中,连续观察见角膜始终透明,上皮层无水肿、无剥脱。 2.在连续结膜下注射SB203580或生理盐水7d后,两组大鼠角膜炎症指数分别为：0.14±0.07,0.21±0.10,两组间炎症指数无显著性差异(t=1.716,P=0.103)；其中两组睫状充血程度评分分别为：0.70±0.48和1.30±0.67,生理盐水组睫状充血程度评分显著高于SB203580组(t=2.286,P=0.035)。 3.

Autophagy of MSCs was analyzed by flow cytometry and transmission electron microscopy, and the expression of beclin Ⅰ?and LC3-Ⅱ was detected by Western blot. MSCs were labeled in vivo with the fluorescent dye, CM-Dil, and subsequently transplanted into the portal veins of rats that had undergone HIRI. Liver levels of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) were quantified by fluorescent microscopy. Serum selleck抑制剂 aminotransferase activity and the extent of HIRI were also assessed at each time point.RESULTS: HSP for 2 h reduced apoptosis of MSCs induced by H2O2 as seen by a decrease in apoptotic rate, a decrease in Bax and cytochrome C expression

and an increase in Bcl-2 expression(P < 0.001). In addition, HSP for 2 h induced autophagy of MSCs exposed to H2O2 as shown by an increase in acidic vesicular organelle-positive cells, beclin 1 and LC3-Ⅱ expression, and autophagosome formation(P < 0.05). Treatment with 3-methyladenine attenuated HSPinduced autophagy and abolished the protective effects of HSP on the apoptosis of MSCs. Rapamycin failed to have additional effects on either autophagy or apoptosis compared with HSP

alone. The phosphorylation of p38 MAPK was significantly elevated and the phosphorylation of m TOR was downregulated in heat shock pretreated MSCs. Treatment with the p38 MAPK inhibitor, SB203580, reduced HSP-induced autophagy in MSCs. In vivo studies showed that the transplantation of HSP-MSCs Protein Tyrosine激酶抑制剂 resulted in lower serum aminotransferase levels, lower Suzuki scores, improved histopathology and an increase in PCNA-positive

cells(P < 0.05).CONCLUSION: HSP effectively induces autophagy following exposure to H2O2 via the p38MAPK/m TOR pathway, which leads to enhanced MSC survival and improved MSC repair following HIRI in rats.
目的研究参苓白术散抗脂多糖(LPS)诱导肠隐窝上皮细胞(IEC-6)损伤作用及其机制。方法用200μg·mL~(-1)LPS复制模型,将IEC-6细胞分为10组:空白对照组,模型组,低(4%)、中(8%)、高(16%)剂量参苓白术散含药血清组,10%胎牛血清(FBS)阴性对照组,ROCK阻断剂Y27632组,MLCK阻断剂ML-7组,MAPK抑制剂SB203580组,ERK抑制剂PD98059组。通过MTT法检测LPS细胞毒性;用蛋白质印迹法(western BVD 523 blot)检测p38MAPK、ERK1/2通路蛋白水平;用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的表达;通过激光共聚焦测定细胞骨架结构蛋白纤维肌动蛋白(F-actin)的变化。结果 MTT实验中,不同浓度的LPS对IEC-6有不同程度的抑制、损伤作用。Western blot和RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,模型组IEC-6细胞p38MAPK、磷酸化ERK1/2、TNF-αmRNA水平明显上升;而参苓白术散含药血清对其有明显的下调作用(P<0.01,P<0.05)。激光共聚焦检测F-actin实验中,模型组与空白组比较细胞微丝纤维表达显著增多;而参苓白术散含药血清组相对于模型组,细胞微丝纤维表达明显下降。结论参苓白术散含药血清对LPS诱导的IEC-6细胞损伤具有保护作用。
目的探讨血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)过表达对小鼠间充质干细胞(MSC)迁移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法将正常小鼠MSC(C3)、转染空载体的小鼠MSC(C3+N)和基因修饰过表达VCAM-1的小鼠MSC(C3+VCAM-1)分别接种在Transwell培养体系培养8和12 h,以胎牛血清为趋化物质诱导MSC迁移。甲紫(结晶紫)和DAPI染色法观察并计数各组细胞的迁移细胞数和迁移率。利用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路抑制剂〔SB203580,PD98059和Jun激酶(JNK)抑制剂Ⅱ〕阻断细胞活化的信号通路,观察各组MSC迁移能力的改变。结果 MSC在Transwell体系培养8和12 h,C3+VCAM-1组细胞迁移数分别为7467±485和8795±255,迁移率分别为(14.9±1.0)%和(17.6±0.5)%,均显著高于C3组〔2731±562和4779±224;(5.5±1.1)%和(9.6±0.4)%〕和C3+N组〔2539±321和5645±1080;(5.1±0.6)%和(11.3±1.1)%〕(P<0.05,P<0.01)。加入JNK抑制剂Ⅱ可抑制MSC的迁移能力,C3+VCAM-1组迁移的细胞数为4843±167,迁移率为(9.7%±0.