Y27632调控小鼠胚胎干细胞自我更新的miRNA芯片数据分析 目的：更全面地了解YES细胞体系与常规ES细胞的差异,并从中提取更多的转录后调控分子信息,以期发现新的全能性相关分子事件。 结果：将本研究发现的Y-ES细胞与ES细胞的差异表达miRNA与文献报道的ES细胞与epiS细胞的miRNA差异表达谱进行比对发现,两组差异表达谱重叠较少,在27条差异表达miRNA中仅有5条与之相同,提示Y-ES细胞处于不同于原始态全能性和始发态全能性的中间状态。对Y-ES细胞中上调的miRNA进行功能分析发现,8条常规分子通路可能受到潜在调控,其中包括粘着斑信号,Wnt信号通路和ErbB信号通路等。继而,对Y-ES细胞,ES细胞和EB的差异表达miRNA进行的分类比对分析发现,6条miRNA在Y-ES细胞和ES细胞维持高表达而在分化的EB样本中显著下调,另外16条miRNA在Y-ES细胞和ES细胞中低表达而在EB中高表达。这些miRNA作为全能性和分化相关的靶点,用定量RT-PCR进行表达验证,确定了全能性样本中高表达的5条miRNA及分化样本高表达的3条miRNA具有超过两倍的差异。对两组miRNA进行功能分析,分别发现13条和5条常规分子信号通路可能受到这些miRNA调控的信号通路,其中粘着斑(Focaladhesion)和ErbB信号通路具有较大相关性和研究价值。采用蛋白相互作用数据库分别对这两条通路与全能性核心转录因子网络进行相互作用预测,选取预测的关节节点进行蛋白表达验证,结果发现Y27632抑制了β-GSK3和β-ERK水平,维持了β-catenin的表达,并上调了c-Myc表达,提示这些信号信号在Y27632维持ES细胞自我更新过程中具有重要作用。
也许 结论：Y-ES细胞可能处于与ES细胞及epiS细胞均不同的全能性状态。Y27632通过上调c-Myc作用参与ES细胞全能性调控网络；β-GSK3, p-ERK和β-catenin也可能参与了Y27632维持ES细胞自我更新的作用。
本研究利用microarray和RNA-seq等手段，对从国内外不同实验室来源的猪iPS细胞株进行了测定分析，获得了多维度的基因表达数据,并通过系统生物学整合分析深入探讨了猪iPS细胞多能性维持的分子机理。 利用基因芯片初步鉴定重编程完成情况，同时与已报道建系猪iPS基因表达谱比较，探讨猪iPS细胞多能性维持的调控网络。结果表明完全重编程的iPS细胞比部分重编程的iPS细胞高表达EPCAM，该基因可作为诱导猪多能性细胞的标记物。通过比较JAK-STAT,
NOTCH, TGFB1, WNT和VEGF通路相关基因在猪、人和小鼠多能性细胞中的表达情况，解析了猪多能性和自我更新维持的特性。na http://www.selleckchem.cn/products/BIBF1120.html ve状态特异的标记基因KLF2/4/5和TBX3在猪iPS中没有上调，但primed状态的标记基因OTX2和FABP7在猪iPS中上调。同时， DLK1-DIO3相关基因在猪iPS中异常表达，这能够解释目前较少有嵌合猪产生的报道。这些结果表明目前诱导和培养体系下得到的猪iPS接近于人，而区分于小鼠多能性维持状态。 利用通过RNA-seq比较了猪iPS细胞和成体细胞的基因表达谱，同时分析了不同生长因子依赖的猪iPS细胞基因表达谱的差异，这些差异基因可能为鉴定猪iPS细胞多能性维持的关键转录因子提供参考。对分析出的差异基因进行功能富集分析，从而揭示与猪多能性维持相关的重要细胞信号通路和代谢活动。分析结果表明猪iPS上调基因富集与“核糖体”，“染色质重塑”以及“细胞周期”等通路。我们的分析表明RNA剪接对于调控猪细胞的多能性具有关键作用，推算出了猪iPS细胞和成体细胞中出现的可变剪切体。我们以多能性维持核心转录因子SALL4为例说明了其可变剪切的模式，并通过RT-PCT和定量PCR进行了验证。本文最后分析了猪iPS中上调基因在猪早期胚胎发育过程中动态表达的情况。由此，建立了猪多能性维持的基因表达图谱，以上分析对于建立Na
ve状态的猪iPS细胞系具有参考意义。
胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）是从早期囊胚内细胞团分离而出的多能性细胞。这些细胞能够体外培养无限增殖，维持自我更新，并且在特定条件下可以分化成为机体几乎所有类型的细胞。因此，ES细胞被认为是研究早期胚胎发育最重要的模型。对ES细胞的多能性维持和定向分化的研究能够为胚胎发育，再生医学和器官移植等临床医学研究提供重要的理论指导。 可能 在ES细胞中，多能性和定向分化的平衡被严格调控并处于一个相对稳定的状态。而这种平衡的维持，既需要转录因子及其构成的信号调控网络的调控，也有着来自表观遗传方面的调节，而microRNA（miRNA）作为一种重要的表观调控机制在ES细胞的多能性维持和分化调节中发挥着重要的作用。 研究发现，强烈的外部刺激，例如瞬间的低pH值胁迫，低氧胁迫等，均有利于诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPS细胞）的形成。5-氨基咪唑-4-甲酰胺-呋喃核糖苷（5-Aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleotide，AICAR）是一种膜通透性的AMP-激活的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）的激活剂。它可以作为AMP的类似物，在不影响ATP，ADP和AMP水平的条件下激活能量代谢调控的关键蛋白激酶AMPK，从而抑制合成代谢，使细胞处于能量胁迫状态，影响ES细胞的多能性维持，但是其在ES细胞干性维持中的作用尚不清楚。本研究对AICAR处理及未处理的J1小鼠ES细胞进行研究，旨在揭示AICAR在ES细胞干性维持中的作用。主要的研究内容及结果如下： 1.