研究背景：肝细胞肝癌（HCC）是预后较差的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率极高。目前，针对肝细胞肝癌的治疗仍以手术切除为主，但由于肝癌细胞对放化疗敏感性较差，且多种生长因子与HCC的发生、发展密切相关，严重影响了手术治疗的预后，单纯手术切除后3年复发率高于50%。因此，寻找可能的方法降低肝癌术后复发率成为亟待解决的问题。类胰岛素生长因子IABT-888 花费（insulin-like growth factor I，IGF-1）是由肝细胞合成和分泌的一种重要生长刺激因子。研究结果表明，IGF-1通过类胰岛素样作用，促进组织摄取葡萄糖，增加细胞对氨基酸和糖原的吸收，刺激糖异生和糖酵解进而促进蛋白质和脂肪合成，在细胞增殖、分裂及凋亡过程中发挥重要影响，而近年来人们开发出一临床试验些针对其受体为靶点的靶向治疗药物，在体外实验取得了不错的效果，但IGF-1在肝癌复发、转移中的作用及机制目前尚未完全阐明。 研究目的：阐述IGF-1对肝细胞癌生长、转移的作用及其作用机制，以及针对其受体的靶向治疗药物PPP的治疗作用及其作用机制，为临床肝癌治疗提供理论依据。 研究内容：MTT方法检测IGF-1对肝癌并且细胞生长作用的影响；平板克隆形成实验检测IGF-1对肿瘤细胞增殖影响；划痕实验及Transwell方法检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力变化；流式细胞术检测肿瘤细胞的细胞周期变化；Western blot方法检测IGF-1受体（IGF-1R）、PI3K/Akt/GSK3β信号通路、细胞周期蛋白cyclin D、Rb、转移相关蛋白E-cadherin、Vimentin、β-catenin的表达水平变化。

此外还利用ECFP4指纹图谱分析抑制剂生物活性与其子结构的关系。 (2)利用多元线性回归和支持向量机建立了极光激酶A抑制剂生物活性的定量预测模型研究。根据抑制剂的三种不同酶学活性测定方式,将抑制剂分成三个子集,分别包括356/302/279个化合物。每个子集用随机和自组织神经网络两种方法划分训练集和测试集,再分别用多元线性回归法和支持向量机建立模型。并对每个子集建立了四个定量预测模Selleck Dolutegravir型。所有模型对测试集的活性值定量预测相关系数R均不小于0.77。模型均通过随机分布法检验,显示出良好的预测能力。 (3)基于极光激酶A抑制剂为配体的虚拟筛选研究。依据分子三维形状相似性和静电相似性,主要利用ROCs和EON软件,探寻建立不同目标查询式(query)的方法,最终选定化合物vx680为query,进行虚拟筛选,从近五百万个小分子数据库中得到50也0个与目标查询式最相似的化合物。这些化合物通过最优分类模型和最优定量预测模型逐一筛选后,得到预测活性值小于10nM的23个化合物。其被认为是具有抑制极光激酶A的苗头化合物。 本研究通过对极光激酶A抑制剂生物活性的分类和定量预测研究,建立了一系列的定性和定量预测模型。通过对极光激酶A抑制剂的三维分子形状和静电相似的虚拟筛选研究,找到了一些潜在的抑制极光激酶ASelleck的苗头化合物。
研究目的及内容： 肿瘤组织中有一种在数量上占少数的干细胞样细胞,它具有无限的增殖能力和分化潜能,是肿瘤形成的起始细胞(CSCs)。CD24低表达或阴性表达细胞群被认为属于乳腺CSCs,乳腺CSCs与上皮间质转换(EMT)之间存在着一定的联系。AURKA是一种癌基因,通过多种途径参与肿瘤的发生、发展。AURKA蛋白也是一种中心体相关激酶,过表达导致中心体扩增、纺锤体形成异常和基因组不稳定性,在肿瘤的转移过程中起重要作用。

结果TSA及MS-275呈浓度及时间依赖性抑制T24细胞增生；T24细胞HDAC酶活性受到高浓度TSA及MS-275的明显抑制；在HDACI作用下T24细胞组蛋白3在72h内逐渐回复乙酰化；TSA及MS-275诱导T24细胞发生早期凋亡；受到HDACI抑制的T24细胞体积减小、排列松散、部分出现凋亡前征象。 结论TSA在MS-275在各自有效浓度下对膀Selleckchem Decitabine胱尿路上皮癌有疗效,可能与抑制增殖、诱导凋亡等相关,两者都有成为治疗膀胱癌新药物的潜力。
2-芳基-喹啉-4-羧酸是一类具有广泛生物活性的化合物。文献曾报道该类化合物具有解热镇痛抗炎、抗氧化、抗肿瘤和抗病毒等药理作用。其中早期在临床中应用的解热镇痛药辛可芬,曾被用于痛风等疾病的治疗。目前该药与泼尼松龙联合使用治疗动物关节炎。Staurosporine供应商近二十年来,针对2-芳基-喹啉-4-羧酸衍生物的设计、合成及生物活性的研究一直没有停止。本论文主要针对前期所发现该类化合物具有荧光检测和抗肿瘤等生物活性进行深入研究 近年来报道的2-芳基硼酸-喹啉-4-羧酸化合物可作为识别糖类物质的水溶性荧光探针。该化合物与糖结合后荧光强度增幅大且结构适于衍生化。本课题组前期曾以该结构为先导,抑制剂设计、合成一系列二硼酸化合物,并对其针对寡糖的识别作用进行了初步研究。本论文在前期工作的基础上,发现2-芳基硼酸-喹啉-4-羧酸与儿茶酚衍生物相互结合后荧光强度大幅降低。针对这一反常现象,经过多个实验证实引起荧光强度降低的现象是由硼酸化合物引起的,且该硼酸化合物与儿茶酚的亲和力比糖类化合物高。由于该化合物与儿茶酚类物质结合后荧光强度变化与糖类物质趋势正好相反,因此也适于作为选择性识别儿茶酚类物质的荧光探针。

在进一步的机制探索中发现,ERa表达可能通过抑制乳腺癌细胞增殖、促进照射后G2/M期阻滞、增加照射后DNA双链断裂、降低细胞对亚致死性损伤的修复、减少细胞自噬、进一步增加细胞凋亡比例等机制增加三阴性乳腺癌细胞的放射敏感性。 第二章PARP抑制剂PJ34对三阴性乳腺癌细胞的放射增敏作用及其机制研究 目的：本课题第一部分DAPT的研究结果显示,三阴性乳腺癌患者中放疗有效,但效应尚需进一步的提高；本课题第二部分的前期基础研究验证了三阴性乳腺癌细胞比ERa型细胞的放射敏感性更低的临床观察,并且发现三阴性乳腺癌细胞更强的DNA损伤修复能力是导致其相对放射抗拒的重要因素,因而我们推测针对性使用靶向DNA损伤修复的药物可能达Obeticholic Acid说明书到放射增敏作用。因此本课题拟从体外研究水平研究第三代PARP抑制剂PJ34这一DNA损伤修复抑制剂对三阴性乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其中的机制。 材料和方法：实验分为空白组、单纯药物组、单纯照射组和药物联合照射组。采用CCK-8法检测不同浓度的PI34对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231Cilengitide供应商(231细胞)的生长抑制作用,并计算IC50值。CCK-8法检测不同浓度的PI34对照射后细胞增殖能力的影响；单次照射细胞克隆形成实验检测不同PI34浓度对231细胞放射敏感性的影响；分次照射克隆形成实验检测PJ34对231细胞亚致死性损伤修复能力的影响；细胞免疫荧光检测不同处理组细胞核γH2AX焦点数的差异；流式细胞仪检测不同处理组细胞周期分布和细胞凋亡之间的差异。

而抑制EZH2功能,可以阻断GSC自我更新及存活相关的多条信号通路,提示EZH2是一个非常有前途的GBM治疗靶点。基于以上研究背景,我们探讨了5种结构非常相似的EZH2抑制剂(EPZ005687,EPZ-6438,UNC1999,GSK343和GSK126)与ABCB1和ABCG2的相互作用。我们先在体外利用Transwell实验对这些化Selleck合物进行了筛选,然后利用野生型(Wild-type, WT), Abcbl和／或Abcg2基因敲除鼠进行了体内实验,进一步研究了EPZ005687,EPZ-6438和GSK126体内药代动力学及BBB透过能力等。本实验发现,虽然GSK126非常低的膜穿透力导致体外实验难以检测其与转运蛋白的亲和力,但是结合体内实验selleck HPLC控制结果,我们发现所有的EZH2抑制剂均可以被ABCB1和ABCG2转运。在体内,ABCB1和ABCG2都限制了EPZ005687和GSK126的BBB穿透力,而EPZ-6438在脑内的累积仅受ABCB1限制,并且ABCB1和ABCG2特异性抑制剂-依克利达可以完全抑制其针对EPZ-6438的外排作用。另外,在本实验Selleck CT99021所用的基因敲除小鼠体内存在一个未探明的因素,它明显延长了EPZ005687和EPZ-6438在敲除鼠血浆内停留时间,而这种现象并没有在GSK126相关的体内实验中发生。在WT小鼠中,所有组织内GSK126的组织-血浆比低于EPZ005687或EPZ-6438的组织-血浆比。此外,GSK126在WT小鼠的口服生物利用度仅为0.2%,在Abcbl;Abcg2基因敲除小鼠这一数值仅增加至14.4%。

这为临床开发帕比司他与MK-1775对AML的联合疗法提供了理论和实验依据。
骨肉瘤是最常见的原发恶性骨肿瘤,尤以15-19岁的青少年多见,其发病率为4／百万,且男性患病率约为女性的1.4倍。目前临床治疗骨肉瘤除手术切除外,化疗仍以阿霉素(ADM)、顺铂(CDDP)、甲氨蝶呤(MTX)为主,随着新辅助化疗的发展,患者5年生存率已上升到6Alectinib小白鼠5-75%。尽管如此,对于治疗骨肉瘤新药的研发却少之又少,而且,对于肺转移和复发的患者,其预后更差,至今尚无有效可行的方案。因此,研发高效低毒的新型抗骨肉瘤药物或化疗增敏药物,可作为目前骨肉瘤治疗中的一大方向。 伏立诺他(辛二酰苯胺异羟肟酸,SAHA)是第一个于2006年经美国食品药品监督管理局(Food and和 Drug Administration, FDA)批准用于临床治疗皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)的组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)类药物,它可通过诱导细胞分化、阻断细胞周期、诱导细胞调控而发挥作用。 顺铂(cisplatin, CDDP),是一种细胞周期非特异性药物,其可通过抑制肿瘤细胞的DNA复制,损伤肿瘤MLN2238溶解度细胞膜的结构,而发挥着较强的抗癌作用并被广泛应用于临床,同时它也是治疗骨肉瘤的一线化疗药物。 鉴于新药研发的困难和应用增敏药物的启示,以及两类药物的作用原理,我们设计了联合用药的相关课题,本课题将通过以下三部分来探讨：SAHA与CDDP联合作用后对骨肉瘤细胞的增殖抑制情况；体内抑瘤效果；以及二者作用的可能分子机制。这对进一步揭示骨肉瘤的发病机制具有重要意义,并为骨肉瘤患者的临床治疗带来新的思路。

而经JZ003、样3处理后，各组细胞均未见明显生长抑制作用。 二、HDACi诱导结肠癌细胞凋亡及其机制探讨 选取经药物筛选后功效较为显著的JZ004作用于较为敏感的结肠癌细胞（HT-29和HCT-8），利用流式细胞仪检测细胞周期停滞、细胞凋亡，Rhodamine123和DCFH-DA测定细胞线粒体膜跨膜电位及ROS产生的变化，免疫印迹法（Western b有lot法）检测细胞内Acetylated histone H3、p21、CDK4、Bcl-2、Bax、Mcl-1等相关蛋白的表达水平。观察JZ004对肿瘤细胞生长和凋亡的影响，并对JZ004抗癌的机制作初步的探讨。 结果：流式分析结果显示，实验组结肠癌细胞HCT-8、HT-29凋亡率随药物浓度增高而增加；JZ004处理72h后，pTGF-beta抑制剂21表达水平上调，CDK4蛋白表达下降，细胞周期停滞于G0/G1期而抑制细胞的生长，细胞内ROS产生增多，且线粒体跨膜电位显著下降，促凋亡蛋白Bax的表达呈上调趋势，而抑凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1则受到表达抑制。 综上所述，JZ004和样4作为新型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂对胰腺癌、白血病、肺癌、乳腺癌、结肠癌等肿瘤细胞的增殖具而且有明显的抑制作用。其中JZ004对结肠癌细胞具有显著的阻滞细胞周期和诱导凋亡作用，而进一步研究显示其阻滞细胞周期作用可能由p21蛋白过表达导致，而诱导凋亡机制可能与Bcl-2家族蛋白表达水平变化有关。提示以JZ004为代表的一类新型HDACi具有成为肿瘤临床化疗药物的潜能。
在肿瘤的发生和发展过程中,表观遗传学修饰起着非常重要的作用。组蛋白修饰是其中的主要方式之一,主要包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等。

结论在合成的10种大黄素衍生物中，E19对K562、K562/G01细胞有明显的抑制增殖、诱导凋亡的作用，这一过程中，P210Bcr-Abl、p-P210Bcr-Abl及其下游的信号转导通路PI3K/Akt/mTOR、MAPK活化受抑制发挥重要作用。
目的观察干扰素-α(Interferon-α, IFN-a)联合高三尖杉酯碱(Homoharriselleck公司ng-tonine, HHT)对慢性髓细胞白血病急红变细胞株K562的体外增殖抑制、凋亡、细胞周期及P-catenin表达的影响。 方法采用MTT法检测IFN-α单用和IFN-α联合HHT对K562细胞的增殖抑制作用；采用流式细胞术检测药物单用或联用前后K562细胞的细胞周期分布及凋亡率,RT-PCR及western bl很少ot方法检测β-catenin的表达。 结果①对细胞增殖抑制作用的影响IFN-a单用时,各浓度组(0,1000IU/ml,2000IU/ml,5000IU/ml和10000IU/ml)对K562细胞均无抑制作用,不同浓度HHT(10ng-100ng/ml之间)分别作用K562细胞24h、48h和72h,经改良寇氏法计算,培Bcr-Abl抑制剂养24h,48h,72h的半数抑制浓度(IC50)分别为：80.68ng/ml,56.78ng/ml,35.39ng/ml, HHT对K562细胞具有生长抑制作用,增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性。确定HHT的工作浓度及作用时间分别为lOng/ml与48h。IFN-a组,HHT组及两药联合组的细胞增殖活力分别为空白对照组的(100.32±8.65)%、(81.07±5.20)%和(63.51±2.48)%。

联合应用PJ34和SAHA的HepG2细胞凋亡率明显高于单独应用PJ34或SAHA,差异具有统计学意义(p
第一部分组蛋白去乙酰化酶在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义 目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)在膀胱尿路上皮癌中的表达水平及活性变化,以检验HDAC抑制剂对我国膀胱癌患者的适用性,并为药物选择提供依据。方法应用蛋白印迹技术没有检测40例膀胱尿路上皮癌及正常尿路上皮中HDAC1-HDAC3的表达；用酶活性试剂盒检测膀胱尿路上皮癌组织和正常尿路上皮中HDAC的活性；统计学分析膀胱组织中HDAC的表达、活性与肿瘤分级、分期、年龄的关系。 结果我国膀胱尿路上皮癌患者中存在HDAC1和HDAC2的高表达；膀胱尿路上皮癌中的HDAC活性也许明显高于对照；HDAC1的表达在高级别尿路上皮癌中较低级别更高。 结论我国膀胱尿路上皮癌患者肿瘤组织中存在HDAC高表达和高活性,提示HDAC抑制剂对我国膀胱尿路上皮癌患者有效,HDAC抑制剂可为膀胱癌临床治疗提供新的途径。 第二部分组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA及MS-275对膀胱尿路上皮癌抑制作用的研什么究 目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂TSA及MS-275对膀胱癌细胞抑制作用,确定两者是否对膀胱尿路上皮癌有效及相关机制。 方法在TSA及MS-275作用前及作用后：MTT法测定膀胱癌T24细胞系细胞增殖的抑制作用；酶活性试剂盒检测T24细胞HDAC酶活性；蛋白印迹技术检测T24细胞乙酰化组蛋白3的表达水平；流式细胞仪检测T24细胞凋亡情况；倒置相差显微镜观察细胞形态变化。

在第三部分中,着重于LASS2影响HCCLM3细胞对酸性微环境应答的研究,分三组实验进行。 1、在酸性微环境中,LASS2对HCCLM3细胞溶酶体影响的研究: 我们使用吖啶橙染料对活细胞的溶酶体进行染色,使用激光共聚焦显微镜对活细胞进行观测。成像结果显示,当培养基由碱性(pH 7.4)变为酸性(pH6.6)时,对照组细胞内的溶酶体由核周向细胞边缘及细胞触角内迁移Bcl-2抑制剂,而LASS2组细胞内溶酶体的位置无改变。 2、在酸性微环境中,LASS2对HCCLM3细胞MMP-2影响的研究: 当LASS2组与对照组细胞分别用不同pH值(pH 7.4、pH 7.0、pH 6.6)的细胞培养基培养后,通过对细胞蛋白及无血清细胞培养上清用MMP-2抗体进行western blot检测,结果显示,LASS2基因对细胞内不的MMP-2合成并无影响,但抑制细胞MMP-2的分泌。而以明胶(A型)为底物的进行Zymography分析及细胞原位酶谱实验,结果显示LASS2组细胞MMP-2的激活受到了明显的抑制。当细胞外周微环境向酸性变化时,LASS2依然抑制MMP-2的分泌与激活。 3、在酸性微环境中,LASS2对HCCLM3细胞转移影响的研究: 体外肿瘤细胞侵Selleck Compound C袭实验、迁移实验、黏附实验证实,当细胞外周微环境向酸性变化时,LASS2依然明显抑制HCCLM3细胞的转移。 上述结果进一步证实,LASS2蛋白结合ATP6L亚基后,通过抑制ATP6L在细胞内的移动,不仅导致V-ATPase的失活,还导致了肿瘤细胞内的溶酶体在酸性微环境的下无法从胞核周向细胞触角及细胞膜边缘迁移,从而导致肿瘤细胞MMP-2的分泌与激活受到明显的抑制,并造成肿瘤细胞在酸性微环境下的转移能力无明显改变。